癌—睪丸抗原SSX2在肝細胞癌中的表達研究

黎鵬　鄭慧玲　韋立軍

【摘要】 目的 檢測癌-睪丸抗原SSX2在肝細胞癌組織中的表達。方法 應用RT-PCR技術， 對40例肝細胞癌的癌組織及相應癌旁組織進行SSX2基因的mRNA檢測。結果 肝細胞癌組織中SSX2 mRNA表達陽性率為27.5%（11/40）， 而相應的癌旁組織無SSX2 mRNA表達陽性率為0（0/40）， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.001）。統計學分析顯示SSX2表達與AFP陽性率、HbsAg陽性率、病理分級、肝細胞癌腫瘤大小、肝細胞癌是否伴有肝硬化的情況等相關的臨床指標均無關 （P>0.05）。結論 SSX2在HCC中呈低頻率的表達。

【關鍵詞】 肝細胞癌；癌-睪丸抗原；SSX2；逆轉錄-聚合酶鏈反應

肝細胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我國常見的惡性腫瘤， 目前臨床治療已積累了豐富經驗， 在腫瘤免疫治療方面也有了一定的進展。目前已發現的腫瘤相關抗原較多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一種。因為這類抗原只在睪丸及廣泛的腫瘤組織有表達。在CT抗原中有一種SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表達研究目前已有報道[2， 3]， 但在廣東地區未見報道， 為了了解其在廣東地區HCC的表達情況， 本研究應用RT-PCR技術檢測HCC及相應癌旁組織， 初步探討廣東地區HCC中SSX2基因表達的意義。

1 材料與方法

1. 1 標本來源 40例HCC及相應癌旁肝組織標本取自附院， 所有病例均經病理查實。標本于外科手術切除后即液氮凍存備用。

1. 2 RT-PCR分析 總RNA提取采用異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA質量檢測方法見參考文獻[4]。取2 ?g總RNA進行cDNA合成 （逆轉錄試劑盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA進行RT-PCR檢測 （30 ?l反應體系）， 設睪丸cDNA為陽性對照， 不加模板為空白對照。基因序列，經計算機輔助設計，使用Omiga 2軟件設計引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列為：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火溫度為58℃， 擴增產物大小為434 bp。PCR反應完畢進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。

1. 3 統計學方法 采用最新版本SPSS19.0統計軟件包進行統計學分析。

2 結果

2. 1 SSX2在HCC組織中低表達 癌旁肝組織SSX2表達陽性率為0（0/40）， HCC組織SSX2表達陽性率為27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表達與臨床指標無相關關系 SSX2與AFP陽性率、HBsAg陽性率、病理分級、HCC腫瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情況等相關的臨床指標均無關 （P>0.05）， 結果見表1。

3 討論

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5種基因， 其中SSX2屬于腫瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者發生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清檢測法（SEREX）分析中發現， 被命名為HOM-MEL-40蛋白， 進一步通過Northern Blot技術證實其為SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表達率在30%～46.7%之間。Chen等[2]檢測30例肝細胞癌中SSX2呈較高的表達率為46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低頻率的表達率在30%～35.7%之間。

本研究RT-PCR檢測結果為SSX2在HCC組織的mRNA表達率為27.5% （11/40）， 相應的癌旁肝組織均未檢測到SSX2的mRNA， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.001）， 提示SSX2在HCC組織的表達高于癌旁肝組織。對HCC的SSX2檢測與臨床指標之間的關系進行分析， 發現在6項指標中， SSX2 在HBsAg陽性和陰性的HCC組織表達率分別是22.58%和44.44%， 有表達差異， 但是這個差異并無統計學意義（P>0.05）；在其余的5個指標中， 在AFP陽性和陰性， Ⅰ～Ⅱ級和Ⅲ～Ⅳ級的病理分級， 直徑>5 cm和≤5 cm的腫瘤， 有無肝硬化及在患者>45歲和≤45歲的HCC組織中， SSX2的表達率都很接近， 統計學結果均無相關性（P>0.05）。本項目的研究結果顯示癌-睪丸抗原SSX2在廣東地區的HCC組織中表達率稍低于以往的研究結果， 是因為標本例數的原因還是不同地域組織的原因， 有待于進一步的研究發現；而SSX2的表達情況與患者年齡、性別、病理分級、腫瘤大小、HBsAg及AFP的水平等無關， 則與以往的報道一致。

參考文獻

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，農蔚霞，宋瓊，等.癌-睪丸抗原SSX基因在肝細胞癌中mRNA水平的表達及意義.中國醫藥導報， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint

【摘要】 目的 檢測癌-睪丸抗原SSX2在肝細胞癌組織中的表達。方法 應用RT-PCR技術， 對40例肝細胞癌的癌組織及相應癌旁組織進行SSX2基因的mRNA檢測。結果 肝細胞癌組織中SSX2 mRNA表達陽性率為27.5%（11/40）， 而相應的癌旁組織無SSX2 mRNA表達陽性率為0（0/40）， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.001）。統計學分析顯示SSX2表達與AFP陽性率、HbsAg陽性率、病理分級、肝細胞癌腫瘤大小、肝細胞癌是否伴有肝硬化的情況等相關的臨床指標均無關 （P>0.05）。結論 SSX2在HCC中呈低頻率的表達。

【關鍵詞】 肝細胞癌；癌-睪丸抗原；SSX2；逆轉錄-聚合酶鏈反應

肝細胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我國常見的惡性腫瘤， 目前臨床治療已積累了豐富經驗， 在腫瘤免疫治療方面也有了一定的進展。目前已發現的腫瘤相關抗原較多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一種。因為這類抗原只在睪丸及廣泛的腫瘤組織有表達。在CT抗原中有一種SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表達研究目前已有報道[2， 3]， 但在廣東地區未見報道， 為了了解其在廣東地區HCC的表達情況， 本研究應用RT-PCR技術檢測HCC及相應癌旁組織， 初步探討廣東地區HCC中SSX2基因表達的意義。

1 材料與方法

1. 1 標本來源 40例HCC及相應癌旁肝組織標本取自附院， 所有病例均經病理查實。標本于外科手術切除后即液氮凍存備用。

1. 2 RT-PCR分析 總RNA提取采用異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA質量檢測方法見參考文獻[4]。取2 ?g總RNA進行cDNA合成 （逆轉錄試劑盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA進行RT-PCR檢測 （30 ?l反應體系）， 設睪丸cDNA為陽性對照， 不加模板為空白對照。基因序列，經計算機輔助設計，使用Omiga 2軟件設計引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列為：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火溫度為58℃， 擴增產物大小為434 bp。PCR反應完畢進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。

1. 3 統計學方法 采用最新版本SPSS19.0統計軟件包進行統計學分析。

2 結果

2. 1 SSX2在HCC組織中低表達 癌旁肝組織SSX2表達陽性率為0（0/40）， HCC組織SSX2表達陽性率為27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表達與臨床指標無相關關系 SSX2與AFP陽性率、HBsAg陽性率、病理分級、HCC腫瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情況等相關的臨床指標均無關 （P>0.05）， 結果見表1。

3 討論

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5種基因， 其中SSX2屬于腫瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者發生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清檢測法（SEREX）分析中發現， 被命名為HOM-MEL-40蛋白， 進一步通過Northern Blot技術證實其為SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表達率在30%～46.7%之間。Chen等[2]檢測30例肝細胞癌中SSX2呈較高的表達率為46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低頻率的表達率在30%～35.7%之間。

本研究RT-PCR檢測結果為SSX2在HCC組織的mRNA表達率為27.5% （11/40）， 相應的癌旁肝組織均未檢測到SSX2的mRNA， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.001）， 提示SSX2在HCC組織的表達高于癌旁肝組織。對HCC的SSX2檢測與臨床指標之間的關系進行分析， 發現在6項指標中， SSX2 在HBsAg陽性和陰性的HCC組織表達率分別是22.58%和44.44%， 有表達差異， 但是這個差異并無統計學意義（P>0.05）；在其余的5個指標中， 在AFP陽性和陰性， Ⅰ～Ⅱ級和Ⅲ～Ⅳ級的病理分級， 直徑>5 cm和≤5 cm的腫瘤， 有無肝硬化及在患者>45歲和≤45歲的HCC組織中， SSX2的表達率都很接近， 統計學結果均無相關性（P>0.05）。本項目的研究結果顯示癌-睪丸抗原SSX2在廣東地區的HCC組織中表達率稍低于以往的研究結果， 是因為標本例數的原因還是不同地域組織的原因， 有待于進一步的研究發現；而SSX2的表達情況與患者年齡、性別、病理分級、腫瘤大小、HBsAg及AFP的水平等無關， 則與以往的報道一致。

參考文獻

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，農蔚霞，宋瓊，等.癌-睪丸抗原SSX基因在肝細胞癌中mRNA水平的表達及意義.中國醫藥導報， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint

【摘要】 目的 檢測癌-睪丸抗原SSX2在肝細胞癌組織中的表達。方法 應用RT-PCR技術， 對40例肝細胞癌的癌組織及相應癌旁組織進行SSX2基因的mRNA檢測。結果 肝細胞癌組織中SSX2 mRNA表達陽性率為27.5%（11/40）， 而相應的癌旁組織無SSX2 mRNA表達陽性率為0（0/40）， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.001）。統計學分析顯示SSX2表達與AFP陽性率、HbsAg陽性率、病理分級、肝細胞癌腫瘤大小、肝細胞癌是否伴有肝硬化的情況等相關的臨床指標均無關 （P>0.05）。結論 SSX2在HCC中呈低頻率的表達。

【關鍵詞】 肝細胞癌；癌-睪丸抗原；SSX2；逆轉錄-聚合酶鏈反應

肝細胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我國常見的惡性腫瘤， 目前臨床治療已積累了豐富經驗， 在腫瘤免疫治療方面也有了一定的進展。目前已發現的腫瘤相關抗原較多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一種。因為這類抗原只在睪丸及廣泛的腫瘤組織有表達。在CT抗原中有一種SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表達研究目前已有報道[2， 3]， 但在廣東地區未見報道， 為了了解其在廣東地區HCC的表達情況， 本研究應用RT-PCR技術檢測HCC及相應癌旁組織， 初步探討廣東地區HCC中SSX2基因表達的意義。

1 材料與方法

1. 1 標本來源 40例HCC及相應癌旁肝組織標本取自附院， 所有病例均經病理查實。標本于外科手術切除后即液氮凍存備用。

1. 2 RT-PCR分析 總RNA提取采用異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA質量檢測方法見參考文獻[4]。取2 ?g總RNA進行cDNA合成 （逆轉錄試劑盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA進行RT-PCR檢測 （30 ?l反應體系）， 設睪丸cDNA為陽性對照， 不加模板為空白對照。基因序列，經計算機輔助設計，使用Omiga 2軟件設計引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列為：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火溫度為58℃， 擴增產物大小為434 bp。PCR反應完畢進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。

1. 3 統計學方法 采用最新版本SPSS19.0統計軟件包進行統計學分析。

2 結果

2. 1 SSX2在HCC組織中低表達 癌旁肝組織SSX2表達陽性率為0（0/40）， HCC組織SSX2表達陽性率為27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表達與臨床指標無相關關系 SSX2與AFP陽性率、HBsAg陽性率、病理分級、HCC腫瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情況等相關的臨床指標均無關 （P>0.05）， 結果見表1。

3 討論

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5種基因， 其中SSX2屬于腫瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者發生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清檢測法（SEREX）分析中發現， 被命名為HOM-MEL-40蛋白， 進一步通過Northern Blot技術證實其為SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表達率在30%～46.7%之間。Chen等[2]檢測30例肝細胞癌中SSX2呈較高的表達率為46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低頻率的表達率在30%～35.7%之間。

本研究RT-PCR檢測結果為SSX2在HCC組織的mRNA表達率為27.5% （11/40）， 相應的癌旁肝組織均未檢測到SSX2的mRNA， 兩組比較差異有統計學意義（P<0.001）， 提示SSX2在HCC組織的表達高于癌旁肝組織。對HCC的SSX2檢測與臨床指標之間的關系進行分析， 發現在6項指標中， SSX2 在HBsAg陽性和陰性的HCC組織表達率分別是22.58%和44.44%， 有表達差異， 但是這個差異并無統計學意義（P>0.05）；在其余的5個指標中， 在AFP陽性和陰性， Ⅰ～Ⅱ級和Ⅲ～Ⅳ級的病理分級， 直徑>5 cm和≤5 cm的腫瘤， 有無肝硬化及在患者>45歲和≤45歲的HCC組織中， SSX2的表達率都很接近， 統計學結果均無相關性（P>0.05）。本項目的研究結果顯示癌-睪丸抗原SSX2在廣東地區的HCC組織中表達率稍低于以往的研究結果， 是因為標本例數的原因還是不同地域組織的原因， 有待于進一步的研究發現；而SSX2的表達情況與患者年齡、性別、病理分級、腫瘤大小、HBsAg及AFP的水平等無關， 則與以往的報道一致。

參考文獻

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，農蔚霞，宋瓊，等.癌-睪丸抗原SSX基因在肝細胞癌中mRNA水平的表達及意義.中國醫藥導報， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint