玉液合劑質量標準研究

盧 瓊 ，盛 蓉 ，何珊珊 ，李 靜 ，譚 睿

（1.西南交通大學生命科學與工程學院，四川 成都 610031； 2.成都中醫藥大學附屬醫院，四川 成都 610072）

玉液合劑是由黃芪、粉葛、五味子、山藥等7味藥組方的中藥制劑，其處方為《醫學衷中參西錄》中經方玉液湯，益氣生津，潤燥止渴，具有升元氣以止渴的功效，主要用于氣不布津、腎虛胃燥之消渴，用于治療糖尿病、高血壓、甲亢、慢性胃炎、干燥綜合征、乳腺增生病、流行性出血熱多尿期、小兒夏季熱、尿崩癥、癌癥放療后等屬氣陰兩虛、中焦燥熱者。方中黃芪為君藥，粉葛為主證或主病的主要治療藥物之一，其活性成分為葛根素[1]。針對糖尿病臨床用藥的需要，經改劑型制成合劑。為對本制劑進行更好的質量控制，本試驗中在建立黃芪、粉葛的薄層色譜（TLC）定性鑒別的同時，還對其活性成分葛根素進行高效液相色譜（MPLC）法測定。方法學考察結果表明，所建立的方法可靠、準確、重現性、專屬性強，可作為玉液合劑的質量標準。

1 儀器與試藥

日本島津LC－6AD高效液相色譜儀；BS－110S型電子分析天平（北京賽多利斯電子天平有限公司）。黃芪甲苷對照品（批號為 110781－200613）、葛根素對照品（純度 96%，批號為110752－200912），均由中國藥品生物制品檢定所提供；玉液合劑樣品由成都中醫藥大學附屬醫院藥劑科提供（批號為120813，120814，120815）；硅膠G（薄層色譜用，青島海洋化工有限公司制造），甲醇（色譜純），其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別（TLC法）

2.1.1 黃芪[2－3]

取本品25 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌3次，每次20 mL，棄去氨液，正丁醇液再用正丁醇飽和的水充分洗滌3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取缺黃芪陰性樣品25 mL，同法制備缺黃芪陰性對照品溶液。另取黃芪甲苷對照品1.03 mg，加甲醇1 mL使溶解，作為對照品溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗，分別吸取供試品溶液、陰性對照品溶液各5 μL及對照品溶液2 μL，分別點于同一以0.2%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇 －水（12 ∶2.5 ∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10% 的硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點，紫外光燈（365 nm）下檢視顯相同的橙黃色熒光斑點，陰性對照無干擾（見圖1A和B）。

2.1.2 粉葛[2－5]

取本品20 mL，蒸干，殘渣加30%乙醇20 mL，超聲提取30 min，離心（轉速2 500 r/min）10 min，取上清液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取缺粉葛陰性樣品20 mL，同法制備缺粉葛陰性對照品溶液。另取葛根素對照品1.01 mg，加甲醇1 mL使溶解，作為對照品溶液。照TLC法[2010年版《中國藥典（一部）》附錄VIB]試驗，分別吸取供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL及對照品溶液5 μL，分別點于同一以0.2%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水（6∶5∶3∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾（見圖1C）。

2.2 葛根素含量測定（HPLC法）[6-8]

2.2.1 色譜條件

色譜柱:大連中匯達 Hypersil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相:甲醇 －水（22 ∶78）；流速:1.0 mL/min；檢測波長:250 nm；柱溫:30℃。

2.2.2 溶液制備

精密稱取葛根素對照品2.900 mg，置50 mL容量瓶中，加30% 乙醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液（0.055 68 g /mL）。精密量取樣品溶液10 mL，置50 mL容量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液作為供試品溶液。取不含粉葛的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗:按擬訂的色譜條件，精密吸取2.2.2項下3種溶液各10 μL，注入液相色譜儀。結果供試品溶液色譜中葛根素色譜峰與相鄰色譜峰分離度大于1.5，理論塔板數按葛根素峰計算不低于4 000，陰性無干擾（見圖2）。

圖1 薄層色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密稱取葛根素對照品0.010 0 g，置50 mL容量瓶中，加30%乙醇定容至刻度，即得0.192 0 g/mL的母液。分別精密量取母液 0.5，1.0，2.0，4.0，2.5 mL，置 100，50，25，25 mL，10 mL容量瓶中，加30%乙醇定容至刻度，搖勻，即得葛根素對照品溶液（質量濃度分別為 0.000 96，0.003 84，0.015 36，0.030 72，0.048 00 mg /mL）。照擬訂的色譜條件，分別精密吸取各對照品溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進樣量為橫坐標、色譜峰峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程r＝3 678 857 X ＋2 211，r＝1.000 0(n＝5)。結果表明，葛根素進樣量在0.0 096～0.4 800 μg范圍內與峰面積有良好的線性關系。

精密度試驗:按擬訂的色譜條件，精密吸取質量濃度為0.04 800 g/L的葛根素對照品溶液10 μL，連續進樣6次，測定峰面積。結果平均峰面積為 1 773 260，RSD ＝0.20%（n＝6）。表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:按擬訂的色譜條件，精密吸取同一供試品溶液10 μL，于 0，2，4，8，12，24 h 注入液相色譜儀，記錄峰面積。結果平均峰面積為546 139，RSD＝0.48%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗:精密量取同一批樣品溶液2 mL，共6份，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。結果葛根素平均含量為 0.075 41 g/L，RSD ＝0.44%（n＝6），表明該方法重現性良好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的樣品溶液（0.075 41 g/L）1 mL，共6份，分別精密加入對照品溶液（0.0 144 g/L）5 mL，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，按擬訂的色譜條件，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算回收率。結果見表1。

表1 葛根素加樣回收試驗結果（n＝6）

2.2.4 樣品含量測定

取3批樣品，每批2份，分別精密量取2 mL，依法制備供試品溶液，精密吸取10 μL，按擬訂的色譜條件測定，計算葛根素的含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定（g/L）

2.3 粉葛飲片中葛根素含量測定

取粉葛飲片粉末（過三號篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇250 mL，密塞，稱定質量，加熱回流30 min，放冷，再稱定質量，用30%乙醇補足減失的質量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過。取續濾液，按 2.2.1 項下色譜條件測定，結果見表3。可見，樣品中試3批所用的粉葛飲片中葛根素含量為 3.066 mg/g，符合 2010 年版《中國藥典（一部）》粉葛項下飲片的相關規定。

表3 粉葛飲片中葛根素含量測定(n＝3)

3 討論

在定性鑒別時，除對黃芪和粉葛進行鑒別外，對處方中的山藥和五味子亦進行了研究。其中對山藥的鑒別嘗試了環己烷－丙酮（10 ∶3）和乙酸乙酯 －甲醇 －濃氨試液（9 ∶1 ∶0.5）兩種展開系統，利用藥典提取方法進行提取，最后均未得到相應斑點，考慮到可能是處方中藥味多糖含量較高，可能影響了山藥有效成分的分離鑒別，故舍棄了該味藥材的鑒別。五味子利用藥典系統即在與對照品色譜相應的位置上均顯相同顏色斑點，但在后續試驗中發現，在與五味子甲素相近處有一明顯斑點，影響了薄層展開的穩定性和重現性，需進一步考察，故五味子薄層鑒別暫不列入文中。

在含量測定時，對供試品制備中的提取溶劑進行了考察，分別采用30%乙醇、無水乙醇、30%甲醇、無水甲醇提取，結果表明采用30%乙醇提取效果好。直接采用溶劑稀釋法已能達到較高的葛根素提取率，簡便、經濟，故未對樣品的提取方法進行考察。

由樣品及粉葛藥材的含量測定結果可知，粉葛藥材中葛根素含量較低，剛剛符合符合2010年版《中國藥典（一部）》粉葛項下飲片相關規定（葛根素含量大于0.3%），這也導致了樣品中葛根素含量不高。因此，應在生產中制訂內部標準，控制粉葛藥材中葛根素量，以保證樣品的療效。

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