不同產地芫花根皮藥材中西瑞香素含量比較

王 瑞 ，張朋俊 ，翟曉曉 ，徐 雯 ，王 沛 ，薛冰洋 ，張 穎 ，李曉天

(1.鄭州大學藥學院，河南 鄭州 450001； 2.漯河醫學高等專科學校第一附屬醫院，河南 漯河 462000)

芫花 Dephe genkwa Sieb.et Zucc.為瑞香科植物，始載于《神農本草經》，列為下品。其為傳統瀉水逐飲藥，傳統用于治療水腫脹滿、胸腹積水等癥狀，現代醫學多用于抗炎、免疫調節、抗風濕等[1－3]。其主要化學成分為黃酮類、香豆素類、二萜原酸酯類、綠原酸類、木脂素類化合物等[4]。西瑞香素屬香豆素類化合物，是其有效成分之一，具有抗炎、抗菌、抗腫瘤的作用，同時也能明顯改善小鼠心肌營養血流量，明顯降低心肌耗氧量[5－9]。此外，其是治療風濕性、類風濕性關節炎藥物消絡痛片、消絡痛膠囊含量測定的標準物質，對于芫花根皮作為配伍用藥用于風濕病方面的治療具有重要意義。目前，關于芫花方面的研究較多，且大部分集中于芫花酯甲、芫花素[10－11]，而系統比較不同產地芫花根皮藥材中西瑞香素含量的研究卻未見報道。本試驗中采用高效液相色譜（HPLC）法對不同產地芫花根皮中西瑞香素進行含量測定，為評價不同產地藥材質量，也為臨床采購藥材提供了一定的依據。

1 儀器與試藥

Ultimate 3000型高效液相色譜系統，包括四元泵、自動進樣器、在線脫氣機、柱溫箱、自動進樣器和紫外檢測器（美國熱電公司）；XK96－A型快速勻漿機 （姜堰市新康醫療器械有限公司）；Metter Toledo XS－105型分析天平 （瑞士梅特勒－托利多公司）；anke TGL－16G型離心機 （上海安亭科學儀器廠）；Milli－Q Advantage A 10 systems 超純水機(Millipore Inc，USA)。西瑞香素對照品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號為111758－201101）；甲醇（色譜純），磷酸（分析純），無水乙醇 （分析純），水為超純水。芫花根皮藥材共12批，經鄭州大學中藥系潘成學教授鑒定為芫花根皮正品藥材。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Prodigy 5u 100A C18柱（250 mm ×4.60 mm，5μm，美國菲羅門公司），同時配備有C18預柱（KJO－4282，美國菲羅門公司）；流動相：甲醇 －0.2% 磷酸水溶液（55 ∶45）；流速：1.0 mL /min；進樣量：20 μL；柱溫：30 ℃ ；紫外檢測波長：46 nm；運行時間：20 min。西瑞香素對照品及樣品甲醇提取液色譜圖見圖1，可見，西瑞香素的保留時間在8.8 min附近。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取西瑞香素對照品適量，加甲醇定容至50 mL容量瓶中，制成每1 mL含20 μg西瑞香素溶液，作為對照品溶液，定容后超聲處理3 min。取芫花根皮藥材粉末0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，密塞，稱重，超聲處理1 h，冷卻至室溫，稱重，用甲醇補足損失的質量，搖勻后取出濾液，4 000 r/min離心10 min，取上清液過0.22 μm濾膜，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：取2.2項下西瑞香素對照品溶液不同體積配制成 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 μg/mL 系列濃度進行進樣，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標、質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為 Y＝1.688 3 X－0.356 1，r＝0.998 4(n＝6)。結果表明，西瑞香素質量濃度在 0.5～20 μg/mL范圍內與峰面積具有良好的線性關系。

重復性試驗：取同一產地芫花根皮藥材6份，按2.2項下方法制備供試品溶液，進樣分析，記錄色譜圖。結果的 RSD為1.32%，表明該方法重復性好。

穩定性試驗：取同一芫花根皮供試品溶液，在室溫下分別放置 0，2，4，6，8，12，24 h 后進行進樣分析，記錄色譜峰面積。結果的 RSD為1.24%，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

精密度試驗：精密吸取對照品貯備液5 mL，用甲醇稀釋至10 mL（10 μg/mL），連續測定5次。結果的 RSD ＝0.42% （n ＝5），表明該方法的精密度良好。

加樣回收試驗：精密稱取芫花根皮（河南登封產）6份，每份0.5 g，按2.2項下方法制備供試品溶液，進樣測定。取供試品溶液各1 mL，分別加入不同體積西瑞香素對照品溶液，進樣分析。結果見表1。

表1 西瑞香素加樣回收試驗結果(n＝6)

2.4 樣品含量測定

取各產地藥材各3份，按2.2項下方法制備供試品溶液。精密量取供試品溶液及對照品溶液依法進樣，按外標法測定含量。結果表明，芫花根皮中西瑞香素含量以河南登封產最高，達5.37%；廣州產含量最低，為3.19%；禹州與安徽亳州產居中。詳見表2。

表2 12批樣品中西瑞香素含量測定結果

3 討論

本試驗中，流動相的pH對分離效果影響較大。以甲醇及磷酸水溶液作為流動相，pH越低，分離效果越好，考慮到柱子的耐酸能力以及保留時間，采用0.2%的磷酸水溶液與甲醇配比作為流動相。對西瑞香素進行全波長掃描，發現西瑞香素在346 nm波長處有最大吸收，因此選擇346 nm作為檢測波長。

本試驗中，對河南登封市售品芫花根皮藥材分別應用不同的溶劑及不同的方法來進行提取，分別采用乙醇、80%乙醇、甲醇進行超聲提取1 h和乙醇浸泡24 h進行提取，結果提取相對含量分別為 3.05% ，4.81% ，5.37% ，3.87% ；對廣州市售芫花根皮藥材同法采用不同的溶劑以及不同的方法進行提取，結果提取相對含量分別為 0.07% ，0.94% ，3.02% ，1.27% 。可見，甲醇的提取效率較高，且相對提取時間較短，因此本試驗中采用甲醇超聲提取的方法。

對不同產地的芫花根皮藥材進行含量測定，發現不同地區的藥材該成分含量差別較大，可能與不同地方的環境不同具有密切的關系[12]。安徽屬北亞熱帶濕潤氣候，廣州屬南亞熱帶典型季風海洋氣候，而河南屬黃河流域暖溫帶半干旱氣候，不同的氣候條件導致其所含有效成分含量不同。相比而言，河南地區芫花根皮中西瑞香素的含量較高，而廣州地區藥材中西瑞香素的含量較低?？梢姡谶x購藥材的時候應注重藥材的內在質量、有效成分含量，從而保證臨床用藥的安全性與有效性。

致謝：特別感謝鄭州大學藥學院生藥系潘成學教授對試驗用藥材進行相關鑒定。

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