電針對缺血性腦卒中后神經行為學評分及ERK1/2通路影響研究

葉曉倩，楊珊莉，江一靜

(1.福建中醫藥大學，福建 福州 350122；2.福建中醫藥大學附屬康復醫院，福建 福州 350003)

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電針對缺血性腦卒中后神經行為學評分及ERK1/2通路影響研究

葉曉倩1，楊珊莉2，江一靜2

(1.福建中醫藥大學，福建 福州 350122；2.福建中醫藥大學附屬康復醫院，福建 福州 350003)

目的：觀察電針曲池、足三里穴對大鼠神經行為學評分的影響及其與ERK1/2信號通路的關系。方法：采用隨機數字表法，將30只大鼠分為3組，分別為假手術組、模型組、電針組，每組各10只。造模后待缺血再灌注2h后予以神經行為學評估，每天1次；造模后第1天對電針組大鼠進行電針干預，30min/次/天，療程為3天，其余兩組大鼠不作任何處理； Western Blot檢測大鼠ERK1/2、p-ERK1/2表達情況并觀察ERK1/2通路激活情況。結果：電針干預3天后，電針組大鼠神經行為學評分顯著低于模型組(P<0.05)，差異具有統計學意義； Western Blot示電針組大鼠p-ERK1/2蛋白水平顯著高于模型組(P<0.05)，差異具有統計學意義。結論：電針干預治療后大鼠神經行為學明顯改善，可能與激活ERK1/2信號通路有關。

電針；缺血性腦卒中；ERK1/2信號通路

[1] 蘇芬英.中西結合治療月經不調 233 例觀察[J].中國社區醫師:醫學專業,2010,12(31):119.

[2] 嚴群.淺析中醫調理婦科月經失調的好處[J].醫學信息:中旬刊,2012,24(8):3798.

[3] 王巖,王晟,王萬卿.中西醫結合治療慢性盆腔炎 60 例療效觀察[J].時珍國醫國藥,2007,18(3):752-753.

[4] 胡錦霞.中西醫結合治療月經紊亂的成果分析[J].中國醫藥指南,2010,8(35):278-279.

[5] 黃瓊瑤.臺灣地區女性月經不調的中醫證候分析[D].廣州:廣州中醫藥大學,2013.

(責任編輯：尹晨茹)

池”“足三里”對促進中風患者康復有著良好的療效[2]。本研究以造模大鼠為研究對象，探析電針曲池穴、足三里穴發揮神經保護作用的機理，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 SPF級健康雄性SD大鼠50只(250～300g)，購自上海斯萊克動物有限公司(許可證號碼：假手術XX(滬)2007-0005)。

1.1.2 試劑 ERK1/2、p-ERK1/2、β-actin兔抗(Cell Signaling Technology)，HRP標記抗兔二抗(廈門鷺隆生物試劑有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 采用隨機數字表法，將30只大鼠分為3組，分別為假手術組、模型組、電針組，每組各10只，大鼠稱重并編號。各組大鼠體重和鼠齡均無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2.2 動物造模 術前實驗動物均禁食12h，腹腔注射3mL/kg水合氯醛進行麻醉，參照Zea-Longa線栓法[3]制備大鼠大腦動脈缺血再灌注模型：所有大鼠均選擇左側大腦中動脈區作為梗死側，假手術組大鼠僅分離動脈，不結扎、插線。動物放置于室溫(25℃)環境下蘇醒，正常飲食。

1.2.3 神經行為學評分 使用Zealonga 5評價方法[3]，根據大鼠缺血再灌注模型的神經癥狀將神經損傷程度分為0～4分，1～3分表明造模成功。

1.2.4 電針干預 ①假手術組：麻醉后大鼠回籠飼養，不予以任何治療；②模型組：造模后大鼠回籠飼養，不予以任何治療；③電針干預組：電針干預組大鼠取患側“曲池”“足三里”穴，選用G6805電針儀連接針灸針體，使用疏密波，以肢體輕輕抖動為度； 30min/1次/天，療程為3天，術后第1天開始。1.2.5 Western Blot 取大鼠左側皮質腦組織提取蛋白200mg，等量蛋白(50μg)上樣，SDS-PAGE電泳，轉膜后，5%脫脂奶粉封閉2h，分別加入抗ERK1/2、p- ERK1/2抗體孵育，4℃過夜，加入相應HRP標記抗兔二抗室溫放置1h。將PVDF膜置于化學發光成像儀上，避光條件下將配置好的ECL顯色液覆蓋于PVDF膜上，采用Bio-Rad Image軟件分析處理成像圖片。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 三組大鼠神經行為學評分比較

對三組大鼠的神經行為學進行評估，再灌注2h后，模型組大鼠神經行為學評分與電針組比較差異無統計學意義(P>0.05)；再灌注3天后，電針組大鼠神經行為評分顯著低于模型組(P=0.000<0.01)，差異具有統計學意義。詳見表1。

表1 三組大鼠神經行為學評分比較 ±s)

注：與模型組比較，*P<0.0。

2.2 三組大鼠ERK1/2信號通路表達比較

如圖1所示，各組大鼠t-ERK1/2含量比較差異無統計

學意義(P>0.05)；電針組大鼠p-ERK1/2表達量顯著高于模型組和假手術組(P<0.05)，差異具有統計學意義。電針組、模型組大鼠β-actin水平顯著高于假手術組(P<0.05)，差異具有統計學意義，詳見圖1。

圖1 電針對腦缺血再灌注模型大鼠ERK1/2信號通路表達影響

注：與模型組比較，*P<0.05。

3 討論

缺血性腦卒中屬于中醫“中風”的范疇，其基本病機為陰陽失調、氣血逆亂。祖國傳統醫學中素有“治痿獨取陽明”之說，曲池穴、足三里穴均為陽明經穴，陽明經為多氣多血之經，陽明經氣血通暢，正氣得以扶助，經絡得以疏通，則機體功能順利恢復。中風的病變部位主要在頭部，而曲池穴屬于手陽明經，足三里屬于足陽明經，手、足陽明經均循行至頭部，兩經之氣相互貫通、重合而行，協同治療中風。大量古文獻研究發現，曲池穴、足三里穴是治療中風時使用頻率較高的兩個穴位。功能性磁共振成像觀察也證實，針刺足三里穴可以激活大腦的大部分區域，主要包括額葉、顳葉、島葉、頂葉、扣帶回和小腦等，其中以顳葉激活最明顯[4]。本研究結果顯示，電針組大鼠神經行為學評分顯著低于模型組(P<0.05)，差異具有統計學意義，提示電針能夠改善大鼠神經行為功能。

ERK1/2通路與缺血性腦卒中的發生關系密切，其對受損大腦是發揮保護作用還是損害作用，目前尚存較大爭議。盡管如此，很多證據都肯定了ERK1/2通路激活對缺血性腦卒中大腦的保護作用。當腦缺血再灌注損傷發生后，激活ERK1/2通路信號后可抑制腦組織炎性反應的發生，促進骨橋蛋白(OPN)分泌，從而減少興奮性氨基酸釋放，增強IL-20表達，促進細胞增殖，保護缺血缺氧的腦組織。本研究結果顯示，電針組大鼠大腦p-ERK1/2蛋白表達量顯著高于模型組，提示電針干預可能通過激活ERK1/2通路而發揮腦保護作用。

綜上所述，電針干預腦缺血再灌注模型大鼠曲池、足三里穴后可降低其神經行為學評分，保護缺血缺氧的大腦組織，其機制可能與激活ERK1/2信號通路有關。

參考文獻：

[1] 中華醫學會神經病學分會腦血管病學組急性缺血性腦卒中診治指南撰寫組.中國急性缺血性腦卒中診治指南2010[J].中國全科醫學,2011,14(35): 4013-4017.

[2] 張成崗,李偉光,孫長青,等.氧化應激調控網絡在缺血缺氧性腦損傷干預治療中的作用[J].中國藥理通訊,2012,29(3):19-20.

[3] LONGA EZ,WEINSTEIN PR,CARLSON S,et al. Reversible middle cerebral artery occlusion craniectomy in rats[J].Stroke,1989(20):84-91.

[4] 肖葉玉,杜麗,洪璧楷,等.手法針灸足三里穴腦內效應磁共振成像研究[J].四川中醫,2007,25(1):98-101.

(責任編輯：尹晨茹)

2014-07-09

國家自然科學基金青年科學基金項目(81102628)

葉曉倩(1986-)，女 ，福建中醫藥大學碩士研究生，研究方向為腦血管疾病康復。

R245.3;R255.2

A

1673-2197(2014)20-0074-02

相關統計顯示[1]，約60%～80%腦卒中患者為缺血性腦卒中，其是由椎動脈狹窄或閉塞、腦供血不足導致的腦組織壞死的總稱，在老年人群中的發病率和病死率極高。目前，電針被運用于治療各種疾病中，包括改善腦卒中患者功能障礙，諸多學者也做了大量相關研究，進一步證實了針刺療法在中風康復治療中的有效性。 臨床實踐表明， 電針 “曲中醫認為，在非生理期，女性沖任氣血能保持相對平和，此時致病因素很難造成沖任、胞宮不足或瘀滯，因此未表現出腹痛等不適癥狀[5]。但在經期前后，女性機體血海慢慢充盈而后外泄，胞宮內的氣血從旺盛短暫轉變為虛弱，氣血的急劇變化使致病因素很容易乘虛而入，造成氣血運行不順暢，阻礙胞宮內經血下行，不通則痛。此外，沖任胞宮濡養不足也會造成患者腹痛。

中藥治療月經不調注重分期辨證，月經前期調養經血，月經期間活血養血，月經后益氣健脾。本研究結果表明，經過治療，兩組患者臨床癥狀均有一定程度的緩解，觀察組患者治愈率和總有效率分別為59.4%和96.9%，均顯著高于對照組的40.6%和84.4%，差異具有統計學意義(P<0.05)。提示中西醫結合治療月經不調患者臨床療效顯著，可將患者體內激素調整至正常水平，恢復月經周期的穩定性，優于單純西藥治療，值得臨床推廣應用。