復(fù)方葛根片中4種有效成分的薄層色譜法鑒定

賈永慧，于燕莉，范云飛

復(fù)方葛根片為筆者所在醫(yī)院傳統(tǒng)制劑，在醫(yī)院臨床應(yīng)用已30余年，2002年被 《中國(guó)人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范（2002年版）》增補(bǔ)本收編。由葛根、丹參、茵陳、延胡索四味藥材組合而成，具有活血化瘀、行氣止痛、生津養(yǎng)心的功效，臨床用于治療冠心病、心絞痛和心肌梗死［1］。為了更好地控制該藥的質(zhì)量，筆者在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，用薄層色譜方法對(duì)方中四味藥材葛根、丹參、茵陳、延胡索均進(jìn)行了鑒定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 電子天平 （BS223S型），紫外透射反射分析儀（ZF－A型），超聲清洗器（AS－3120）。

1.2 試藥 復(fù)方葛根片 （濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)：20110330，20110526）；葛根素對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定研究院，批號(hào)：110752－200511；丹參酮IIA對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定研究院，批號(hào)：110766－200112；綠原酸對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110753－200413；四氫帕馬丁對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110726－200409；氫氧化鈉、薄層層析硅膠、碘、95%乙醇、純化水、甲醇、醋酸丁酯、甲酸、乙醚、乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）、濃氨試液、甲苯、丙酮、三氯甲烷，上述所用液體試劑除色譜純甲醇、化學(xué)純甲苯外，其余均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀 該品為淺棕色片，氣微香，味苦，微辛涼。

2.2 薄層鑒別 鑒別方法主要參照2010年版 《中國(guó)藥典》（一部）項(xiàng)下的鑒別方法對(duì)葛根、丹參、茵陳、延胡索進(jìn)行薄層鑒別從而進(jìn)行定性分析。

2.2.1 葛根的薄層鑒別［2，3］分別取批號(hào)為 20110330和20110526的復(fù)方葛根片內(nèi)容物各2 g，研成細(xì)粉，分別加甲醇10 ml，放置2 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液1及供試品溶液2。另按處方比例稱取除去葛根的其他中藥，按復(fù)方葛根片的制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，然后按制備供試品溶液的方法制成陰性對(duì)照溶液［4］。再取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成1 mg／ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。參照2010年版《中國(guó)藥典》（一部）附錄相關(guān)薄層試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，分別吸取10 μl供試品溶液1、供試品溶液2、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，滴于同一硅膠G薄層板上，使成條狀，以三氯甲烷－甲醇－水（7∶2.5∶0.25）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。在于對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，供試品1與供試品2的色譜顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照色譜相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)且無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

2.2.2 丹參的薄層鑒別［2］分別取批號(hào)為20110330和20110526的復(fù)方葛根片內(nèi)容物1.5 g，分別加乙醚7.5 ml，振搖，放置1 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解，作為供試品溶液1及供試品溶液2。另按處方比例稱取除去丹參的其他中藥，按復(fù)方葛根片的制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，然后按制備供試品溶液的方法制成陰性對(duì)照溶液［4］。再取丹參酮IIA對(duì)照品，加乙酸乙酯制成2 mg／ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。參照2010年版《中國(guó)藥典》（一部）附錄相關(guān)薄層試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，分別吸取5 μl供試品溶液1、供試品溶液2、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，滴于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。在于對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品1與供試品2的色譜顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照色譜相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)且無(wú)干擾，見(jiàn)圖2。

圖1 葛根的薄層鑒定

圖2 丹參的薄層鑒定

2.2.3 茵陳的薄層鑒定［2］取批號(hào)為20110330和20110526的復(fù)方葛根片內(nèi)容物1.5 g，分別加50%甲醇20 ml，超聲處理30 min，離心，取上清液作為供試品溶液1及供試品溶液2。另按處方比例稱取除去茵陳的其他中藥，按復(fù)方葛根片的制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，然后按制備供試品溶液的方法制成陰性對(duì)照溶液［4］。再取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成0.1 mg／ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。參照2010年版《中國(guó)藥典》（一部）附錄相關(guān)薄層試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，分別吸取2 μl供試品溶液1、供試品溶液2、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液，滴于同一硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯－甲酸－水（7∶2.5∶2.5）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。在于對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，供試品1與供試品2的色譜顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照色譜相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)且無(wú)干擾，見(jiàn)圖3。

2.2.4 延胡索的薄層鑒定［2］取批號(hào)為20110330和20110526的復(fù)方葛根片內(nèi)容物1.5 g，分別加甲醇50 ml，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取3次，10 ml／次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解作為供試品溶液1及供試品溶液2。另按處方比例稱取除去延胡索的其他中藥，按復(fù)方葛根片的制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，然后按制備供試品溶液的方法制成陰性對(duì)照溶液［4］。再取四氫帕馬丁對(duì)照品，加甲醇制成0.5 mg／ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。參照2010年版《中國(guó)藥典》（一部）附錄相關(guān)薄層試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，分別吸取2～3 μl供試品溶液1、供試品溶液2、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液，滴于同一用1%NaOH溶液制備的硅膠G薄層板，以甲苯－丙酮（9θ2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置碘缸中約3 min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外燈（365 nm）下檢視。在于對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，供試品1與供試品2的色譜顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照色譜相應(yīng)的位置上無(wú)斑點(diǎn)且無(wú)干擾，見(jiàn)圖4。

圖3 茵陳的薄層鑒定

圖4 延胡索的薄層鑒定

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法對(duì)處方中的葛根、丹參、茵陳、延胡索四味藥分別進(jìn)行了鑒別研究。綜上，四味藥材鑒別試驗(yàn)測(cè)定得清晰的斑點(diǎn)，重現(xiàn)性良好，且陰性無(wú)干擾。運(yùn)用TLC法鑒別此類制劑，為今后該制劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供了定性依據(jù)［5］。

［1］于燕莉，梁愛(ài)君，張 莉，等.復(fù)方葛根片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009，25（6）：524－526.

［2］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）：藥材及飲片［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.70，130，223，312.

［3］中國(guó)人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.中國(guó)人民解放軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)范增補(bǔ)本［S］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2002.20.

［4］楊 敏，蔣強(qiáng)富，許伯慧，等.HPLC法測(cè)定如意金黃散中5種活性成分的含量［J］.中國(guó)藥房，2011，22（16）：1511－1513.

［5］徐曉弘，王 楊.薄層色譜法鑒別補(bǔ)腎益智丸的研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，8（14）：60－61.