高效液相色譜法測定宮炎康顆粒中芍藥苷含量

楊 玲，楊 浩

（陜西省腫瘤醫(yī)院，陜西 西安 710061）

宮炎康顆粒是由當(dāng)歸、赤芍、川芎、北敗醬、香附、柴胡、澤蘭、紅花等12味藥材經(jīng)加工制成的顆粒劑，具有活血化瘀、解毒消腫之功效，臨床上主要用于慢性盆腔炎[1]。目前該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有鑒別項，未建立有效成分的含量測定，其主要有效成分是芍藥苷，經(jīng)參考相關(guān)文獻(xiàn)報道[2－8]，筆者采用高效液相色譜法對芍藥苷的含量進(jìn)行測定，該法操作簡便、分離良好、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器和試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀；Sartorius BS224S型電子天平；KQ3200DE型數(shù)控型超聲波清洗器。芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110736－200833）；宮炎康顆粒（市售品，批號為 20120506，20121130，20110921，規(guī)格為 8.30 mg /袋）；乙腈、甲醇均為色譜純，水為哇哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent TC C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；檢測波長:230nm；流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液（15∶85）:流速:0.8mL/min；進(jìn)樣量:10 μL；柱溫:30℃。在此色譜條件下，參照 2010年版《中國藥典（一部）》赤芍含量測定項下將理論板數(shù)，按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于3 000[9]。色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的芍藥苷對照品[7]0.005 2 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每1 mL溶液中約含芍藥苷30 μg）。取裝量差異項下本品，研細(xì)，精密稱定0.5 g，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率150 W，頻率40 kHz）20 min，取出放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，以0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方另取除赤芍藥材外的其他藥味，照供試品溶液處理方法制備成不含赤芍的陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗:分別取2.2項下3種溶液，注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量10 μL，記錄色譜圖。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜主峰相同位置上有保留時間一致的峰出現(xiàn)，而陰性對照品溶液色譜在相應(yīng)位置沒有峰出現(xiàn)，(見圖1)，表明該法專屬性強(qiáng)。

線性關(guān)系考察:精密稱取芍藥苷對照品，加甲醇配制成質(zhì)量濃度依次為 7.6，15.2，30.4，60.8，121.6 μg /mL 的溶液，各吸取10μL，依次進(jìn)樣，記錄色譜圖，以對照品溶液質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝1.4×106X－6 070，r＝0.999 6(n＝5)。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在 0.08～1.21 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一對照溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的 RSD為0.8%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取新制備的供試品溶液（批號為20120506），分別在 0，2，4，6，8 h 時進(jìn)樣。結(jié)果進(jìn)樣量為 10 μL，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的 RSD為0.9%(n＝5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:分別精密稱取樣品（批號為20120506）5份，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果的 RSD為0.4%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:分別取已知芍藥苷含量（批號為20120506）的供試品內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉適量（約為含量測定的1/2量）精密稱定，共5份，分別置具塞三角瓶中，精密加入相當(dāng)于含量1/2量的芍藥苷對照品溶液（0.152 g /L，1.5 mL），按含量測定方法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結(jié)果（n＝5）

2.4 樣品含量測定

取對照品及3批樣品，依法制備對照品溶液及供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算含量。結(jié)果批號為20120506，20121130，20110921的3批樣品中，芍藥苷平均含量為 8.29，7.87，8.00 mg/袋。

3 討論

赤芍為宮炎康顆粒方中的主要藥味，本試驗制訂的赤芍含量測定方法簡單、重復(fù)性好、精密度高。

取芍藥苷對照品溶液，在200～400 nm波長處掃描，結(jié)果芍藥苷在230，266，349 nm波長處處均有最大吸收，為與藥典規(guī)定一致。故確定以230 nm為測定波長。

比較了多種流動相，流動相A為甲醇－0.05 mol/L磷酸二氫鉀（33 ∶67），流動相 B 為乙腈 －0.1% 磷酸溶液（15 ∶85），流動相C為乙腈－0.1%磷酸溶液（10∶90），最終選擇了流動相B，其分離好，柱溫低，理論板數(shù)高，供試品主峰與雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離，保留時間適中。

本試驗中還比較了樣品超聲處理時間，分別取10，20，30 min，結(jié)果超聲20 min與超聲30 min芍藥苷的含量無明顯差異，即超聲20 min可提取完全，故超聲處理時間定為20 min。

參考文獻(xiàn):

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