不同炮制方法對大黃遺傳毒性減毒效果的研究

花勝利，肖熱風(fēng)，賴懷恩

(廣東省制藥工業(yè)公司，廣東 廣州 510110)

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不同炮制方法對大黃遺傳毒性減毒效果的研究

花勝利，肖熱風(fēng)，賴懷恩

(廣東省制藥工業(yè)公司，廣東 廣州 510110)

目的：探討不同炮制方法對大黃遺傳毒性的減毒效果。方法：將生大黃中藥材400g平均分為四組，分別用清炒法、醋炒法、清蒸法和醋蒸法四種方法進(jìn)行炮制，炮制后進(jìn)行AMES實(shí)驗(yàn)并通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較差異性。結(jié)果：清蒸[TA102的S9陽性值為(250.1±8.0)，陰性值為(244.5±9.1)]和醋蒸[TA97的S9陽性值為(245.7±8.0)，陰性值為(165.9±9.1)]的大黃樣品除醋蒸樣品在代謝非活化條件下呈陽性以外，對于菌株TA97、TA98、TAl00、TAl02的致突變性都呈現(xiàn)陰性結(jié)果，而清炒和醋炒大黃的結(jié)果仍呈陽性。結(jié)論：清蒸炮制法與醋蒸炮制法對大黃的減毒作用比較明顯，而清炒炮制法與醋炒炮制法對大黃的減毒效果不明顯。

炮制；大黃；遺傳毒性；減毒效果

大黃又名將軍、黃良等，能攻積滯、清濕熱，具有良好的瀉火、涼血、祛瘀、解毒作用，現(xiàn)代藥物研究[1-2]表明，大黃中主要成分是游離狀態(tài)或結(jié)合狀態(tài)的蒽醌類衍生物(如大黃酸、大黃素、蘆薈素和大黃素甲醚等)，有文獻(xiàn)[3]指出：大劑量生大黃能使受孕的雌性大鼠出現(xiàn)虛證表現(xiàn)，大大增大死胎率，暗示生大黃具有較強(qiáng)的生殖毒性，因此，臨床應(yīng)用大黃之前必須進(jìn)行炮制減毒。為此，筆者對生大黃分別用清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法對大黃進(jìn)行炮制解毒，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

取同一批次的生大黃中藥材(產(chǎn)地為甘肅)400g平均分為四組，處理因素分別為清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法四種。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)主要試劑包括二甲基亞砜和敵克松等均購自Sigma制藥，甲基磺酸甲酯、溴化乙錠和曲拉通等藥品購自河北石藥集團(tuán)。實(shí)驗(yàn)菌株為組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門菌TA97、TA100、TA98和TA102等(購自山東省疾病預(yù)防控制中心)，經(jīng)過專家鑒定結(jié)果符合實(shí)驗(yàn)要求。對菌株進(jìn)行培養(yǎng)的培養(yǎng)基制作方法與高建波、劉云文獻(xiàn)[4]一致，在此不再贅述。實(shí)驗(yàn)用小鼠購自中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究中心(為昆明種雄性小鼠)，體重范圍為24～26g，平均體重范圍為(25.01±0.81)g，所有小鼠在常規(guī)喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 大黃炮制方法

四份大黃(各100g)分別用清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法方法進(jìn)行炮制，清炒法是通過中火力度將大黃的表面炒至焦黃色，取出放涼備用；清蒸法是將大黃加熱蒸透(一般蒸40min左右)，取出后在室溫條件下放涼備用；醋炒法是先將大黃加醋攪拌均勻(加醋比例為每100g大黃拌入18g醋)，悶透后放在鍋中翻炒，翻炒至大黃表面為焦黃色時(shí)取出放涼備用；醋蒸方法為先將大黃加醋攪拌均勻(加醋比例為每100g大黃拌入18g醋)，放入鍋中加熱蒸30min左右時(shí)取出放涼，干燥備用。

1.3 Ames實(shí)驗(yàn)

污染物致突變性實(shí)驗(yàn)方法參照柴寶娟、李祥、陳建偉等[5]文獻(xiàn)中的標(biāo)準(zhǔn)平皿摻入法，受試物生大黃濃度梯度為0.05、0.10、0.50、2.50、5.0ms/表面皿對突變性進(jìn)行檢測，分別通過四種方法加工后的大黃均采用毒性最強(qiáng)的5.0ms/表面皿的濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，代謝活化組設(shè)陽性對照2-AF，20μg/表面皿，TA100非代謝活化時(shí)陽性對照疊氮鈉(NaN3)50pg/表面皿，其它菌株非代謝活化時(shí)陽性對照Dexon50μg/表面皿，陰性對照二甲基亞砜(DMSO)0.1mL/表面皿。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

清蒸[TA102的S9陽性值為(250.1±8.0)，陰性值為(244.5±9.1)]和醋蒸[TA97的S9陽性值為(245.7±8.0)，陰性值為(165.9±9.1)]的大黃樣品除醋蒸樣品在代謝非活化條件下呈陽性以外，對于菌株TA97、TA98、TA100、TA102的致突變性都呈現(xiàn)陰性結(jié)果，而清炒和醋炒大黃的結(jié)果仍呈現(xiàn)陽性，因此，通過Ames實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明清蒸炮制法與醋蒸炮制法對大黃的減毒作用比較明顯，而清炒炮制法與醋炒炮制法對大黃的減毒效果不明顯，具體數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,見表1。

表1 不同炮制方法對大黃的污染物致突變性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

大黃一般被認(rèn)為毒性較低，臨床應(yīng)用比較安全，但服用過量可引起中毒，尤其是后下大黃毒性較大，可引起惡心、嘔吐、頭昏、腹絞痛、黃疸等。曾有報(bào)道[6]，30名受試者每日服大黃3次，3g/次，共5日，所有受試者均產(chǎn)生一系列胃腸反應(yīng)，主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、嘔吐、惡心、腸鳴，其中3例因嚴(yán)重腹瀉、腹痛、嘔吐而被迫臥床休息，經(jīng)對癥處理后緩解。國外曾報(bào)道[7]1例長期服蒽醌類瀉藥，導(dǎo)致結(jié)腸膨脹，手術(shù)切除結(jié)腸標(biāo)本可見變黑，肌層神經(jīng)元消失，平滑肌萎縮，因此，大黃在應(yīng)用前需進(jìn)行炮制以達(dá)到減毒增效的目的。

污染物致突變性實(shí)驗(yàn)一般被用來進(jìn)行環(huán)境毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)分析，由本研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，對大黃中藥材的清蒸法和醋蒸法兩種加工方法能有效降低大黃遺傳毒性，董菊文獻(xiàn)[8]研究中得出以下推論：大黃在經(jīng)過加工和炮制的過程中，以結(jié)合方式存在的蒽醌類物質(zhì)減少，而游離狀態(tài)的蒽醌類物質(zhì)增大，因此，瀉下作用有所減弱。魏高文等[9]應(yīng)用高效液相色譜法證明了以結(jié)合方式存在的蒽醌物質(zhì)中有一部分會轉(zhuǎn)化為游離狀態(tài)(表現(xiàn)為結(jié)合蒽醌峰面積減少，同時(shí)游離狀態(tài)蒽醌物質(zhì)的峰面積明顯增大)。筆者在以上文獻(xiàn)研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合自身實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，分析原因如下：清蒸法和醋蒸炮制方法能使大黃藥材在高溫環(huán)境作用下，使蒽醌化合物的苷鍵發(fā)生斷裂，產(chǎn)生毒性較弱的游離態(tài)蒽醌物質(zhì)，降低大黃的遺傳毒性。

表1顯示了清蒸方法處理大黃后的毒性略高于醋蒸，主要原因是大黃中藥材在酸性條件下，部分蒽醌類物質(zhì)可被還原為蒽芬或其它互變異構(gòu)體(如恩酮等物質(zhì))，使氧化過程相對降低。總之，清蒸法和醋蒸法兩種炮制方法對大黃遺傳毒性能起到明顯降低的結(jié)果，而清炒和醋炒法并無明顯的減毒效果。通過對大黃藥材的蒸煮加工，能明顯降低大黃的遺傳毒性，這為大黃在臨床應(yīng)用中的減毒作用奠定了一定的基礎(chǔ)，然而，本研究僅是對單純的大黃中藥材進(jìn)行研究，關(guān)于大黃復(fù)方制劑的減毒還需進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

[1] 馮天師，王玉剛，柴玉爽，等.正品及偽品大黃藥效與毒性的比較研究[J].世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2012，14(4)：1863-1870.

[2] 馬德君，馮磊，蔣紅云，等.5種藥劑對大型溞的急性活動抑制毒性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(17)：9331.

[3] 胡曉丞，李亞洲，佟繼銘，等.大黃提取物對成年大鼠睪丸的毒性作用[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)，2012，26(5)：658-663.

[4] 高建波，劉云.大黃顆粒對大鼠的長期毒性試驗(yàn)研究[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20(22)：4-6.

[5] 柴寶娟，李祥，陳建偉，等.大黃總提物的大鼠亞急性毒性[J].藥學(xué)與臨床研究，2011，19(4)：322-324.

[6] 溫曉燕，孟繁潔，靳英輝，等.中藥保留灌腸治療病毒性肝炎療效的Meta分析[J].中國循證醫(yī)學(xué)雜志，2013，13(4)：474-481.

[7] LING-NA ZENG，ZHI-JIE MA，YAN-LING ZHAO，et al.The protective and toxic effects of rhubarb tannins and anthraquinones in treating hexavalent chromium-injured rats：the Yin/Yang actions of rhubarb[J].Journal of hazardous materials，2013， 247(15)：1-9.

[8] 董菊.牛黃解毒片的遺傳毒性研究及其方藥配伍減毒作用初探[D].南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[9] 魏高文，何麗萍，趙靜，等.大黃中蒽醌類衍生物的反相高效液相色譜分離條件優(yōu)化的研究[J].光明中醫(yī)，2008，23(9)：1256-1257.

(責(zé)任編輯：姜付平)

2014-03-14

花勝利(1960-)，男，廣東省制藥工業(yè)公司主管中藥師，研究方向?yàn)樗幬锕芾怼?/p>

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1673-2197(2014)11-0027-02