一株與鮑氏志賀氏菌發(fā)生血清交叉凝集的福氏志賀氏菌鑒定

摘要[目的]對未知的能夠引起腹瀉的病原菌進行分離與鑒定。[方法]挑取腹瀉患者糞便標(biāo)本中可疑部分直接接種在麥康凱及XLD瓊脂瓊脂平板培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后將可疑菌株進行生化試驗和血清學(xué)凝集試驗。[結(jié)果]生化試驗表明，該菌株符合福氏志賀氏菌特性，但抗原與鮑氏志賀氏菌有交叉凝集反應(yīng)，藥敏結(jié)果表明試驗菌對慶大霉素、四環(huán)素、鏈霉素、氯霉素呈高度敏感，對先霉素、紅霉素、病特靈、青霉素、氨芐青霉素和新霉素均不敏感。[結(jié)論]考慮到細(xì)菌與診斷血清的交叉凝集現(xiàn)象，通過系統(tǒng)的生化試驗和血清稀釋凝集試驗進行驗證和判定，根據(jù)生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗結(jié)果做出正確的判斷，判定試驗菌為志賀氏菌福氏2b血清型。

關(guān)鍵詞 志賀氏菌；分離；鑒定；交叉凝集

中圖分類號S852.61；R186+.3文獻標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）30-10576-02

基金項目杭州市醫(yī)藥檢驗診斷學(xué)會項目（04192081）。

作者簡介劉艷（1980- ），女，山東青島人，檢驗師，從事醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗研究。

賀氏菌屬（Shigella）是一類革蘭氏陰性桿菌，是人類細(xì)菌性痢疾最為常見的病原菌，通稱痢疾桿菌，為兼性厭氧菌，能在普通培養(yǎng)基上生長，形成中等大小、半透明的光滑型菌落，在腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基上形成無色菌落。根據(jù)生化特性，可分為4個群：A群（痢疾志賀氏菌，Sh.dysenteriae）、B群（福氏志賀氏菌，Sh.flexneri）、C群（鮑氏志賀氏菌，Sh.boydii）和D群（宋內(nèi)氏志賀氏菌，Sh.sonnei）。由志賀氏菌屬感染引起的細(xì)菌性痢疾目前仍然是臨床上最為常見的感染性腹瀉，近年來還發(fā)現(xiàn)志賀氏菌屬能感染其他組織[1-2]，在環(huán)境衛(wèi)生及衛(wèi)生習(xí)慣不良的情況下易于流行[3]。筆者通過對幼兒腹瀉患者的糞便進行大量篩選，成功分離到1株與鮑氏志賀氏菌發(fā)生血清交叉凝集的福氏志賀氏菌，對該試驗菌株進行一系列生化反應(yīng)測定[4-6]，從而了解能引起腹瀉的菌株，對相關(guān)的腹瀉疾病的預(yù)防起到重要作用。

1材料與方法

1.1試驗材料麥康凱瓊脂、XLD瓊脂、三糖鐵瓊脂、葡萄糖半固體管，均由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；志賀氏菌診斷血清，由蘭州生物制品研究所生產(chǎn)；API20E生化鑒定試劑盒，購自生物梅里埃公司；藥敏試紙，由上海市衛(wèi)生局服務(wù)公司生化試劑所生產(chǎn)。 培養(yǎng)基、試劑及藥敏試紙均在有效期內(nèi)使用。

1.2試驗方法在實驗室生物安全柜中，利用接種環(huán)多點蘸取腹瀉患者糞便標(biāo)本中的可疑部分，分別接種于麥康凱和XLD瓊脂培養(yǎng)基，放置培養(yǎng)箱于36.5 ℃培養(yǎng)24 h；挑取可疑菌落分別接種于三糖鐵培養(yǎng)基和葡萄糖半固體各1管，36.5 ℃下培養(yǎng)24 h，觀察試驗結(jié)果；挑取三糖鐵反應(yīng)可疑的培養(yǎng)物，進行血清學(xué)玻片凝集試驗檢測，并取該三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物接種于API20E生化鑒定試劑條；最后，綜合生化和血清學(xué)的試驗結(jié)果判定菌型，并進行相關(guān)的藥敏試驗。

2結(jié)果與分析

2.1形態(tài)染色和培養(yǎng)特性該菌株革蘭氏染色結(jié)果為革蘭陰性桿菌。麥康凱及XLD瓊脂瓊脂平板上均產(chǎn)生無色透明或半透明、光滑濕潤的細(xì)小菌落。三糖鐵培養(yǎng)基和葡萄糖半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果為乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡糖糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動力。

2.2全面生化反應(yīng)通過全面生化反應(yīng)發(fā)現(xiàn)，該株試驗菌種的生化特性符合福氏志賀氏菌特性（97.8%典型），具體結(jié)果見表1。

2.3血清學(xué)試驗[7]將該試驗菌株進行玻片凝集，試驗菌直接玻片凝集結(jié)果見表2。表2玻片凝集結(jié)果

抗血清反應(yīng)結(jié)果抗血清反應(yīng)結(jié)果志賀氏菌4種多價++++鮑氏志賀菌多價1∶100稀釋-福氏志賀菌多價++++福氏志賀菌群因子3、4-鮑氏志賀菌多價+++福氏志賀菌群因子6-福氏志賀菌多價1∶10稀釋++福氏志賀菌群因子7+++鮑氏志賀菌多價1∶10稀釋+福氏志賀菌群型特異血清2+++福氏志賀菌多價1∶100稀釋+

2.4藥敏試驗將各種藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，將平皿培養(yǎng)基置于37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h后，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)標(biāo)有妥布霉素、慶大霉素、四環(huán)素、鏈霉素、氯霉素的藥敏片形成的抑菌圈直徑大于20 mm，而先霉素、紅霉素、病特靈、青霉素、氨芐青霉素和新霉素的抑菌圈直徑在10 mm以下（表3）。

3討論

通過對該試驗菌株進行的一系列檢測，綜合生化和血清學(xué)的試驗結(jié)果，可以基本判定試驗菌株為志賀氏菌福氏2b血清型，藥敏結(jié)果為試驗菌株對妥布霉素和慶大霉素、四環(huán)素、鏈霉素和氯霉素呈高度敏感，而對先霉素、紅霉素、病特靈、青霉素、氨芐青霉素和新霉素均不敏感。

細(xì)菌的分離與鑒定以形態(tài)特征、生化反應(yīng)、血清凝集為主，但部分不同科、屬、種之間存在共同抗原，因此細(xì)菌與診斷血清常發(fā)生交叉凝集現(xiàn)象。在臨床實驗室，為了給病人盡快出具檢驗報告，檢驗人員往往直接從平皿上挑取可疑菌落進行血清學(xué)凝集試驗，并因此做出判定[8-10]。應(yīng)考慮到細(xì)菌與診斷血清交叉凝集現(xiàn)象，用更系統(tǒng)的生化試驗和血清稀釋凝集試驗進行驗證和判定，最后根據(jù)生化反應(yīng)和血清學(xué)試驗結(jié)果做出正確的判斷。

嬰幼兒腹瀉是十分普遍的現(xiàn)象，小兒細(xì)菌性痢疾福氏志賀氏菌感染引起的腹瀉更是經(jīng)常發(fā)生[11]，而且該類菌株具有一定的耐藥性[12-13]，因此對這類病情應(yīng)該采取有效的預(yù)防和診治措施，應(yīng)充分考慮到影響因素以及檢測時的誤差因素，尤其在運輸部門等交通出行相關(guān)的場合。

參考文獻

[1] 陸德源.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：119-122.

[2] 丁建強.志賀氏菌屬感染若干方面的研究進展[J].國外醫(yī)學(xué)：流行病學(xué)·傳染病學(xué)分冊，1997，24（2）：56-60.

[3] 張開瑞.志賀氏菌感染的研究進展[J].臨床內(nèi)科雜志，1996，13（4）：4-5.

[4] 童秀峰，周藍燕.志賀氏菌屬的菌群分布及藥物敏感試驗[J].寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002，24（2）：141-142.

[5] 劉蔚，趙樹紅，楊淑其，等.正確鑒定志賀氏菌屬[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，1999（1）：80-81.

[6] 林日壯，張洪.飲食服務(wù)從業(yè)人員志賀氏菌菌落菌型流行病學(xué)分析[J].中國公共衛(wèi)生管理，2000，16（4）：320-321.

[7] 李威，栗紹剛，鄭曉燕，等.70株志賀菌屬血清分型及耐藥分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2007，17（11）：1455-1457.

[8] 靳會娟，任艷萍，盧星，等.濟源市福氏致賀菌毒力基因分型與分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，17（3）：508.

[9] 王彥紅，苗小青，周瓊.奶牛大腸桿菌與鮑氏志賀氏菌混合感染的診療[J].中國獸醫(yī)雜志，2007（9）：70-71.

[10] 彭清潔，王沖，胡長敏，等.肉牛大腸桿菌、志賀氏菌與牛支原體混合感染的診斷與分析[J].養(yǎng)殖與飼料，2012（11）：36-41.

[11] 潘躍順.志賀氏菌實驗室檢測的漏檢和誤診因素分析[J].中國公共衛(wèi)生，2001，17（6）：569-571.

[12] 劉文，王毅.株志賀氏菌流行分布及耐藥性變遷的實驗研究[J].安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2006，12（2）：99-101.

[13] 馬亦林，丁建強.志賀菌屬對氟喹諾酮類藥物耐藥機制的研究[J].中華內(nèi)科雜志，1999，38（8）：550-553.