基于金黃膏體外透皮吸收實驗探討其透皮系統的藥對配伍規律

曹穎 王紅 劉俊紅 韓俊泉 劉斌 李棣華 呂沅姍

如意金黃散出自明代陳實功編著的《外科正宗》，由大黃、黃柏、姜黃、白芷、天花粉、天南星、陳皮、甘草、蒼術、厚樸組成，為2010年版《中華人民共和國藥典》(一部)收錄的品種，具有活血散瘀、消腫止痛之功效，臨床用于治療瘡瘍腫痛、丹毒流注、跌打損傷等證［2］。如意金黃散經劑改制備為外用膏劑的金黃膏，應用于臨床多年，療效確切。本實驗以黃柏中小檗堿為指標成分，考察了金黃散全方組及缺姜黃、白芷組和缺姜黃、白芷、天南星、陳皮、厚樸組膏劑中鹽酸小檗堿的體外經皮滲透行為，并探討其不同藥對配伍對其透皮效果的影響。

1 材料與方法

1.1 滲透屏障

雄性wistar 大鼠200～250 g，8 只，2012年3月27日購進，7 周齡，由中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所動物實驗中心提供。將大鼠麻醉后固定四肢，剪去腹部正中線兩側的鼠毛，再用電動剃須刀剃凈絨毛后迅速剝皮，小心剔除皮下脂肪及組織，用濾紙擦拭干凈，得離體鼠皮作為滲透屏障，放入冰箱(－20℃)冷凍保存，共16 塊。

1.2 藥物和試劑

鹽酸小檗堿對照品，購自中國藥品生物制品檢定所，批號:110713-200911。

金黃膏及缺藥膏劑，天津市中醫藥大學第二附屬醫院制劑室提供。金黃散全方組組成為大黃160 g、黃柏160 g、姜黃160 g、白芷160 g、天花粉320 g、天南星64 g、陳皮64 g、甘草64 g、蒼術64 g、厚樸64 g;缺藥方A 組，缺姜黃、白芷;缺藥方B 組，缺姜黃、白芷、天南星、陳皮、厚樸。

甲醇、乙腈為色譜純，購自天津市康科德科技有限公司，磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉為分析純。

1.3 儀器

TK-12B 型透皮擴散試驗儀(上海鍇凱科技貿易有限公司)，SSI PC2000 型高效液相色譜儀(美國科學系統公司)，EZChrom Elite Client/Server 色譜工作站。

1.4 色譜條件

色譜柱:Apollo C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相:A 相為乙腈，B 相為0.1%磷酸水，二元梯度洗脫:0～5 分鐘，20～40A;5～20 分鐘，40～40A，流速1.0 ml/min，進樣量為20 μl，檢測波長:346 nm，柱溫:30℃。該色譜條件下，理論板數按鹽酸小檗堿峰計算不低于150000。

1.5 對照品溶液

精密稱定鹽酸小檗堿，加入容量瓶，用乙腈配制成濃度為0.290 mg/ml 的溶液，作為儲備液。

1.6 供試液

由體外透皮試驗所得接受液，加入梨形蒸餾瓶，分別于70℃水浴減壓濃縮至干，精密吸取1 ml乙腈溶解，0.45 μm 微孔濾膜，作為供試液。

1.7 滲透擴散裝置及實驗方法

將鼠皮從冰箱取出，放至室溫，在接收池中放入磁力攪拌子，將鼠皮固定于擴散池與接收池之間，真皮面向接收池。試驗時，將精密稱量的膏劑涂于處理好的鼠皮角質層，注滿接收液(30%乙醇/磷酸鹽緩沖溶液，pH=6.8)，液面恰與皮膚真皮層接觸，排除氣泡。開動磁力攪拌器和恒溫水浴，磁力攪拌轉速設定為400 r/min，水浴溫度(37±0.5)℃，擴散池容積6 ml，擴散面積為2.92 cm2。于32 小時內的3、5、7、9、24、32 小時分段取樣，補充相應的空白接受液，根據濃度吸取不同體積注入色譜儀，按照上述色譜條件測定小檗堿含量，

1.8 主要指標

將金黃散全方組、缺藥方A 組、缺藥方B 組藥膏分別作透皮吸收試驗，所加藥膏量根據鹽酸小檗堿含量確定，保證其基本一致。按1.7 項下方法試驗，按下式計算不同膏劑不同時間段鹽酸小檗堿的單位面積累積透過量Q。其中Q=(Mn+∑Mp)/A，式中Q 為t 時刻的累積透過量(μg/cm2)，Mn 為第n個取樣點測得的藥物透過量(μg)，∑Mp 為之前測得的藥物透過量之和(μg);A(2.92 cm2)為皮膚擴散面積。每組平行做3 次，求Q 的平均值。

1.9 統計學方法

用Excel 統計數據，以經皮累計滲透量Q 對時間t 進行回歸得線性方程，根據方程求出穩態透皮速率J(μg/cm2·h)和透皮時滯tlag(小時)。

2 結果

三組膏劑不同時刻各自平行做3 次測量，檢測經皮累計滲透量Q，求平均值，結果見表1。然后以經皮累計滲透量Q 對t 進行回歸得線性方程，根據方程求出穩態透皮速率J(μg/cm2·h)和透皮時滯tlag(小時)，見表2。

通過觀察三組膏劑的穩態透皮速率J、透皮時滯tlag、32 小時內鹽酸小檗堿累積透過量Q/32h，可以看出缺藥方A 組和缺藥方B 組的穩態透皮速率、透皮時滯、32 小時內小檗堿單位面積累積透過量及透過率都較全方高。金黃散全方組的穩態透皮速率及32 小時內鹽酸小檗堿累積透過量都低于缺姜黃、白芷的缺藥方A 組，說明姜黃、白芷對小檗堿的皮膚滲透有抑制作用，缺藥方A 組和缺藥方B 組的穩態透皮速率及32 小時內鹽酸小檗堿累積透過量差別不大，有天南星、陳皮、厚樸的缺藥方A 組的透皮時滯低于缺藥方B 組，說明天南星、陳皮、厚樸對小檗堿的皮膚滲透有一定促進作用。

3 討論

金黃膏中的姜黃，辛、苦，溫，歸肝、脾經，活血行氣，通經止痛可用于治療氣滯血瘀痛癥和風濕痹痛，其中姜黃素有抗炎作用，對細菌有抑制作用，為臣藥;白芷，辛，溫，歸肺、胃、大腸經，解表散寒，祛風止痛，通鼻竅，燥濕止帶，消腫排膿，可用于治療風寒感冒，頭痛，牙痛，風濕痹痛，鼻淵，帶下癥，瘡癰腫毒，皮膚風濕瘙癢，為臣藥;天南星，苦、辛、溫。歸肺、肝、脾經，燥濕化痰，祛風解痙，外敷散結消腫止痛，用于治療濕痰，寒痰證，風痰眩暈，中風，癲癇，破傷風，癰疽腫毒，蛇蟲咬傷;陳皮，辛、苦，溫。歸脾、肺經，理氣健脾，燥濕化痰，用于治療脾胃氣滯證，嘔吐，呃逆，濕痰、寒痰咳嗽，胸痹;厚樸，苦、辛，溫。歸脾、胃、肺、大腸經，燥濕消痰，下氣除滿，用于治療濕阻中焦，脘腹脹滿，食積氣滯，腹脹便秘，痰飲喘咳，此三藥皆辛苦溫，辛以散結，苦以燥濕，溫以通滯，共為佐藥［3］。

姜黃、白芷對小檗堿皮膚滲透的抑制作用實則說明了此藥對對金黃膏發揮療效起到了促進作用。陳實功的如意金黃散的組成用于陽證、熱證瘡瘍，從組方看辛溫的藥反而味和量都大。中藥講究君臣佐使，使藥作為引經藥，使藥效直達病所，所以分析辛溫的姜黃和白芷這一組藥為“如意金黃散”的透皮促滲之藥［4］。同時根據四氣五味理論，姜黃、白芷同為辛溫之品，具發散、行氣之功，可散邪于表，給邪出路。

對姜黃、白芷藥理作用的研究證明具有鎮痛、抗炎的作用［5-6］，透皮給藥而發揮作用。一般的透皮給藥系統，是指藥物以一定的速率透過皮膚，經毛細血管吸收進入全身血液循環達到有效濃度，產生療效，起到全身治療作用。還有一種情況，有些藥物與角質層親和力大或能與角質層發生特異結合，在皮膚內積聚儲存，形成“儲庫效應”，向皮膚深部擴散的比較緩慢。其藥理作用在局部發揮的比較明顯，在全身的治療作用不明顯。金黃膏應用于臨床多年，對于陽證、熱證的治療效果顯著。如果小檗堿也有這種可能性，大部分積聚在皮膚，發揮抑菌消炎作用，一小部分透過皮膚向深部擴散，對全身起到治療作用，恰好與金黃膏的適應癥相吻合。因此，實驗說明姜黃、白芷對小檗堿的滲透有抑制作用，正是其“儲庫效應”和散邪于表，給邪出路的體現。

表1 三種膏劑不同時刻鹽酸小檗堿單位面積累積透過量平均值(單位:μg/cm2)

表2 三種膏劑鹽酸小檗堿單位面積累積透過量與時間相關線性方程及參數(n=3)

天南星、陳皮、厚樸對小檗堿皮膚滲透的促進作用，證實了此藥對在金黃膏配伍中，用苦寒之品佐以辛溫之藥以達到溫散走竄的促滲作用。合理的配伍，既能達到治病作用又能滲透入內，從局部影響全身的作用，即整體就是其透皮系統。

［1］李建波，張莉，張潔.藥對配伍理論及相關研究概述［J］.中醫雜志，2013，54(15):1335-1340.

［2］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:720.

［3］吳曦.淺析《外科正宗》之如意金黃散［J］.貴陽中醫學院學報，2012，34(6):236-237.

［4］王紅.淺析“如意金黃散(膏)”的透皮系統［J］.天津中醫藥，2005，22(1):57-58.

［5］王穎，郭蘭萍，黃璐琦，等.姜黃、莪術、郁金的化學成分與藥理作用研究進展［J］.中國藥房，2013，24(35):3338-3341.

［6］吳媛媛，蔣桂華，馬逾英，等.白芷的藥理作用研究進展［J］.時珍國醫國藥，2009，20(3):625-627.