魚腥草滴眼液眼局部應(yīng)用的安全性研究

王群 吳志鴻

目前常用的抗菌性滴眼液多為抗生素類西藥，僅魚腥草滴眼液為中藥制劑。魚腥草性辛微寒，入肺經(jīng)，有清熱解毒之功效［1-2］。《本草綱目》中首次應(yīng)用魚腥草之名，言其葉子有腥氣，故稱之為魚腥草，其味辛，可“散熱毒癰腫”。已有大量實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，魚腥草具有明顯的抗菌和抗病毒作用，對(duì)多種微生物有抑制作用，可用于治療流行性結(jié)膜炎、流行性角結(jié)膜炎和病毒性角膜炎等疾病，并取得良好的療效［3-6］。用于眼科治療的魚腥草制劑，多通過滴眼、結(jié)膜下注射、霧化熏蒸和靜脈點(diǎn)滴等方式發(fā)揮作用，其中滴眼液最為常見。魚腥草滴眼液的有效性已多有報(bào)道，但是安全性研究卻較少。本研究通過給予大鼠魚腥草滴眼液局部點(diǎn)眼來觀察評(píng)價(jià)魚腥草眼角膜局部應(yīng)用的安全性。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物與分組

清潔型健康7～8 周雄性SD 大鼠，重120～220 g，由武警總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)所使用的條件均符合國(guó)家科學(xué)技術(shù)委員會(huì)的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》。20 只大鼠術(shù)前經(jīng)裂隙燈顯微鏡檢查無眼部異常，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，每組各10 只，左眼為實(shí)驗(yàn)眼。對(duì)照組滴生理鹽水(0.9% NaCl)，實(shí)驗(yàn)組滴魚腥草滴眼液(四川升和制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):20010110)，4 次/日(8∶30，12∶30，16∶30，20∶30)，每次1 滴，點(diǎn)眼后使大鼠眼瞼閉合10 秒，共觀察14 天。

1.2 大鼠行為學(xué)變化觀察

每天在給予滴眼液點(diǎn)眼后觀察大鼠有無抓撓眼部、甩頭或頻繁眨眼等行為學(xué)變化。

1.3 角膜形態(tài)變化觀察

每天通過裂隙燈顯微鏡下檢查大鼠的結(jié)膜、角膜和前節(jié)組織的情況，并進(jìn)行眼前節(jié)照相。根據(jù)Draize 等的兔眼刺激性實(shí)驗(yàn)評(píng)分系統(tǒng)并進(jìn)行改良后，對(duì)眼部相應(yīng)組織受累的程度和面積，變化和反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分。角膜評(píng)分:對(duì)角膜受累的強(qiáng)度和面積分別進(jìn)行評(píng)分，各為0～4 分，將所得的分值相加后，乘以加權(quán)系數(shù)得到加權(quán)角膜積分。虹膜評(píng)分:根據(jù)虹膜充血、腫脹、角膜周圍充血、出血，虹膜對(duì)光刺激反應(yīng)情況等進(jìn)行總體打分，為0～3 分，然后乘以加權(quán)系數(shù)得到加權(quán)虹膜積分。結(jié)膜評(píng)分:對(duì)結(jié)膜發(fā)紅、水腫和分泌物分別打分，分別為0～3 分，將所得分值相加后乘以加權(quán)系數(shù)得到獲得加權(quán)結(jié)膜積分。同時(shí)記錄其他的損傷，如血管翳(角膜新生血管化)和眼球破裂等［7-8］。具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

1.4 結(jié)膜和角膜病理標(biāo)本觀察

滴眼后14 天，大鼠腹腔注射10% 水合氯醛(3.5 ml/kg)，麻醉充分后，在眼科手術(shù)顯微鏡下分離結(jié)膜組織和角膜組織，4%多聚甲醛固定后，常規(guī)制作石蠟切片并進(jìn)行HE 染色，顯微鏡觀察并進(jìn)行照相。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用IBM SPSS 20.0(IBM SPSS，芝加哥，IL)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法為χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)觀察

實(shí)驗(yàn)組給予魚腥草滴眼液后大鼠即有抓撓眼部的行為，半小時(shí)后行為消失。對(duì)照組大鼠也出現(xiàn)類似癥狀。

2.2 角膜形態(tài)變化觀察

滴眼后第14 天，與實(shí)驗(yàn)開始前的前節(jié)照相比較，未見明顯瞬目、流淚等癥狀，耐受性好。兩組大鼠滴眼后行為學(xué)無明顯差異，所有鼠眼接受藥物點(diǎn)眼后用裂隙燈顯微鏡觀察，未發(fā)現(xiàn)結(jié)膜充血、壞死及角膜混濁。觀察期內(nèi)各組實(shí)驗(yàn)鼠結(jié)膜和鞏膜未見充血、水腫及壞死，角膜均保持透明，無水腫及內(nèi)皮皺褶。虹膜表面無滲出、出血及壞死，瞳孔對(duì)光反射靈敏。晶狀體透明，表面無滲出物。直接檢眼鏡觀察玻璃體未見混濁，視網(wǎng)膜血管未見縮窄，視網(wǎng)膜平伏，未見滲出及出血(見圖1)。兩組角膜熒光素鈉染色未見明顯點(diǎn)染，角膜上皮完整(見圖2)。兩組大鼠結(jié)膜、角膜和虹膜Draize 評(píng)分采用χ2檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析后提示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 Draize 眼刺激性試驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

圖1 裂隙燈前節(jié)照相

圖2 角膜熒光素鈉染色后裂隙燈前節(jié)照相

2.3 HE 染色光鏡觀察

HE 染色光鏡觀察發(fā)現(xiàn)兩組大鼠結(jié)膜組織完整，未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(見圖3)。兩組大鼠角膜上皮層完整，基質(zhì)纖維排列規(guī)則，未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(見圖4)。

3 討論

圖3 大鼠結(jié)膜HE 染色結(jié)果(HE 染色，×400)

圖4 大鼠角膜HE 染色結(jié)果(HE 染色，×400)

藥物在眼內(nèi)產(chǎn)生毒副作用通常是由功能性改變到亞微觀形態(tài)學(xué)改變，再到微觀形態(tài)學(xué)改變，最后到肉眼可見的改變。角膜是眼科藥物吸收的主要途徑，尤其是滴眼液劑型藥物的直接作用部位，也必然是藥物毒性損傷的主要組織。眼科藥物對(duì)角膜的毒性研究主要通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察來完成。本實(shí)驗(yàn)為了驗(yàn)證魚腥草滴眼液眼局部應(yīng)用的安全性，利用SD 大鼠進(jìn)行在體實(shí)驗(yàn)，觀察魚腥草滴眼液點(diǎn)眼后的刺激性。刺激性是指在通過非口服給藥方式給藥后，藥物對(duì)給藥部位產(chǎn)生的不可逆的炎性反應(yīng)，如果給藥部位發(fā)生不可逆的損傷則稱該藥物對(duì)給藥部分具有腐蝕性。本實(shí)驗(yàn)中對(duì)滴眼后大鼠結(jié)膜、角膜和虹膜組織的形態(tài)學(xué)進(jìn)行了觀察，并通過Draize 評(píng)分系統(tǒng)評(píng)估魚腥草滴眼液的局部刺激性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)魚腥草滴眼液組和生理鹽水組的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即魚腥草滴眼液局部應(yīng)用無明顯刺激性。

大鼠在接受魚腥草滴眼液點(diǎn)眼后，結(jié)膜、角膜和眼內(nèi)組織形態(tài)學(xué)上都未觀察到異常變化，病理切片組織結(jié)構(gòu)正常，結(jié)膜上皮完整，角膜上皮完整，基質(zhì)膠原排列整齊，未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。魚腥草滴眼液給藥后，角膜熒光素鈉染色結(jié)果陰性，角膜上皮完整。綜上所述魚腥草滴眼液局部應(yīng)用比較安全。本研究初步分析了魚腥草滴眼液的眼部用藥安全性，后繼需要進(jìn)行一系列的研究，系統(tǒng)探討魚腥草滴眼液安全性，如檢測(cè)不同濃度魚腥草滴眼液對(duì)結(jié)膜上皮細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞的毒性作用，確定安全用藥濃度區(qū)間;對(duì)魚腥草滴眼液結(jié)膜下注射后的大鼠進(jìn)行電生理檢查，了解魚腥草滴眼液是否對(duì)視網(wǎng)膜視神經(jīng)功能產(chǎn)生影響;對(duì)魚腥草滴眼液結(jié)膜下注射后的眼內(nèi)組織進(jìn)行病理學(xué)檢查，了解魚腥草滴眼液是否引起眼底組織的形態(tài)變化等。

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