HPLC法測定不同產地及不同采收時間大花紫薇葉中鞣花酸含量

王 燕

(福建衛生職業技術學院，福建 福州 350101)

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HPLC法測定不同產地及不同采收時間大花紫薇葉中鞣花酸含量

王 燕

(福建衛生職業技術學院，福建 福州 350101)

目的：采用高效液相色譜法測定不同產地及不同采收期大花紫薇葉中鞣花酸的含量。方法：采用Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，柱溫25℃，以甲醇-0.1%磷酸水溶液為流動相，梯度洗脫，流速0.8mL·min-1，檢測波長254nm。結果：鞣花酸濃度在2.66～66.45μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系，r=0.9998。平均回收率為103.7%(RSD=0.9%，n=6)。不同產地的大花紫薇葉中，鞣花酸以廣東深圳采收的含量最高，不同采收時間的福建衛生職業技術學院大花紫薇葉中鞣花酸含量在始果期8月下旬達到最高。結論：本方法操作簡單、快速、重復性好，可用于測定大花紫薇葉中鞣花酸的含量。

大花紫薇；鞣花酸；HPLC

大花紫薇Lagerstroemiaspeciosa(Linn.)Pers為千屈菜科紫薇屬植物，又名大葉紫薇、大果紫薇，落葉高大喬木，廣泛分布于我國福建、廣東、廣西等地區[1]。在東南亞國家，大花紫薇作為傳統民間藥物用以治療糖尿病和腎病[2]，現代研究表明其降血糖的主要活性成分為鞣質類[3]和鞣花酸類化合物[4]。鞣花酸是沒食子酸的二聚衍生物，具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用[5]。大花紫薇在我國資源豐富，近幾年國內學者對其進行了化學成分方面的研究[6]，但關于其質量控制尚未見相關文獻報道。因此，本文采用HPLC法，測定了不同產地及不同采收期大花紫薇葉中鞣花酸的含量，以期為控制大花紫薇葉的內在質量及進一步開發利用提供科學依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AB型高效液相色譜儀(日本島津)；Elmasonic S150型超聲波清洗儀(德國Elma)；PL 203型電子天平(瑞士METTLER TOLEDO)；Ultimate XB-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)。

1.2 藥品與試劑

甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。對照品鞣花酸購于美國Sigma公司，其純度大于98%。大花紫薇葉采自不同產地，不同采收期的大花紫薇葉采收自福建衛生職業技術學院，經福建農林大學園藝學院陳清西教授鑒定為千屈菜科紫薇屬大花紫薇(LagerstroemiaspeciosaL.)的葉，40℃烘干，粉碎后過三號篩，干燥保存，備用。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱采用Ultimate XB-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)。流動相以甲醇-0.1%磷酸梯度洗脫：0～10min，20%甲醇；10～15min，甲醇從40%～60%;15～30min，60%甲醇。流速0.8mL·min-1，檢測波長254nm，柱溫25℃，進樣量10μL。對照品和大花紫薇葉樣品(批號2013082002)色譜見圖1。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取鞣花酸對照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成濃度約為0.1mg·mL-1的對照品儲備液。精密量取5mL，置于50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取大花紫薇葉粉末(過三號篩)0.1g，精密加入甲醇100mL，稱定重量，超聲提取30min(100W，40kHz)，溫度40℃。放冷，以甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液過0.45μm微孔濾膜，即得大花紫薇供試品溶液。

2.4 線性關系考察

分別精密量取對照品儲備液0.2、0.25、1.0、1.5、2.0、4.0、5.0mL置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10μL，按“2.1”項下色譜條件測定。以對照品濃度X(μg/mL)為橫坐標，測得的峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程：Y=66767X+15492，r=0.9998。結果表明，鞣花酸在2.66～66.45μg/mL范圍內具有良好線性關系。

圖1 鞣花酸對照品色譜(A)、大花紫薇葉樣品色譜(B)

2.5 精密度試驗

取對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次，測定鞣花酸的峰面積。結果峰面積RSD為0.7%，表明該實驗精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同一批大花紫薇葉的粉末(批號2013082002)6份，按“2.3”項下方法分別制備，按“2.1”項色譜條件，測定鞣花酸的峰面積，計算鞣花酸含量，結果樣品中鞣花酸的平均含量為2.01%(RSD=1.3%，n=6)，表明該實驗重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取供試品溶液分別于制備后 0、2、4、6、8、10、12、24h進樣，記錄鞣花酸的峰面積，結果其峰面積RSD為0.3%，表明供試品溶液在24h內穩定。

2.8 回收率試驗

精密稱取已測定含量的樣品(批號2013082002)共6份，分別精確加入一定量的鞣花酸對照品，混勻后，按“2.3”項下方法制備樣品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，計算平均回收率，結果見表1。

表1 鞣花酸的回收率試驗 (n=6)

2.9 樣品的含量測定

分別取不同產地和不同采收期大花紫薇葉各3份，按“2. 3”項下方法制備供試品溶液。按“2.1”項下的色譜條件測定，按外標法計算大花紫薇葉中鞣花酸的含量，結果見表2、表3。

表2 不同產地大花紫薇葉中鞣花酸含量測定結果 (n=3，RSD<2%)

表3 不同采收期福建衛生職業技術學院大花紫薇葉中鞣花酸的含量測定結果 (n=3，RSD<2%)

3 討論

不同產地的大花紫薇葉中鞣花酸，以廣東深圳采收的含量最高。總體來說，廣東和福建地區大花紫薇葉中鞣花酸的含量差別不大，但在相同的采收期下，廣東深圳所產的大花紫薇葉中鞣花酸含量較河南洛陽所產含量高出近10倍，這可能與廣東地區光照充足，溫度與濕度均較高等生長環境有關。

本試驗還對采自福建衛生職業技術學院的大花紫薇葉在花期和果期內鞣花酸的含量進行了分析。由結果可以看出，鞣花酸含量在開花期含量逐漸上升，在始果期即8月下旬時達到含量最大值，而在成長期含量開始逐漸降低，到果實成熟期含量達到最低值。因此，據此含量變化規律，可確定大花紫薇葉在花期8月中下旬為最佳采收期，此時有效成分鞣花酸的含量較高。

鞣花酸作為大花紫薇葉中主要活性成分之一，其含量高低對于大花紫薇的內在質量具有重要的意義。本實驗結果表明，不同的產地和采收時間對鞣花酸的含量均有影響。而產地對其含量的影響較大，說明產地是決定大花紫薇次生代謝產物形成的主要因素。本實驗結果可為進一步開發利用大花紫薇提供一定的研究依據。

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會. 中國植物志[M]. 北京：科學出版社，1983：97.

[2] LIU F，KIM JK，LiIY，et al．An extract ofLagerstroemiaspeciosaL. has insulin-like glucose uptake-stimulatory and adipocyte differentiation-inhibitory activities in 3T3-L1 cells[J]．J Nutr，2001，131(9)：2242．

[3] LIU X，KIM J，LI Y，et al．Tannic acid stimulates glucose transport and inhibits adipocyte differentiation in 3T3-L1 cells[J]．J Nutr，2005，135(2)：165．

[4] BAI N，HE K，ROLLER M，et al．Active compounds from Lagerstroemia speciosa, insulin-like glucose uptake-stimulatory/inhibitory and adipocyte differentiation-inhibitory activities in 3T3-L1 cells[J]．J Agric Food Chem，2008，56(24)：11668．

[5] 李素琴，袁其朋，徐健梅．鞣花酸的生理功能及工藝開發研究現狀[J]．天然產物研究與開發，2001，13(5)：71-79．

[6] 詹勤，王燕，李霞，等．大花紫薇葉醋酸乙酯部位的化學成分研究[J]．時珍國醫國藥，2009，20(8)：1841-1844．

(責任編輯：魏 曉)

2014-03-01

福建省教育廳資助科技項目(JB12303)；福建衛生職業技術學院院級科研課題(2012-2-03)

王燕(1986-)，女，福建衛生職業技術學院助教，研究方向為中藥資源及品質評價。

R284.2

A

1673-2197(2014)11-0025-02