ELISA：一種監測支原體活疫苗的有用方法

對于沒有免疫過支原體疫苗的雞群，開展支原體監測是一種能夠通過早期檢測和感染控制來防止該病傳播的有效方法。有關支原體活疫苗免疫雞群的血清學最新數據表明，ELISA可以有效地用來揭示疫苗接種是否成功或評估田間野毒的感染，從而避免發生因支原體感染造成產蛋損失（圖1）。

假設雞群無感染，那么監測目的是確認雞群陰性狀態或盡早檢測出雞毒支原體（MG）或滑液囊支原體（MS）的感染。種雞群支原體感染的早期檢測對防止疾病傳播是非常重要的。當某雞群的檢測結果變為陽性時，就需要采取各種措施以防止疾病的傳播，而此時的確診檢測成本通常極高。因此，用于監測的方法不但應該對早期檢測具有高度的敏感性，而且對確診還要有高度的特異性。

1 免疫接種是一種控

制策略

在無法保證雞群不受支原體感染的情況下，例如多種日齡商品蛋雞同存的雞場，免疫接種是預防MG或MS感染的一種有效方法。當前，滅活疫苗（菌苗）和活疫苗市場上都有銷售。菌苗可以減少因MG引起的產蛋量下降，但它們并不能阻止感染。減毒活疫苗或自然弱毒株疫苗在一些國家也有使用，且也能減少產蛋量的下降。此外，活疫苗還可能有助于取代多種日齡雞群同場飼養的雞場中的野毒株。

2 活疫苗的免疫監測

支原體活疫苗的使用已經變得日益流行，它可以最大限度地降低支原體引起的產蛋損失（MG），并取代多種日齡蛋雞同場飼養的雞場中的支原體野毒株。MG活疫苗不僅能有效地預防產蛋損失，而且能防止野毒株在雞群中的定植，而MG滅活菌苗無法做到這些。目前市場上有三種商品化MG活疫苗產品：F株、6/85和Ts-11。從血清學的角度來看，疫苗之間還存在重大的差異。

F株可以在免疫雞群中永久定植，這在血清學上可以反映出來。F株免疫雞群在8～12周齡后出現血清學陽性，最終100 %轉陽。毒力更弱的Ts-11和6/85株，在家禽之間傳播的能力更有限。6/85株和Ts-11株在用ELISA方法檢測所表現的主要血清學差異是，6/85株在免疫后血清不轉陽或是非常有限的轉陽，而Ts-11株免疫后則表現為部分的、波動性的血清轉陽（30 %～70 %的陽性） 。

3 田間感染的判斷

免疫6/85株后血清陰性的優點在于，免疫雞群在野毒感染早期就能被檢測出來。至于Ts-11株，要在血清學水平上區分疫苗毒和田間野毒感染，必須比較雞群平均抗體滴度與基準水平，及計算血清陽性率百分比（%）。如果雞群的平均抗體滴度在基準水平線以上并且100 %陽性，那么可以懷疑雞群受到野毒感染。對于用F 株疫苗免疫的雞群，要通過血清學證據來評估野毒感染是比較困難的，因為免疫雞群通常是 100 %陽性。對于F株苗，平均滴度遠高于既定基準水平，則顯示雞群受到了野毒感染。相比MG活疫苗的免疫，MS活疫苗免疫是一個相對較新的課題。

目前，唯一的MS商品化活疫苗是MS-H疫苗。根據澳大利亞、南非和歐洲的使用經驗，MS-H疫苗有著類似Ts-11的特性。這也反映在血清學指標上，其中MS-H的血清轉化模式與Ts-11非常相似。

各種支原體活疫苗的血清學分析結果已匯總在表1和表2中，其中表1是關于MG疫苗的免疫后結果，而表2是關于MS-H活疫苗的免疫情況。

要使支原體活疫苗成功免疫，要求它必須在雞群受到野毒株感染之前應用。因此，建議在接種疫苗前應檢測不到支原體抗體，以確認雞群處于陰性狀態，從而保證該活疫苗能夠發揮最佳的使用效果。

4 活疫苗監測的意義

世界各地的使用經驗表明，BioChek系統能夠用于監測支原體活疫苗的免疫是否成功，也可用于區分免疫雞群和支原體野毒感染雞群。用于檢測MG和MS 的BioChek ELISA試劑盒要比RSATtest有明顯的優勢，即RSATtest對Ts-11或MS-H免疫雞群的敏感性較差。

有關支原體活疫苗的一個常見血清學誤解是，在野毒感染后觀察到的抗體上升表明免疫失敗。然而，事實或許并非如此，血清學上的可疑僅表示野毒感染的存在。無臨床癥狀和可疑的血清學結果，可能只是表明免疫雞群受到了支原體野毒的感染并顯示其成功抵抗了野毒株的定植。野毒株的感染與否只能通過對野毒鑒別培養/PCR技術才能確定。

然而，通過監測檢測到抗體滴度上升，將說明需要加強生物安全和適時有效地使用活疫苗，以保護雞群免受支原體的感染。支原體活疫苗的田間使用經驗還表明，活疫苗可能還是在多種日齡蛋雞同場飼養的雞場中取代和消除支原體野毒株感染的可行方法。

這是由于在長期使用活疫苗后血清學反應降低至正常的基準水平，說明不存在且消滅了野毒感染。□□

原題名：ELISA useful tool in monitoring of live mycoplasma vaccines（英文）

原作者 Dr Bart van Leerdam（新西蘭Reeuwijk市BioChek公司）