HPLC法測定救心丸中蟾酥的含量

摘要：目的：建立救心丸的中蟾酥的含量測定方法。方法 ：采用高效液相色譜法對蟾酥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量進行了含量測定。結果 用高效液相色譜法對華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量進行了含量測定，華蟾酥毒基進樣量在0.40832～2.04160μg之間有良好的線性關系；脂蟾毒配基在0.4204～2.1020（μg）之間有良好的線性關系；華蟾酥毒基平均回收率為98.3%，RSD=1.2%；脂蟾毒配基平均回收率為98.6%，RSD=1.1%。結論 ：方法專屬性強，重現性好，回收率良好，可有效控制救心丸的產品質量。

關鍵詞：救心丸；HPLC；華蟾酥毒基；脂蟾毒配基；含量測定

【中圖分類號】R914.1 【文獻標識碼】A【文章編號】1002-3763（2014）-0121-02

救心丸收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十九冊，具有活血化瘀、化痰通絡的功能，由八味人工麝香、人工牛黃、珍珠、人參莖葉總皂苷、牛膽膏粉、冰片、蟾酥、三七膏粉藥材組成。目前質量標準中尚無含量測定，僅有顯微、理化鑒別，為更好的控制產品質量，本實驗采用HPLC法對方中蟾酥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量進行了含量測定，能進一步控制產品質量。

試驗儀器與材料

1.儀器與試藥

儀器：島津LC-10ADvp高效液相色譜儀；SPD-M10Avp二級管陣列檢測器；色譜柱：安捷倫Extend-C18，（150×4.6mm，5μm）。

試劑：乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。對照品：華蟾酥毒基、脂蟾毒配基為中國藥品生產制品檢定所提供（批號分別為：803-9202、718-9205供含量測定用）。

2 方法與結果

2.1色譜條件的確定 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 以0.5%磷酸二氫鉀-乙腈（50：50）流動相（用磷酸調PH值為3.2），檢測波長為296nm，理論板數按華蟾酥毒基峰計算應不低于4000

2.2陰性干擾性試驗 按處方比例制備缺蟾酥陰性樣品，按含量測定項下供試品溶液的制備方法制成缺蟾酥的陰性對照溶液，并進行含量測定。結果陰性對照溶液在華蟾酥毒基峰和脂蟾毒配基峰相同保留時間處無吸收峰。

2.3、對照品溶液的制備 稱取經五氧化二磷減壓干燥24小時的華蟾酥毒基對照品、脂蟾毒配基對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液，即得。

2.4、供試品溶液的制備 取重量差異項下的本品30粒，研細，取約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，密塞，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.5、精密度的考察

2.5.1 華蟾酥毒基精密度的考察 精密吸取華蟾酥毒基對照品溶液（0.05104mg/ml）20μl，注入液相色譜儀，重復5次，測定峰面積，結果見表1

2.6、線性范圍的考察

2.6.1華蟾酥毒基線性范圍的考察 分別精密吸取對照品溶液（0.10208mg/ml）2ml，4ml，6ml，8ml，10ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取20μl，注入高效液相色譜儀，測得峰面積。見表3

2.7、穩定性考察 稱取樣品約0.25g，照救心丸含量測定項下供試品溶液的制備處理，精密吸取同一供試品溶液20μl，分別在0，2，4，8，24小時，測定峰面積，華蟾酥毒基、脂蟾毒配基穩定性。結果見表5。

2.8、重現性考察 精密稱取同一批號的救心丸，共5份，照救心丸含量測定項下方法測定，華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的總量，結果見表6。

2.9、加樣回收率考察 精密稱取重現性考察用樣品適量，分別精密添加一定量的華蟾酥毒基、脂蟾毒配基對照品，照本文含量測定方法測定，計算加樣回收率，結果見表7。

2.10、測定法 按[含量測定]項下測定方法測定三批樣品，結果見表8。

由表8可知，本品三批華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的總量的平均值為119μg /粒。

救心丸中含量測定華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量的確定：根據中國藥典“蟾酥”項下的含量限度計算，建議本品成品中每粒含蟾酥以華蟾酥毒基（C26H34O6）和脂蟾毒配基（C24H32O4）的總量不得少于86μg/粒。

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