不同炮制方法對大黃遺傳毒性減毒效果的研究

花勝利，肖熱風，賴懷恩

(廣東省制藥工業公司，廣東 廣州 510110)

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不同炮制方法對大黃遺傳毒性減毒效果的研究

花勝利，肖熱風，賴懷恩

(廣東省制藥工業公司，廣東 廣州 510110)

目的：探討不同炮制方法對大黃遺傳毒性的減毒效果。方法：將生大黃中藥材400g平均分為四組，分別用清炒法、醋炒法、清蒸法和醋蒸法四種方法進行炮制，炮制后進行AMES實驗并通過統計學方法比較差異性。結果：清蒸[TA102的S9陽性值為(250.1±8.0)，陰性值為(244.5±9.1)]和醋蒸[TA97的S9陽性值為(245.7±8.0)，陰性值為(165.9±9.1)]的大黃樣品除醋蒸樣品在代謝非活化條件下呈陽性以外，對于菌株TA97、TA98、TAl00、TAl02的致突變性都呈現陰性結果，而清炒和醋炒大黃的結果仍呈陽性。結論：清蒸炮制法與醋蒸炮制法對大黃的減毒作用比較明顯，而清炒炮制法與醋炒炮制法對大黃的減毒效果不明顯。

炮制；大黃；遺傳毒性；減毒效果

大黃又名將軍、黃良等，能攻積滯、清濕熱，具有良好的瀉火、涼血、祛瘀、解毒作用，現代藥物研究[1-2]表明，大黃中主要成分是游離狀態或結合狀態的蒽醌類衍生物(如大黃酸、大黃素、蘆薈素和大黃素甲醚等)，有文獻[3]指出：大劑量生大黃能使受孕的雌性大鼠出現虛證表現，大大增大死胎率，暗示生大黃具有較強的生殖毒性，因此，臨床應用大黃之前必須進行炮制減毒。為此，筆者對生大黃分別用清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法對大黃進行炮制解毒，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

取同一批次的生大黃中藥材(產地為甘肅)400g平均分為四組，處理因素分別為清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法四種。實驗設計主要試劑包括二甲基亞砜和敵克松等均購自Sigma制藥，甲基磺酸甲酯、溴化乙錠和曲拉通等藥品購自河北石藥集團。實驗菌株為組氨酸營養缺陷型鼠傷寒沙門菌TA97、TA100、TA98和TA102等(購自山東省疾病預防控制中心)，經過專家鑒定結果符合實驗要求。對菌株進行培養的培養基制作方法與高建波、劉云文獻[4]一致，在此不再贅述。實驗用小鼠購自中國醫科大學實驗動物研究中心(為昆明種雄性小鼠)，體重范圍為24～26g，平均體重范圍為(25.01±0.81)g，所有小鼠在常規喂養1周后進行實驗。

1.2 大黃炮制方法

四份大黃(各100g)分別用清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法方法進行炮制，清炒法是通過中火力度將大黃的表面炒至焦黃色，取出放涼備用；清蒸法是將大黃加熱蒸透(一般蒸40min左右)，取出后在室溫條件下放涼備用；醋炒法是先將大黃加醋攪拌均勻(加醋比例為每100g大黃拌入18g醋)，悶透后放在鍋中翻炒，翻炒至大黃表面為焦黃色時取出放涼備用；醋蒸方法為先將大黃加醋攪拌均勻(加醋比例為每100g大黃拌入18g醋)，放入鍋中加熱蒸30min左右時取出放涼，干燥備用。

1.3 Ames實驗

污染物致突變性實驗方法參照柴寶娟、李祥、陳建偉等[5]文獻中的標準平皿摻入法，受試物生大黃濃度梯度為0.05、0.10、0.50、2.50、5.0ms/表面皿對突變性進行檢測，分別通過四種方法加工后的大黃均采用毒性最強的5.0ms/表面皿的濃度進行實驗，代謝活化組設陽性對照2-AF，20μg/表面皿，TA100非代謝活化時陽性對照疊氮鈉(NaN3)50pg/表面皿，其它菌株非代謝活化時陽性對照Dexon50μg/表面皿，陰性對照二甲基亞砜(DMSO)0.1mL/表面皿。

1.4 統計學方法

2 結果

清蒸[TA102的S9陽性值為(250.1±8.0)，陰性值為(244.5±9.1)]和醋蒸[TA97的S9陽性值為(245.7±8.0)，陰性值為(165.9±9.1)]的大黃樣品除醋蒸樣品在代謝非活化條件下呈陽性以外，對于菌株TA97、TA98、TA100、TA102的致突變性都呈現陰性結果，而清炒和醋炒大黃的結果仍呈現陽性，因此，通過Ames實驗結果表明清蒸炮制法與醋蒸炮制法對大黃的減毒作用比較明顯，而清炒炮制法與醋炒炮制法對大黃的減毒效果不明顯，具體數據統計結果,見表1。

表1 不同炮制方法對大黃的污染物致突變性實驗結果

3 討論

大黃一般被認為毒性較低，臨床應用比較安全，但服用過量可引起中毒，尤其是后下大黃毒性較大，可引起惡心、嘔吐、頭昏、腹絞痛、黃疸等。曾有報道[6]，30名受試者每日服大黃3次，3g/次，共5日，所有受試者均產生一系列胃腸反應，主要表現為腹瀉、腹痛、嘔吐、惡心、腸鳴，其中3例因嚴重腹瀉、腹痛、嘔吐而被迫臥床休息，經對癥處理后緩解。國外曾報道[7]1例長期服蒽醌類瀉藥，導致結腸膨脹，手術切除結腸標本可見變黑，肌層神經元消失，平滑肌萎縮，因此，大黃在應用前需進行炮制以達到減毒增效的目的。

污染物致突變性實驗一般被用來進行環境毒理學實驗分析，由本研究數據統計結果可以看出，對大黃中藥材的清蒸法和醋蒸法兩種加工方法能有效降低大黃遺傳毒性，董菊文獻[8]研究中得出以下推論：大黃在經過加工和炮制的過程中，以結合方式存在的蒽醌類物質減少，而游離狀態的蒽醌類物質增大，因此，瀉下作用有所減弱。魏高文等[9]應用高效液相色譜法證明了以結合方式存在的蒽醌物質中有一部分會轉化為游離狀態(表現為結合蒽醌峰面積減少，同時游離狀態蒽醌物質的峰面積明顯增大)。筆者在以上文獻研究的基礎上，結合自身實踐經驗，分析原因如下：清蒸法和醋蒸炮制方法能使大黃藥材在高溫環境作用下，使蒽醌化合物的苷鍵發生斷裂，產生毒性較弱的游離態蒽醌物質，降低大黃的遺傳毒性。

表1顯示了清蒸方法處理大黃后的毒性略高于醋蒸，主要原因是大黃中藥材在酸性條件下，部分蒽醌類物質可被還原為蒽芬或其它互變異構體(如恩酮等物質)，使氧化過程相對降低。總之，清蒸法和醋蒸法兩種炮制方法對大黃遺傳毒性能起到明顯降低的結果，而清炒和醋炒法并無明顯的減毒效果。通過對大黃藥材的蒸煮加工，能明顯降低大黃的遺傳毒性，這為大黃在臨床應用中的減毒作用奠定了一定的基礎，然而，本研究僅是對單純的大黃中藥材進行研究，關于大黃復方制劑的減毒還需進行進一步的實驗研究。

[1] 馮天師，王玉剛，柴玉爽，等.正品及偽品大黃藥效與毒性的比較研究[J].世界科學技術——中醫藥現代化，2012，14(4)：1863-1870.

[2] 馬德君，馮磊，蔣紅云，等.5種藥劑對大型溞的急性活動抑制毒性研究[J].安徽農業科學，2012，40(17)：9331.

[3] 胡曉丞，李亞洲，佟繼銘，等.大黃提取物對成年大鼠睪丸的毒性作用[J].中國藥理學與毒理學，2012，26(5)：658-663.

[4] 高建波，劉云.大黃顆粒對大鼠的長期毒性試驗研究[J].中國當代醫藥，2013，20(22)：4-6.

[5] 柴寶娟，李祥，陳建偉，等.大黃總提物的大鼠亞急性毒性[J].藥學與臨床研究，2011，19(4)：322-324.

[6] 溫曉燕，孟繁潔，靳英輝，等.中藥保留灌腸治療病毒性肝炎療效的Meta分析[J].中國循證醫學雜志，2013，13(4)：474-481.

[7] LING-NA ZENG，ZHI-JIE MA，YAN-LING ZHAO，et al.The protective and toxic effects of rhubarb tannins and anthraquinones in treating hexavalent chromium-injured rats：the Yin/Yang actions of rhubarb[J].Journal of hazardous materials，2013， 247(15)：1-9.

[8] 董菊.牛黃解毒片的遺傳毒性研究及其方藥配伍減毒作用初探[D].南京：南京中醫藥大學，2012.

[9] 魏高文，何麗萍，趙靜，等.大黃中蒽醌類衍生物的反相高效液相色譜分離條件優化的研究[J].光明中醫，2008，23(9)：1256-1257.

(責任編輯：姜付平)

2014-03-14

花勝利(1960-)，男，廣東省制藥工業公司主管中藥師，研究方向為藥物管理。

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1673-2197(2014)11-0027-02