HPLC法測定止咳祛痰靈中次野鳶尾黃素含量研究

金濤

（泰州市人民醫(yī)院，江蘇泰州 225300）

HPLC法測定止咳祛痰靈中次野鳶尾黃素含量研究

金濤

（泰州市人民醫(yī)院，江蘇泰州 225300）

目的：建立止咳祛痰靈中次野鳶尾黃素的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為XBridge C18柱（4.6mm×150mm，5μm），流動相為乙腈-水（30∶70），檢測波長為266nm。結(jié)果：次野鳶尾黃素在0.0402～1.005μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程：Y=5.21×106X-11738.43，r=0.9999（n=6）；加樣回收率為92.87%。結(jié)論：此方法簡便、準確，可用于測定止咳祛痰靈中次野鳶尾黃素的含量。

止咳祛痰靈 次野鳶尾黃素 高效液相色譜

止咳祛痰靈為泰州市中醫(yī)院院內(nèi)制劑，主要由射干、桔梗等四味中藥組成，具有止咳祛痰的功效，用于治療咳嗽、急慢性支氣管炎。該品種收載于《泰州醫(yī)院制劑規(guī)范》，原質(zhì)量標(biāo)準項下僅有鑒別項，未收載含量測定項，不利于藥品質(zhì)量的控制。方中射干為君藥，次野鳶尾黃素為射干中的主要活性成分之一[1]。本實驗擬對止咳祛痰靈中次野鳶尾黃素的含量測定進行研究，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料

Waters2695/2996/Empower高效液相色譜系統(tǒng)。次野鳶尾黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為111557-200602）；止咳祛痰靈樣品（泰州市中醫(yī)院，批號：140121、140520、140528）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：XBridge C18柱（4.6mm×150mm， 5μm）；流動相：乙腈-水（30∶70）；檢測波長：266nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進樣量為10μL。

2.2 對照品溶液的制備精密稱取次野鳶尾黃素對照品適量，加甲醇制成0.0402mg/mL的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備精密量取本品10mL，加乙酸乙酯振搖提取3次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，回收至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備按處方稱取除射干外的藥味，按其制備工藝制成空白制劑，再按“2.3”項下方法制成陰性對照溶液。

2.5 專屬性試驗精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照樣品溶液，在上述色譜條件下，分別注入液相色譜儀。結(jié)果供試品溶液中次野鳶尾黃素峰與其他組分峰分離良好，陰性對照溶液在與次野鳶尾黃素對照品相同保留時間處無吸收峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾，見圖1。

圖1 各組溶液高效液相色譜圖（1-次野鳶尾黃素）

2.6 線性關(guān)系考察精密吸取對照品溶液1、2、5、10、15、25μL分別注入液相色譜儀，以進樣量為X，峰面積為Y，繪制標(biāo)準曲線，回歸方程：Y=5.21× 106X－11738.43，r=0.9999（n=6）。結(jié)果表明，次野鳶尾黃素在0.0402～1.005μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，測得次野鳶尾黃素峰面積，結(jié)果RSD為0.28%。

2.8 重復(fù)性試驗取同一批號的樣品（批號為140528）6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定次野鳶尾黃素的含量。結(jié)果次野鳶尾黃素平均含量為0.027mg/mL，RSD為0.94%。

2.9 穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液，分別在制備后0、2、4、8、16、24h測定次野鳶尾黃素峰面積，結(jié)果RSD為0.52%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.10 加樣回收率試驗精密吸取已知含量為0.027mg/mL的樣品5mL，分別精密加入對照品溶液（0.0243mg/mL）5mL，按供試品溶液制備方法制樣6份，在上述色譜條件下測定，計算，結(jié)果見表1。

2.11 樣品含量測定精密吸取不同批號的樣品，按供試品溶液制備方法制備，在上述色譜條件下，進行含量測定，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

3 討論

3.1 流動相的選擇比較了甲醇-0.2%磷酸（53∶47）、乙腈-0.2%磷酸（39∶61）、乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫、乙腈-水（30∶70）作為流動相的色譜效果[2-5]。結(jié)果表明，以乙腈-水（30∶70）為流動相，次野鳶尾黃素色譜峰分離度好，保留時間適當(dāng)且避免了使用酸作為流動相。

3.2 提取方法的選擇考察了加甲醇超聲提取法及乙酸乙酯提取蒸干加甲醇溶解法，2種方法結(jié)果相近，但甲醇超聲提取法主峰前后雜質(zhì)峰多，故采用乙酸乙酯提取蒸干加甲醇溶解作為提取方法。

[1]邱鷹昆，高玉白，徐碧霞，等.射干的化學(xué)成分研究.中國藥學(xué)雜志，2006，41（15）：1133

[2]國家藥典委員會.中國藥典（一部）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：267

[3]辛蕊華，謝家聲，鄭繼方，等.射干地龍顆粒質(zhì)量標(biāo)準.中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（13），57

[4]趙玥，李國信.HPLC法測定不同采收期鳶尾科3種植物中有效活性成分含量.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，14（11）：39

[5]焦正花，王紅麗，張小華，等.射干口服液質(zhì)量標(biāo)準研究.中國中醫(yī)藥信息雜志，2011，18（12）：62

編輯：吳寧

R284.1

：A

：1672-397X（2014）12-0073-02

金濤（1966-），女，本科學(xué)歷，主任中藥師，中藥學(xué)專業(yè)，從事中藥制劑研究。jt0996@sina.com

2014-09-16