多潘立酮片人體生物等效性研究

摘要：目的：探討利用高效液相色譜的聯(lián)用法來對口服多潘立酮片的患者血藥濃度以及參比制劑和受試制劑的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)情況，研究制劑的等效性和利用度。方法：隨機(jī)選取設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)為30例男性健康受試者，口服受試制劑以及多潘立酮片，并測驗(yàn)其濃度。結(jié)果：對兩種制劑中多潘立酮參數(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換以后進(jìn)行方差分析，t檢驗(yàn)，得出可信區(qū)間為95.17%～124.31%，T1=5.34，T2=3.28，t0.1（22）=1.69，而AUC90%可信區(qū)間為101.98%～121.13%，T1=6.73，T2=2.54，t0.1（22）=1.69，上述結(jié)果與SFDA相關(guān)要求相符，因此兩種制劑參數(shù)生物等效。結(jié)論：本研究選擇的兩種制劑藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與參考文獻(xiàn)報(bào)道的一致，但是因?yàn)槎嗯肆⑼帩舛染哂袝r(shí)間曲線，并且在不同的受試者中具有一定的差異性，所以普遍表現(xiàn)是受試制劑在對應(yīng)濃度方面要大于參比制劑，試驗(yàn)效果良好。

關(guān)鍵詞：多潘立酮片；人體生物；等效性

【中圖分類號】R914.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號】1002-3763（2014）02-0007-01

多潘立酮片是一種針對嘔吐癥狀能產(chǎn)生強(qiáng)力抵抗性的促動(dòng)藥，主要是通過拮抗外周多巴胺D2受體，對胃腸道產(chǎn)生作用，從而增強(qiáng)胃蠕動(dòng)，排空腸胃，預(yù)防出現(xiàn)膽汁反流的情況，保護(hù)胃液的分泌不受到影響，同時(shí)對消化不良癥狀以及飲食、感染或是放射性治療引發(fā)的嘔吐惡心癥狀有很好的治療作用。臨床實(shí)踐證明，多潘立酮能夠在人體內(nèi)迅速吸收，很少出現(xiàn)不良反應(yīng)，但是利用率卻較低。本研究對此展開探討，以提供更多的臨床參考依據(jù)。

資料與方法

1.1一般資料

本研究的受試制劑是多潘立酮片，參比制劑是多潘立酮對照品、文拉法辛對照品，以超純水作為試驗(yàn)用水，色譜純?nèi)〖姿帷⒓状肌⒋姿岬龋溆嗟氖欠治黾儭＿x用API4000LC-MS/MS聯(lián)用儀作為實(shí)驗(yàn)儀器，此外還包括電子天平、高速離心機(jī)、超純水機(jī)以及離心濃縮儀。

1.2方法

1.2.1質(zhì)譜色譜形成條件：（1）ESI源作為離子源，其電壓保持在5500V，溫度為500℃，采用正離子式進(jìn)行檢測，多反應(yīng)監(jiān)測進(jìn)行掃描，多潘立酮[M+H]+，（m/z）426/175.1為質(zhì)荷比。（2）AgilentZOBAXSBC18（3.0mm×100mm，3.5μm），流動(dòng)相甲醇4mmol/L，含1%0甲酸的醋酸銨為55：45，流速為400μl/min，保持30℃的柱溫[1]。

1.2.2受試者條件要求：選取30例健康的男性，年齡在23歲～32歲之間，身高在159cm～186cm之間，體重在50kg～77kg之間，經(jīng)過檢查發(fā)現(xiàn)30例受試者在肝功能和腎功能、心電圖等方面都顯示正常，達(dá)到了受試者的要求。經(jīng)過簽署知情同意書，審批以后成為合格受試者。

1.2.3用藥情況和樣品采集：30例受試者在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的前兩周要禁煙禁酒，不能服用其他的藥物。交叉實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)要符合單劑量以及二乘二原則，也就是將30例受試者隨機(jī)分成2組，保證以1周為交叉間隔時(shí)間，讓受試者在早上8點(diǎn)200mL溫水口服20mg參比制劑或是試驗(yàn)制劑，2小時(shí)以后飲水，4小時(shí)以后進(jìn)食，在進(jìn)行服藥和取血的時(shí)候讓受試者在I期臨床的病房中進(jìn)行密切觀察。在進(jìn)行藥物的服用之前要對受試者取4ml的空白血樣，服藥以后進(jìn)行4ml靜脈采血分為為0.1667、0.333、0.5、0.75、1、1.5、2、3、5、8、12、24、30、36小時(shí)，采用肝素抗凝試管收集，離心分離血漿并將其存于-75℃的待測血藥濃度[2]。

1.2.4血漿樣品的存放條件：加入0.5ml的血漿樣品到10ml的具塞玻璃試管當(dāng)中，加入1.026μg/ml內(nèi)標(biāo)文拉法辛溶液50μl，進(jìn)行10s旋渦并加入0.5mol/L的氫氧化鈉堿液100μl混勻，4ml乙酸乙酯并振蕩3min，保持10min300r/min離心，將上層有機(jī)相3.5ml取下，在40℃的濃縮離心儀揮干，同時(shí)加入100μl含50%的甲醇溶液進(jìn)行復(fù)溶，1min旋渦，5min2000r/min離心，將上層清液吸取以后做LC-MS/MS分析取5μl。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究采用BAPP3.0軟件進(jìn)行處理，計(jì)算相對生物利用度以及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，測出被試制劑和參比制劑的濃度，通過梯形法計(jì)算出轉(zhuǎn)換后的雙單側(cè)和方差，t檢驗(yàn)，最后對參比制劑以及被試制劑是否生物等效進(jìn)行評價(jià)。

結(jié)果

2.1方法學(xué)考證

2.1.1特異性分析

在LC-MS/MS條件下，將多潘立酮保留2.5min的時(shí)間，而內(nèi)標(biāo)文拉法辛則保留3min時(shí)間，保證多潘立酮以及內(nèi)標(biāo)峰形良好，不受到雜峰影響，并保持平穩(wěn)的基線。

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)線性及曲線范圍

以0.321μg/L～82.24μg/L為標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，其中0.321μg/L為最低定量限。

2.1.3準(zhǔn)確度和精密度

0.648μg/L表示低，6.48μg/L表示中，64.8μg/L表示高，這三種濃度的日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別是7.04%，2.91%，1.90%，日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別是9.25%，7.81%，6.18%，因此，這三種濃度的多潘立酮準(zhǔn)確度保持在97.29%～101.75%之間。

2.1.4回收率提取

三種濃度的多潘立酮回收率分別為88.24%、79.78%以及67.77%，內(nèi)標(biāo)文拉法辛的回收率則是92.19%。

2.1.5介質(zhì)效應(yīng)

經(jīng)過LC-MS/MS介質(zhì)效應(yīng)分析，三種濃度的多潘立酮介質(zhì)效應(yīng)分別是100%、96.63%、99.25%，而內(nèi)標(biāo)文拉法辛的介質(zhì)效應(yīng)則為98.09%。

2.1.6樣品穩(wěn)定性分析

從上述的實(shí)驗(yàn)可以得出，低、中、高三種濃度的多潘立酮血漿樣品處在室溫下放置了24小時(shí)的情況下，經(jīng)過反復(fù)的3次凍融，并在-75℃條件下放置15天，穩(wěn)定性都能保持良好。

2.2人體藥動(dòng)學(xué)

2.2.1藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

經(jīng)過BAPP3.0進(jìn)行程序處理后，參比制劑以及受試制劑的血漿藥物濃度用非房室模型估算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，30例健康受試者的詳細(xì)情況見下表1。

2.2.2生物等效性研究

對兩種制劑中多潘立酮參數(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換以后進(jìn)行方差分析，t檢驗(yàn)，得出可信區(qū)間為95.17%～124.31%，T1=5.34，T2=3.28，t0.1（22）=1.69，而AUC90%可信區(qū)間為101.98%～121.13%，T1=6.73，T2=2.54，t0.1（22）=1.69，上述結(jié)果與SFDA相關(guān)要求相符，因此兩種制劑參數(shù)生物等效。

討論

對于多潘立酮血藥濃度的分析方法很多的文獻(xiàn)都有記載，包括高效液相色譜法等，但是很多方法操作比較繁瑣，線性的范圍比較窄，靈敏度也比較低，而且實(shí)驗(yàn)的周期比較長。在本研究中采用的是高效LC-MS/MS聯(lián)用法檢測，操作比較簡單，具有很高的靈敏度，可以將其廣泛應(yīng)用于多潘立酮的臨床藥動(dòng)學(xué)研究工作中。

本研究選擇的兩種制劑藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與參考文獻(xiàn)報(bào)道的一致，但是因?yàn)槎嗯肆⑼帩舛染哂袝r(shí)間曲線，并且在不同的受試者中具有一定的差異性，所以普遍表現(xiàn)是受試制劑在對應(yīng)濃度方面要大于參比制劑，導(dǎo)致的原因很有可能是因?yàn)槭茉囍苿┰谌艹龆确矫姹葏⒈戎苿┮蟆４送猓诒狙芯康腎期臨床觀察中醫(yī)療監(jiān)護(hù)受試者，并沒有任何的藥物不良反應(yīng)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)效果良好。

參考文獻(xiàn)：

[1]吳婷.多潘立酮片人體生物等效性研究[J].中國藥物與臨床，2011，12（06）：22-23.

[2]趙剛.多潘立酮片的人體生物等效性研究[J].中國藥師，2012，11（12）：18-19.