HPLC法測(cè)定救心丸中蟾酥的含量

摘要：目的：建立救心丸的中蟾酥的含量測(cè)定方法。方法 ：采用高效液相色譜法對(duì)蟾酥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量進(jìn)行了含量測(cè)定。結(jié)果 用高效液相色譜法對(duì)華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量進(jìn)行了含量測(cè)定，華蟾酥毒基進(jìn)樣量在0.40832～2.04160μg之間有良好的線性關(guān)系；脂蟾毒配基在0.4204～2.1020（μg）之間有良好的線性關(guān)系；華蟾酥毒基平均回收率為98.3%，RSD=1.2%；脂蟾毒配基平均回收率為98.6%，RSD=1.1%。結(jié)論 ：方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，回收率良好，可有效控制救心丸的產(chǎn)品質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：救心丸；HPLC；華蟾酥毒基；脂蟾毒配基；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R914.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1002-3763（2014）-0121-02

救心丸收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十九冊(cè)，具有活血化瘀、化痰通絡(luò)的功能，由八味人工麝香、人工牛黃、珍珠、人參莖葉總皂苷、牛膽膏粉、冰片、蟾酥、三七膏粉藥材組成。目前質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中尚無含量測(cè)定，僅有顯微、理化鑒別，為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)方中蟾酥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量進(jìn)行了含量測(cè)定，能進(jìn)一步控制產(chǎn)品質(zhì)量。

試驗(yàn)儀器與材料

1.儀器與試藥

儀器：島津LC-10ADvp高效液相色譜儀；SPD-M10Avp二級(jí)管陣列檢測(cè)器；色譜柱：安捷倫Extend-C18，（150×4.6mm，5μm）。

試劑：乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。對(duì)照品：華蟾酥毒基、脂蟾毒配基為中國(guó)藥品生產(chǎn)制品檢定所提供（批號(hào)分別為：803-9202、718-9205供含量測(cè)定用）。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件的確定 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； 以0.5%磷酸二氫鉀-乙腈（50：50）流動(dòng)相（用磷酸調(diào)PH值為3.2），檢測(cè)波長(zhǎng)為296nm，理論板數(shù)按華蟾酥毒基峰計(jì)算應(yīng)不低于4000

2.2陰性干擾性試驗(yàn) 按處方比例制備缺蟾酥陰性樣品，按含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成缺蟾酥的陰性對(duì)照溶液，并進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照溶液在華蟾酥毒基峰和脂蟾毒配基峰相同保留時(shí)間處無吸收峰。

2.3、對(duì)照品溶液的制備 稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24小時(shí)的華蟾酥毒基對(duì)照品、脂蟾毒配基對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含50μg的溶液，即得。

2.4、供試品溶液的制備 取重量差異項(xiàng)下的本品30粒，研細(xì)，取約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，密塞，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.5、精密度的考察

2.5.1 華蟾酥毒基精密度的考察 精密吸取華蟾酥毒基對(duì)照品溶液（0.05104mg/ml）20μl，注入液相色譜儀，重復(fù)5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果見表1

2.6、線性范圍的考察

2.6.1華蟾酥毒基線性范圍的考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液（0.10208mg/ml）2ml，4ml，6ml，8ml，10ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取20μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)得峰面積。見表3

2.7、穩(wěn)定性考察 稱取樣品約0.25g，照救心丸含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備處理，精密吸取同一供試品溶液20μl，分別在0，2，4，8，24小時(shí)，測(cè)定峰面積，華蟾酥毒基、脂蟾毒配基穩(wěn)定性。結(jié)果見表5。

2.8、重現(xiàn)性考察 精密稱取同一批號(hào)的救心丸，共5份，照救心丸含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的總量，結(jié)果見表6。

2.9、加樣回收率考察 精密稱取重現(xiàn)性考察用樣品適量，分別精密添加一定量的華蟾酥毒基、脂蟾毒配基對(duì)照品，照本文含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表7。

2.10、測(cè)定法 按[含量測(cè)定]項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定三批樣品，結(jié)果見表8。

由表8可知，本品三批華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的總量的平均值為119μg /粒。

救心丸中含量測(cè)定華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量的確定：根據(jù)中國(guó)藥典“蟾酥”項(xiàng)下的含量限度計(jì)算，建議本品成品中每粒含蟾酥以華蟾酥毒基（C26H34O6）和脂蟾毒配基（C24H32O4）的總量不得少于86μg/粒。

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