一株與鮑氏志賀氏菌發生血清交叉凝集的福氏志賀氏菌鑒定

摘要[目的]對未知的能夠引起腹瀉的病原菌進行分離與鑒定。[方法]挑取腹瀉患者糞便標本中可疑部分直接接種在麥康凱及XLD瓊脂瓊脂平板培養基中，培養后將可疑菌株進行生化試驗和血清學凝集試驗。[結果]生化試驗表明，該菌株符合福氏志賀氏菌特性，但抗原與鮑氏志賀氏菌有交叉凝集反應，藥敏結果表明試驗菌對慶大霉素、四環素、鏈霉素、氯霉素呈高度敏感，對先霉素、紅霉素、病特靈、青霉素、氨芐青霉素和新霉素均不敏感。[結論]考慮到細菌與診斷血清的交叉凝集現象，通過系統的生化試驗和血清稀釋凝集試驗進行驗證和判定，根據生化反應和血清學試驗結果做出正確的判斷，判定試驗菌為志賀氏菌福氏2b血清型。

關鍵詞 志賀氏菌；分離；鑒定；交叉凝集

中圖分類號S852.61；R186+.3文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）30-10576-02

基金項目杭州市醫藥檢驗診斷學會項目（04192081）。

作者簡介劉艷（1980- ），女，山東青島人，檢驗師，從事醫院醫學檢驗研究。

賀氏菌屬（Shigella）是一類革蘭氏陰性桿菌，是人類細菌性痢疾最為常見的病原菌，通稱痢疾桿菌，為兼性厭氧菌，能在普通培養基上生長，形成中等大小、半透明的光滑型菌落，在腸道桿菌選擇性培養基上形成無色菌落。根據生化特性，可分為4個群：A群（痢疾志賀氏菌，Sh.dysenteriae）、B群（福氏志賀氏菌，Sh.flexneri）、C群（鮑氏志賀氏菌，Sh.boydii）和D群（宋內氏志賀氏菌，Sh.sonnei）。由志賀氏菌屬感染引起的細菌性痢疾目前仍然是臨床上最為常見的感染性腹瀉，近年來還發現志賀氏菌屬能感染其他組織[1-2]，在環境衛生及衛生習慣不良的情況下易于流行[3]。筆者通過對幼兒腹瀉患者的糞便進行大量篩選，成功分離到1株與鮑氏志賀氏菌發生血清交叉凝集的福氏志賀氏菌，對該試驗菌株進行一系列生化反應測定[4-6]，從而了解能引起腹瀉的菌株，對相關的腹瀉疾病的預防起到重要作用。

1材料與方法

1.1試驗材料麥康凱瓊脂、XLD瓊脂、三糖鐵瓊脂、葡萄糖半固體管，均由杭州天和微生物試劑有限公司生產；志賀氏菌診斷血清，由蘭州生物制品研究所生產；API20E生化鑒定試劑盒，購自生物梅里埃公司；藥敏試紙，由上海市衛生局服務公司生化試劑所生產。 培養基、試劑及藥敏試紙均在有效期內使用。

1.2試驗方法在實驗室生物安全柜中，利用接種環多點蘸取腹瀉患者糞便標本中的可疑部分，分別接種于麥康凱和XLD瓊脂培養基，放置培養箱于36.5 ℃培養24 h；挑取可疑菌落分別接種于三糖鐵培養基和葡萄糖半固體各1管，36.5 ℃下培養24 h，觀察試驗結果；挑取三糖鐵反應可疑的培養物，進行血清學玻片凝集試驗檢測，并取該三糖鐵瓊脂上的培養物接種于API20E生化鑒定試劑條；最后，綜合生化和血清學的試驗結果判定菌型，并進行相關的藥敏試驗。

2結果與分析

2.1形態染色和培養特性該菌株革蘭氏染色結果為革蘭陰性桿菌。麥康凱及XLD瓊脂瓊脂平板上均產生無色透明或半透明、光滑濕潤的細小菌落。三糖鐵培養基和葡萄糖半固體培養基培養結果為乳糖、蔗糖不發酵，葡糖糖產酸不產氣，無動力。

2.2全面生化反應通過全面生化反應發現，該株試驗菌種的生化特性符合福氏志賀氏菌特性（97.8%典型），具體結果見表1。

2.3血清學試驗[7]將該試驗菌株進行玻片凝集，試驗菌直接玻片凝集結果見表2。表2玻片凝集結果

抗血清反應結果抗血清反應結果志賀氏菌4種多價++++鮑氏志賀菌多價1∶100稀釋-福氏志賀菌多價++++福氏志賀菌群因子3、4-鮑氏志賀菌多價+++福氏志賀菌群因子6-福氏志賀菌多價1∶10稀釋++福氏志賀菌群因子7+++鮑氏志賀菌多價1∶10稀釋+福氏志賀菌群型特異血清2+++福氏志賀菌多價1∶100稀釋+

2.4藥敏試驗將各種藥敏片與培養基緊密相貼，將平皿培養基置于37 ℃溫箱中培養24 h后，經觀察發現標有妥布霉素、慶大霉素、四環素、鏈霉素、氯霉素的藥敏片形成的抑菌圈直徑大于20 mm，而先霉素、紅霉素、病特靈、青霉素、氨芐青霉素和新霉素的抑菌圈直徑在10 mm以下（表3）。

3討論

通過對該試驗菌株進行的一系列檢測，綜合生化和血清學的試驗結果，可以基本判定試驗菌株為志賀氏菌福氏2b血清型，藥敏結果為試驗菌株對妥布霉素和慶大霉素、四環素、鏈霉素和氯霉素呈高度敏感，而對先霉素、紅霉素、病特靈、青霉素、氨芐青霉素和新霉素均不敏感。

細菌的分離與鑒定以形態特征、生化反應、血清凝集為主，但部分不同科、屬、種之間存在共同抗原，因此細菌與診斷血清常發生交叉凝集現象。在臨床實驗室，為了給病人盡快出具檢驗報告，檢驗人員往往直接從平皿上挑取可疑菌落進行血清學凝集試驗，并因此做出判定[8-10]。應考慮到細菌與診斷血清交叉凝集現象，用更系統的生化試驗和血清稀釋凝集試驗進行驗證和判定，最后根據生化反應和血清學試驗結果做出正確的判斷。

嬰幼兒腹瀉是十分普遍的現象，小兒細菌性痢疾福氏志賀氏菌感染引起的腹瀉更是經常發生[11]，而且該類菌株具有一定的耐藥性[12-13]，因此對這類病情應該采取有效的預防和診治措施，應充分考慮到影響因素以及檢測時的誤差因素，尤其在運輸部門等交通出行相關的場合。

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