癌—睪丸抗原SSX2在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)研究

黎鵬　鄭慧玲　韋立軍

【摘要】 目的 檢測癌-睪丸抗原SSX2在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)。方法 應(yīng)用RT-PCR技術(shù)， 對(duì)40例肝細(xì)胞癌的癌組織及相應(yīng)癌旁組織進(jìn)行SSX2基因的mRNA檢測。結(jié)果 肝細(xì)胞癌組織中SSX2 mRNA表達(dá)陽性率為27.5%（11/40）， 而相應(yīng)的癌旁組織無SSX2 mRNA表達(dá)陽性率為0（0/40）， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示SSX2表達(dá)與AFP陽性率、HbsAg陽性率、病理分級(jí)、肝細(xì)胞癌腫瘤大小、肝細(xì)胞癌是否伴有肝硬化的情況等相關(guān)的臨床指標(biāo)均無關(guān) （P>0.05）。結(jié)論 SSX2在HCC中呈低頻率的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】 肝細(xì)胞癌；癌-睪丸抗原；SSX2；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

肝細(xì)胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我國常見的惡性腫瘤， 目前臨床治療已積累了豐富經(jīng)驗(yàn)， 在腫瘤免疫治療方面也有了一定的進(jìn)展。目前已發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)抗原較多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一種。因?yàn)檫@類抗原只在睪丸及廣泛的腫瘤組織有表達(dá)。在CT抗原中有一種SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表達(dá)研究目前已有報(bào)道[2， 3]， 但在廣東地區(qū)未見報(bào)道， 為了了解其在廣東地區(qū)HCC的表達(dá)情況， 本研究應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測HCC及相應(yīng)癌旁組織， 初步探討廣東地區(qū)HCC中SSX2基因表達(dá)的意義。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本來源 40例HCC及相應(yīng)癌旁肝組織標(biāo)本取自附院， 所有病例均經(jīng)病理查實(shí)。標(biāo)本于外科手術(shù)切除后即液氮凍存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2 RT-PCR分析 總RNA提取采用異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA質(zhì)量檢測方法見參考文獻(xiàn)[4]。取2 ?g總RNA進(jìn)行cDNA合成 （逆轉(zhuǎn)錄試劑盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA進(jìn)行RT-PCR檢測 （30 ?l反應(yīng)體系）， 設(shè)睪丸cDNA為陽性對(duì)照， 不加模板為空白對(duì)照。基因序列，經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，使用Omiga 2軟件設(shè)計(jì)引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列為：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火溫度為58℃， 擴(kuò)增產(chǎn)物大小為434 bp。PCR反應(yīng)完畢進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用最新版本SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2. 1 SSX2在HCC組織中低表達(dá) 癌旁肝組織SSX2表達(dá)陽性率為0（0/40）， HCC組織SSX2表達(dá)陽性率為27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表達(dá)與臨床指標(biāo)無相關(guān)關(guān)系 SSX2與AFP陽性率、HBsAg陽性率、病理分級(jí)、HCC腫瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情況等相關(guān)的臨床指標(biāo)均無關(guān) （P>0.05）， 結(jié)果見表1。

3 討論

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5種基因， 其中SSX2屬于腫瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者發(fā)生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清檢測法（SEREX）分析中發(fā)現(xiàn)， 被命名為HOM-MEL-40蛋白， 進(jìn)一步通過Northern Blot技術(shù)證實(shí)其為SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表達(dá)率在30%～46.7%之間。Chen等[2]檢測30例肝細(xì)胞癌中SSX2呈較高的表達(dá)率為46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低頻率的表達(dá)率在30%～35.7%之間。

本研究RT-PCR檢測結(jié)果為SSX2在HCC組織的mRNA表達(dá)率為27.5% （11/40）， 相應(yīng)的癌旁肝組織均未檢測到SSX2的mRNA， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）， 提示SSX2在HCC組織的表達(dá)高于癌旁肝組織。對(duì)HCC的SSX2檢測與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系進(jìn)行分析， 發(fā)現(xiàn)在6項(xiàng)指標(biāo)中， SSX2 在HBsAg陽性和陰性的HCC組織表達(dá)率分別是22.58%和44.44%， 有表達(dá)差異， 但是這個(gè)差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在其余的5個(gè)指標(biāo)中， 在AFP陽性和陰性， Ⅰ～Ⅱ級(jí)和Ⅲ～Ⅳ級(jí)的病理分級(jí)， 直徑>5 cm和≤5 cm的腫瘤， 有無肝硬化及在患者>45歲和≤45歲的HCC組織中， SSX2的表達(dá)率都很接近， 統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果均無相關(guān)性（P>0.05）。本項(xiàng)目的研究結(jié)果顯示癌-睪丸抗原SSX2在廣東地區(qū)的HCC組織中表達(dá)率稍低于以往的研究結(jié)果， 是因?yàn)闃?biāo)本例數(shù)的原因還是不同地域組織的原因， 有待于進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)；而SSX2的表達(dá)情況與患者年齡、性別、病理分級(jí)、腫瘤大小、HBsAg及AFP的水平等無關(guān)， 則與以往的報(bào)道一致。

參考文獻(xiàn)

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，農(nóng)蔚霞，宋瓊，等.癌-睪丸抗原SSX基因在肝細(xì)胞癌中mRNA水平的表達(dá)及意義.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint

【摘要】 目的 檢測癌-睪丸抗原SSX2在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)。方法 應(yīng)用RT-PCR技術(shù)， 對(duì)40例肝細(xì)胞癌的癌組織及相應(yīng)癌旁組織進(jìn)行SSX2基因的mRNA檢測。結(jié)果 肝細(xì)胞癌組織中SSX2 mRNA表達(dá)陽性率為27.5%（11/40）， 而相應(yīng)的癌旁組織無SSX2 mRNA表達(dá)陽性率為0（0/40）， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示SSX2表達(dá)與AFP陽性率、HbsAg陽性率、病理分級(jí)、肝細(xì)胞癌腫瘤大小、肝細(xì)胞癌是否伴有肝硬化的情況等相關(guān)的臨床指標(biāo)均無關(guān) （P>0.05）。結(jié)論 SSX2在HCC中呈低頻率的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】 肝細(xì)胞癌；癌-睪丸抗原；SSX2；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

肝細(xì)胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我國常見的惡性腫瘤， 目前臨床治療已積累了豐富經(jīng)驗(yàn)， 在腫瘤免疫治療方面也有了一定的進(jìn)展。目前已發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)抗原較多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一種。因?yàn)檫@類抗原只在睪丸及廣泛的腫瘤組織有表達(dá)。在CT抗原中有一種SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表達(dá)研究目前已有報(bào)道[2， 3]， 但在廣東地區(qū)未見報(bào)道， 為了了解其在廣東地區(qū)HCC的表達(dá)情況， 本研究應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測HCC及相應(yīng)癌旁組織， 初步探討廣東地區(qū)HCC中SSX2基因表達(dá)的意義。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本來源 40例HCC及相應(yīng)癌旁肝組織標(biāo)本取自附院， 所有病例均經(jīng)病理查實(shí)。標(biāo)本于外科手術(shù)切除后即液氮凍存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2 RT-PCR分析 總RNA提取采用異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA質(zhì)量檢測方法見參考文獻(xiàn)[4]。取2 ?g總RNA進(jìn)行cDNA合成 （逆轉(zhuǎn)錄試劑盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA進(jìn)行RT-PCR檢測 （30 ?l反應(yīng)體系）， 設(shè)睪丸cDNA為陽性對(duì)照， 不加模板為空白對(duì)照。基因序列，經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，使用Omiga 2軟件設(shè)計(jì)引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列為：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火溫度為58℃， 擴(kuò)增產(chǎn)物大小為434 bp。PCR反應(yīng)完畢進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用最新版本SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2. 1 SSX2在HCC組織中低表達(dá) 癌旁肝組織SSX2表達(dá)陽性率為0（0/40）， HCC組織SSX2表達(dá)陽性率為27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表達(dá)與臨床指標(biāo)無相關(guān)關(guān)系 SSX2與AFP陽性率、HBsAg陽性率、病理分級(jí)、HCC腫瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情況等相關(guān)的臨床指標(biāo)均無關(guān) （P>0.05）， 結(jié)果見表1。

3 討論

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5種基因， 其中SSX2屬于腫瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者發(fā)生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清檢測法（SEREX）分析中發(fā)現(xiàn)， 被命名為HOM-MEL-40蛋白， 進(jìn)一步通過Northern Blot技術(shù)證實(shí)其為SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表達(dá)率在30%～46.7%之間。Chen等[2]檢測30例肝細(xì)胞癌中SSX2呈較高的表達(dá)率為46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低頻率的表達(dá)率在30%～35.7%之間。

本研究RT-PCR檢測結(jié)果為SSX2在HCC組織的mRNA表達(dá)率為27.5% （11/40）， 相應(yīng)的癌旁肝組織均未檢測到SSX2的mRNA， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）， 提示SSX2在HCC組織的表達(dá)高于癌旁肝組織。對(duì)HCC的SSX2檢測與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系進(jìn)行分析， 發(fā)現(xiàn)在6項(xiàng)指標(biāo)中， SSX2 在HBsAg陽性和陰性的HCC組織表達(dá)率分別是22.58%和44.44%， 有表達(dá)差異， 但是這個(gè)差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在其余的5個(gè)指標(biāo)中， 在AFP陽性和陰性， Ⅰ～Ⅱ級(jí)和Ⅲ～Ⅳ級(jí)的病理分級(jí)， 直徑>5 cm和≤5 cm的腫瘤， 有無肝硬化及在患者>45歲和≤45歲的HCC組織中， SSX2的表達(dá)率都很接近， 統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果均無相關(guān)性（P>0.05）。本項(xiàng)目的研究結(jié)果顯示癌-睪丸抗原SSX2在廣東地區(qū)的HCC組織中表達(dá)率稍低于以往的研究結(jié)果， 是因?yàn)闃?biāo)本例數(shù)的原因還是不同地域組織的原因， 有待于進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)；而SSX2的表達(dá)情況與患者年齡、性別、病理分級(jí)、腫瘤大小、HBsAg及AFP的水平等無關(guān)， 則與以往的報(bào)道一致。

參考文獻(xiàn)

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，農(nóng)蔚霞，宋瓊，等.癌-睪丸抗原SSX基因在肝細(xì)胞癌中mRNA水平的表達(dá)及意義.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint

【摘要】 目的 檢測癌-睪丸抗原SSX2在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)。方法 應(yīng)用RT-PCR技術(shù)， 對(duì)40例肝細(xì)胞癌的癌組織及相應(yīng)癌旁組織進(jìn)行SSX2基因的mRNA檢測。結(jié)果 肝細(xì)胞癌組織中SSX2 mRNA表達(dá)陽性率為27.5%（11/40）， 而相應(yīng)的癌旁組織無SSX2 mRNA表達(dá)陽性率為0（0/40）， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示SSX2表達(dá)與AFP陽性率、HbsAg陽性率、病理分級(jí)、肝細(xì)胞癌腫瘤大小、肝細(xì)胞癌是否伴有肝硬化的情況等相關(guān)的臨床指標(biāo)均無關(guān) （P>0.05）。結(jié)論 SSX2在HCC中呈低頻率的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】 肝細(xì)胞癌；癌-睪丸抗原；SSX2；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

肝細(xì)胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我國常見的惡性腫瘤， 目前臨床治療已積累了豐富經(jīng)驗(yàn)， 在腫瘤免疫治療方面也有了一定的進(jìn)展。目前已發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)抗原較多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一種。因?yàn)檫@類抗原只在睪丸及廣泛的腫瘤組織有表達(dá)。在CT抗原中有一種SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表達(dá)研究目前已有報(bào)道[2， 3]， 但在廣東地區(qū)未見報(bào)道， 為了了解其在廣東地區(qū)HCC的表達(dá)情況， 本研究應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測HCC及相應(yīng)癌旁組織， 初步探討廣東地區(qū)HCC中SSX2基因表達(dá)的意義。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本來源 40例HCC及相應(yīng)癌旁肝組織標(biāo)本取自附院， 所有病例均經(jīng)病理查實(shí)。標(biāo)本于外科手術(shù)切除后即液氮凍存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2 RT-PCR分析 總RNA提取采用異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA質(zhì)量檢測方法見參考文獻(xiàn)[4]。取2 ?g總RNA進(jìn)行cDNA合成 （逆轉(zhuǎn)錄試劑盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA進(jìn)行RT-PCR檢測 （30 ?l反應(yīng)體系）， 設(shè)睪丸cDNA為陽性對(duì)照， 不加模板為空白對(duì)照。基因序列，經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，使用Omiga 2軟件設(shè)計(jì)引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列為：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火溫度為58℃， 擴(kuò)增產(chǎn)物大小為434 bp。PCR反應(yīng)完畢進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用最新版本SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2. 1 SSX2在HCC組織中低表達(dá) 癌旁肝組織SSX2表達(dá)陽性率為0（0/40）， HCC組織SSX2表達(dá)陽性率為27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表達(dá)與臨床指標(biāo)無相關(guān)關(guān)系 SSX2與AFP陽性率、HBsAg陽性率、病理分級(jí)、HCC腫瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情況等相關(guān)的臨床指標(biāo)均無關(guān) （P>0.05）， 結(jié)果見表1。

3 討論

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5種基因， 其中SSX2屬于腫瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者發(fā)生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清檢測法（SEREX）分析中發(fā)現(xiàn)， 被命名為HOM-MEL-40蛋白， 進(jìn)一步通過Northern Blot技術(shù)證實(shí)其為SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表達(dá)率在30%～46.7%之間。Chen等[2]檢測30例肝細(xì)胞癌中SSX2呈較高的表達(dá)率為46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低頻率的表達(dá)率在30%～35.7%之間。

本研究RT-PCR檢測結(jié)果為SSX2在HCC組織的mRNA表達(dá)率為27.5% （11/40）， 相應(yīng)的癌旁肝組織均未檢測到SSX2的mRNA， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）， 提示SSX2在HCC組織的表達(dá)高于癌旁肝組織。對(duì)HCC的SSX2檢測與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系進(jìn)行分析， 發(fā)現(xiàn)在6項(xiàng)指標(biāo)中， SSX2 在HBsAg陽性和陰性的HCC組織表達(dá)率分別是22.58%和44.44%， 有表達(dá)差異， 但是這個(gè)差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在其余的5個(gè)指標(biāo)中， 在AFP陽性和陰性， Ⅰ～Ⅱ級(jí)和Ⅲ～Ⅳ級(jí)的病理分級(jí)， 直徑>5 cm和≤5 cm的腫瘤， 有無肝硬化及在患者>45歲和≤45歲的HCC組織中， SSX2的表達(dá)率都很接近， 統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果均無相關(guān)性（P>0.05）。本項(xiàng)目的研究結(jié)果顯示癌-睪丸抗原SSX2在廣東地區(qū)的HCC組織中表達(dá)率稍低于以往的研究結(jié)果， 是因?yàn)闃?biāo)本例數(shù)的原因還是不同地域組織的原因， 有待于進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)；而SSX2的表達(dá)情況與患者年齡、性別、病理分級(jí)、腫瘤大小、HBsAg及AFP的水平等無關(guān)， 則與以往的報(bào)道一致。

參考文獻(xiàn)

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，農(nóng)蔚霞，宋瓊，等.癌-睪丸抗原SSX基因在肝細(xì)胞癌中mRNA水平的表達(dá)及意義.中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint