HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地及不同采收時(shí)間大花紫薇葉中鞣花酸含量

王 燕

(福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 福州 350101)

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HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地及不同采收時(shí)間大花紫薇葉中鞣花酸含量

王 燕

(福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 福州 350101)

目的：采用高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地及不同采收期大花紫薇葉中鞣花酸的含量。方法：采用Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，柱溫25℃，以甲醇-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速0.8mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。結(jié)果：鞣花酸濃度在2.66～66.45μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.9998。平均回收率為103.7%(RSD=0.9%，n=6)。不同產(chǎn)地的大花紫薇葉中，鞣花酸以廣東深圳采收的含量最高，不同采收時(shí)間的福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院大花紫薇葉中鞣花酸含量在始果期8月下旬達(dá)到最高。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)單、快速、重復(fù)性好，可用于測(cè)定大花紫薇葉中鞣花酸的含量。

大花紫薇；鞣花酸；HPLC

大花紫薇Lagerstroemiaspeciosa(Linn.)Pers為千屈菜科紫薇屬植物，又名大葉紫薇、大果紫薇，落葉高大喬木，廣泛分布于我國(guó)福建、廣東、廣西等地區(qū)[1]。在東南亞國(guó)家，大花紫薇作為傳統(tǒng)民間藥物用以治療糖尿病和腎病[2]，現(xiàn)代研究表明其降血糖的主要活性成分為鞣質(zhì)類[3]和鞣花酸類化合物[4]。鞣花酸是沒(méi)食子酸的二聚衍生物，具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用[5]。大花紫薇在我國(guó)資源豐富，近幾年國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了化學(xué)成分方面的研究[6]，但關(guān)于其質(zhì)量控制尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本文采用HPLC法，測(cè)定了不同產(chǎn)地及不同采收期大花紫薇葉中鞣花酸的含量，以期為控制大花紫薇葉的內(nèi)在質(zhì)量及進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AB型高效液相色譜儀(日本島津)；Elmasonic S150型超聲波清洗儀(德國(guó)Elma)；PL 203型電子天平(瑞士METTLER TOLEDO)；Ultimate XB-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)。

1.2 藥品與試劑

甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。對(duì)照品鞣花酸購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，其純度大于98%。大花紫薇葉采自不同產(chǎn)地，不同采收期的大花紫薇葉采收自福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，經(jīng)福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院陳清西教授鑒定為千屈菜科紫薇屬大花紫薇(LagerstroemiaspeciosaL.)的葉，40℃烘干，粉碎后過(guò)三號(hào)篩，干燥保存，備用。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱采用Ultimate XB-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)。流動(dòng)相以甲醇-0.1%磷酸梯度洗脫：0～10min，20%甲醇；10～15min，甲醇從40%～60%;15～30min，60%甲醇。流速0.8mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，柱溫25℃，進(jìn)樣量10μL。對(duì)照品和大花紫薇葉樣品(批號(hào)2013082002)色譜見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取鞣花酸對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成濃度約為0.1mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取5mL，置于50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取大花紫薇葉粉末(過(guò)三號(hào)篩)0.1g，精密加入甲醇100mL，稱定重量，超聲提取30min(100W，40kHz)，溫度40℃。放冷，以甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液過(guò)0.45μm微孔濾膜，即得大花紫薇供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2、0.25、1.0、1.5、2.0、4.0、5.0mL置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以對(duì)照品濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，測(cè)得的峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=66767X+15492，r=0.9998。結(jié)果表明，鞣花酸在2.66～66.45μg/mL范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

圖1 鞣花酸對(duì)照品色譜(A)、大花紫薇葉樣品色譜(B)

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定鞣花酸的峰面積。結(jié)果峰面積RSD為0.7%，表明該實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批大花紫薇葉的粉末(批號(hào)2013082002)6份，按“2.3”項(xiàng)下方法分別制備，按“2.1”項(xiàng)色譜條件，測(cè)定鞣花酸的峰面積，計(jì)算鞣花酸含量，結(jié)果樣品中鞣花酸的平均含量為2.01%(RSD=1.3%，n=6)，表明該實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液分別于制備后 0、2、4、6、8、10、12、24h進(jìn)樣，記錄鞣花酸的峰面積，結(jié)果其峰面積RSD為0.3%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已測(cè)定含量的樣品(批號(hào)2013082002)共6份，分別精確加入一定量的鞣花酸對(duì)照品，混勻后，按“2.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鞣花酸的回收率試驗(yàn) (n=6)

2.9 樣品的含量測(cè)定

分別取不同產(chǎn)地和不同采收期大花紫薇葉各3份，按“2. 3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算大花紫薇葉中鞣花酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

表2 不同產(chǎn)地大花紫薇葉中鞣花酸含量測(cè)定結(jié)果 (n=3，RSD<2%)

表3 不同采收期福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院大花紫薇葉中鞣花酸的含量測(cè)定結(jié)果 (n=3，RSD<2%)

3 討論

不同產(chǎn)地的大花紫薇葉中鞣花酸，以廣東深圳采收的含量最高。總體來(lái)說(shuō)，廣東和福建地區(qū)大花紫薇葉中鞣花酸的含量差別不大，但在相同的采收期下，廣東深圳所產(chǎn)的大花紫薇葉中鞣花酸含量較河南洛陽(yáng)所產(chǎn)含量高出近10倍，這可能與廣東地區(qū)光照充足，溫度與濕度均較高等生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。

本試驗(yàn)還對(duì)采自福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院的大花紫薇葉在花期和果期內(nèi)鞣花酸的含量進(jìn)行了分析。由結(jié)果可以看出，鞣花酸含量在開(kāi)花期含量逐漸上升，在始果期即8月下旬時(shí)達(dá)到含量最大值，而在成長(zhǎng)期含量開(kāi)始逐漸降低，到果實(shí)成熟期含量達(dá)到最低值。因此，據(jù)此含量變化規(guī)律，可確定大花紫薇葉在花期8月中下旬為最佳采收期，此時(shí)有效成分鞣花酸的含量較高。

鞣花酸作為大花紫薇葉中主要活性成分之一，其含量高低對(duì)于大花紫薇的內(nèi)在質(zhì)量具有重要的意義。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同的產(chǎn)地和采收時(shí)間對(duì)鞣花酸的含量均有影響。而產(chǎn)地對(duì)其含量的影響較大，說(shuō)明產(chǎn)地是決定大花紫薇次生代謝產(chǎn)物形成的主要因素。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用大花紫薇提供一定的研究依據(jù)。

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì). 中國(guó)植物志[M]. 北京：科學(xué)出版社，1983：97.

[2] LIU F，KIM JK，LiIY，et al．An extract ofLagerstroemiaspeciosaL. has insulin-like glucose uptake-stimulatory and adipocyte differentiation-inhibitory activities in 3T3-L1 cells[J]．J Nutr，2001，131(9)：2242．

[3] LIU X，KIM J，LI Y，et al．Tannic acid stimulates glucose transport and inhibits adipocyte differentiation in 3T3-L1 cells[J]．J Nutr，2005，135(2)：165．

[4] BAI N，HE K，ROLLER M，et al．Active compounds from Lagerstroemia speciosa, insulin-like glucose uptake-stimulatory/inhibitory and adipocyte differentiation-inhibitory activities in 3T3-L1 cells[J]．J Agric Food Chem，2008，56(24)：11668．

[5] 李素琴，袁其朋，徐健梅．鞣花酸的生理功能及工藝開(kāi)發(fā)研究現(xiàn)狀[J]．天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2001，13(5)：71-79．

[6] 詹勤，王燕，李霞，等．大花紫薇葉醋酸乙酯部位的化學(xué)成分研究[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(8)：1841-1844．

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-03-01

福建省教育廳資助科技項(xiàng)目(JB12303)；福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級(jí)科研課題(2012-2-03)

王燕(1986-)，女，福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院助教，研究方向?yàn)橹兴庂Y源及品質(zhì)評(píng)價(jià)。

R284.2

A

1673-2197(2014)11-0025-02