弓形蟲病免疫學診斷方法研究進展

摘 要：弓形蟲病是一種分布廣泛、危害嚴重的人獸共患病。國內外學者在弓形蟲病診斷方面進行了大量研究。目前，檢測抗弓形蟲抗體或循環抗原的免疫學診斷方法主要有染色試驗（DT）、凝集試驗（AT）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、免疫膠體金技術等。文章就該病的免疫學診斷方法的研究進展加以概述。

關鍵詞：弓形蟲病； 免疫學； 診斷方法

中圖分類號：R382.5 文獻標識碼：A 文章編號：1006-3315（2014）07-155-001

弓形蟲（Toxoplasma）是一種專性細胞寄生性原蟲，具有廣泛的宿主群并在世界范圍內流行，引起人獸共患寄生蟲病。免疫學診斷方法具有敏感性高，特異性強，操作簡便快速等優點，是目前國內外診斷弓形蟲病的主要方法，主要有染色試驗（DT）、凝集試驗（AT）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、免疫膠體金技術等。

一、染色試驗

DT曾被視為是弓形蟲病病原特有的血清學檢測方法，具有良好的特異性敏感性和重復性。活滋養體在致活因子的參與下，與樣本的特異性的抗體相互作用，使蟲體表膜破壞而不被美蘭所染。但由于在進行檢查時必須使用活的、有毒力的速殖子而存在巨大的危險性，限制了其應用[1]。

二、.凝集試驗

直接凝集試驗（DAT）簡便快速，陽性反應出現時間比間接血細胞凝集試驗（IHA）早。試驗以甲醛固定的弓形蟲懸液作為抗原與被檢血清直接進行反應。間接血細胞凝集試驗（IHA）主要建立在抗原抗體特異性結合形成抗原抗體復合物的基礎之上。優點是簡便、快速、靈敏，已廣泛應用于流行病學調查[2]。

三、間接熒光抗體試驗

間接熒光抗體試驗（IFAT）是以完整的弓形蟲為抗原，采用熒光標記的二抗檢測特異IgM和IgG。IFAT具有特異、敏感、快速、重復性好等優點，與ELISA對豬弓形蟲病的IgG抗體檢測結果一致性較好[3]，但判定結果易帶主觀性。

四、酶聯免疫吸附試驗[4]

ELISA是當前診斷弓形蟲感染應用最廣的技術。利用酶的催化作用和底物放大的反應原理，提高了特異性抗原抗體免疫反應檢測的敏感性。

1.葡萄球菌A蛋白ELISA

陳子慶等以弓形蟲蟲體抗原包被聚苯乙烯酶標板，建立了葡萄球菌A蛋白ELISA （SPA- ELISA）檢測抗弓形蟲抗體的方法。經與弓形蟲可溶性抗原包被結果對照，兩種方法無顯著性差異。

2.斑點ELISA

斑點ELISA（Dot-ELISA）比常規ELISA更靈敏、簡便，取材量少，因而迅速被推廣應用。國外1986年已應用于弓形蟲病診斷。但其也有不足，主要是結果判定比較主觀，特異性不夠高等。

3.親和素-生物素-ELISA

郭志剛等用親和素-生物素-ELISA（ABC- ELISA）對弓形蟲試驗感染不同時期的豬血清特異IgG進行檢測。

4.PCR-ELISA

李健等將生物素標記的PCR產物與地高辛標記的特異性探針雜交，再通過酶免顯色反應測出OD值，以判斷弓形蟲感染情況。

五、免疫膠體金技術

目前，利用膠體金標記技術診斷弓形蟲病的方法有免疫金銀染色法（IGSS）、快速斑點免疫金滲濾法（DIGFA）和膠體金免疫層析法（GICA）。

1.免疫金銀染色法

免疫金銀染色法（IGSS）是一種較新的免疫診斷方法，其原理是膠體金探針與相應抗原或抗體形成抗原抗體復合物，經過銀顯影處理后，使金顆粒周圍吸附大量銀顆粒，光鏡下即可見褐色金銀顆粒。由于銀染色對金顆粒的信號有放大作用，所以敏感性很高。

2.快速斑點免疫金滲濾法

快速斑點免疫金滲濾法（DIGFA）是應用微孔膜[硝酸纖維素（NC）膜]作載體的免疫檢測技術，先將抗原或抗體點于NC膜上，封閉后加待測樣品，洗滌后用膠體金探針檢測相應的抗原或抗體，通過金顆粒放大免疫反應系統，使反應結果在固相載體NC膜上顯示出來。并將其裝入充滿吸水材料的滲濾裝置（塑料小盒）中，小盒分為底和蓋，蓋上一般有直徑約0.5cm～0.8 cm的小孔。研究表明，此法比間接過氧化物酶法更敏感。

3.膠體金免疫層析法

免疫層析技術是近年來迅速發展的一種將膠體金標記技術、免疫檢測技術、層析分析技術、單克隆抗體技術和新材料技術等多種方法有機結合在一起的一種新型診斷技術。目前應用范圍也日益廣大。

六、展望

近幾年通過大量的試驗研究，弓形蟲病診斷研究方面已取得較大進展，一些研究成果已經或正在對弓形蟲病的防控產生積極影響，但是今后應為檢測提供可靠的診斷抗原或抗體，加快解決試劑的標準化問題，建立綜合的檢測系統來彌補單一檢測系統的不足。

參考文獻：

[1]趙恒梅，徐克繼，楊慧珍.免疫酶染色試驗診斷弓形蟲病的研究[J]中國人獸共患病雜志，1991，7（5）：13-14

[2]陳義民，李觀娣，李寶琛.實驗弓形蟲病的間接血凝診斷試驗[J]中國獸醫科技，1980，（4）：10-15

[3]張述義，魏梅雄，張月麗，等.直接凝集試驗（DAT）檢測弓形蟲 IgG抗體的研究[J]中國人獸共患病雜志，1991，7（5）：10-12

[4]張德林，李學瑞，杜重波.用弓形蟲代謝分泌抗原制備間接血診斷試劑的研究[J]中國獸醫科技，2003，33（9）：15-18