含烏頭類生物堿藥物的質(zhì)量分析與評(píng)價(jià)

摘要：目的 對(duì)含烏頭類生物堿藥物虎力散膠囊中的烏頭堿限量進(jìn)行檢查并測(cè)量其含量，評(píng)價(jià)分析其藥物質(zhì)量。方法 采用薄層色譜法對(duì)虎力散膠囊中烏頭堿限量進(jìn)行檢查，利用HPLC法測(cè)定其烏頭堿含量。結(jié)果 該薄層色譜法斑點(diǎn)清晰，分離度好，虎力散膠囊的3個(gè)批次限量檢查均符合質(zhì)量要求；烏頭堿在0.87～4.26μg/mL范圍，進(jìn)樣量與峰面積具有良好的線性關(guān)系（Y=9789.45X+7892.45，r=0.997）且精密性（RSD=0.65%）、重現(xiàn)性（RSD=0.78%）、穩(wěn)定性（RSD=0.58%）與回收率（100.21%，平均RSD值為1.05%）較好。結(jié)論 兩種法簡(jiǎn)便、快速，能夠?qū)⒘ι⒛z囊藥物質(zhì)量檢測(cè)與控制提供科學(xué)依據(jù)。關(guān)鍵詞：薄層色譜法；高效液相色譜；虎力散膠囊；烏頭堿；含量

虎力散膠囊具有驅(qū)風(fēng)除濕、行瘀、消腫定痛的功效，其中含有烏頭堿藥物成分。烏頭堿具有強(qiáng)心、抗炎鎮(zhèn)痛等多種藥理活性，但也具有強(qiáng)毒性[1]。為了對(duì)藥物質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)與控制，其烏頭堿含量是關(guān)鍵的指標(biāo)。為了保障含烏頭類生物堿藥物虎力散膠囊劑的質(zhì)量及患者用藥安全，本文薄層色譜法對(duì)其烏頭堿限量檢查，利用HPLC法測(cè)定其烏頭堿含量，對(duì)其進(jìn)行藥物質(zhì)量分析與評(píng)價(jià)，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器 BSA223S-CW賽多利斯電子天平（北京晨曦勇創(chuàng)科技有限公司），ZF-2型三用紫外儀（上海市安亭電子儀器廠），KQ-600DB數(shù)控超聲波清洗機(jī)（河南兄弟儀器設(shè)備有限公司），電熱恒溫水浴鍋（龍口市先科儀器公司），LC-l0A VP高效液相色譜儀、SPD10AVP檢測(cè)器、LCsolution液相工作站均為島津公司產(chǎn)。

1.2試藥 虎力散膠囊（云南運(yùn)河藥業(yè)有限公司，批號(hào)110238、090904、110102），烏頭堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110720-200410），三乙胺、甲醇為色譜純（Fisher公司），水為高純水，硅膠G（青島海洋化工廠），二氯甲烷、環(huán)己烷、二乙胺等試劑均為分析純。

2 薄層色譜方法與結(jié)果

2.1溶液制備 虎力散膠囊供試品溶液 精密3批樣品各0.5g，放置于50ml碘量瓶中，加氨水2mL搖勻，使藥物充分溶解，加乙醚20mL低溫超聲提取0.5h，濾過(guò)，對(duì)殘?jiān)右颐?0mL低溫超聲提取0.5h，合并提取液，調(diào)pH值到9，合并乙醚液低溫?fù)]干，殘?jiān)枚燃淄槿芙猓瞥?.5g/mL供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備精密稱定烏頭堿對(duì)照品5mg，放置于10ml容量瓶中，加二氯甲烷至10ml刻度線處制成對(duì)照品溶液溶液0.5 mg/mL。

2.2薄層展開(kāi)及結(jié)果 根照薄層色譜法[2]《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB試驗(yàn)，分別吸取3種腰息痛膠囊供試品溶液各10μL及對(duì)照品溶液5μL，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（12：8：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，觀察在紫外光燈（365 nm）、稀碘化鉍鉀試液+碘蒸汽熏蒸下圖示。結(jié)果紫外光下，烏頭堿無(wú)斑點(diǎn)，3種供試品的在斑點(diǎn)位置、大小、顏色基本相同，這說(shuō)明供試品相近（如圖1）；稀碘化鉍鉀試液+碘蒸汽熏蒸下的圖像更加清晰，對(duì)照品出現(xiàn)斑點(diǎn)，位置于供試品不同，符合限量要求（如圖2）。

3 HPLC方法與結(jié)果

3.1色譜條件 Kromasil C18色譜柱（250mm×4.6mm，5um），以甲醇-0.1%三乙胺（70：30）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm，流速為1ml/min，柱溫25℃，分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)均不低于3000。

3.2供試品溶液、陰性對(duì)照溶液與對(duì)照品溶液的制備 稱取虎力散膠囊適量約2.5g，置250ml具塞錐形瓶，精密加乙醚50 mL及10%氨溶液2.5mL，搖勻，靜置1h后過(guò)濾。殘?jiān)靡颐严礈欤粗翞躅^堿沉淀反應(yīng)，過(guò)濾，然后回收及合并濾液，于35℃水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸干乙醚及氨，殘?jiān)尤爰状既芙猓D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，即為供試品溶液[3]。陰性對(duì)照溶液的制備是按處方比例，配置不含烏頭堿的溶液，按照供試品溶液方法制備。精密稱取烏頭堿對(duì)照品適量，加甲醇制成1mL含35ug的溶液，即得對(duì)照品溶液。在3.1的色譜條件下，分別測(cè)定對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液的色譜圖（如圖3～5）。

3.3線性關(guān)系的考察 精密量取烏頭堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液2，8，10，20μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定其峰面積積分值。以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，以Y表示峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可得Y=9789.45X+7892.45，r=0.997，線性范圍：0.87～4.26μg/mL，進(jìn)樣量與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

3.4精密度試驗(yàn) 精密取烏頭堿對(duì)照品溶液，按照相同的條件重復(fù)進(jìn)樣6次，10μl/次。測(cè)得烏頭堿的RSD值為0.65%。

3.5重復(fù)試驗(yàn) 精密取同一批號(hào)的供試品溶液（批號(hào)110238）測(cè)定6次，進(jìn)樣12μL，測(cè)定峰面積值并計(jì)算含量值。結(jié)果烏頭堿含量的RSD值為0.78%，重復(fù)性良好。

3.6穩(wěn)定試驗(yàn) 精密吸取同一批號(hào)的供試品溶液（批號(hào)110238）10uL，重復(fù)進(jìn)樣6次，4h/次，測(cè)得烏頭堿峰面積RSD分別為0.58%，說(shuō)明供試品溶液在48h內(nèi)基本穩(wěn)定。

3.7加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的本品（批號(hào)110238）3g、4g、5g各3份，按照3.2中的供試品溶液制備方法制備，按照3.1的色譜條件測(cè)定烏頭堿的含量，結(jié)果9次測(cè)定的平均回收率為100.21%，平均RSD值為1.05%，回收率良好。

3.8樣品測(cè)定 根據(jù)3.2方法制備樣品及對(duì)照品溶液，精密吸取樣品及對(duì)照品溶液各15uL，注入高效液相色譜儀對(duì)四批樣品講行測(cè)定（見(jiàn)表1）。

3 討論

虎力散膠囊收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第十冊(cè)，由制草烏、三七、斷節(jié)參、白云參等藥材組成，其中含有制草烏等毒性藥材。《中華人民共和國(guó)藥典》中對(duì)虎力散膠囊等藥物的烏頭堿限量做出了明確的規(guī)定，因?yàn)楹兄撇轂醯榷拘运幉闹械亩拘灾饕獊?lái)自烏頭堿，口服烏頭堿2 mg即可以致成人死亡[1-3]。一般來(lái)說(shuō)，烏頭堿含量是虎力散膠囊質(zhì)量的重要指標(biāo)。

目前對(duì)其烏頭堿限量的研究較少，本文采用薄層色譜法對(duì)虎力散膠囊的烏頭堿含量進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，虎力散膠囊的三種樣品相近，符合我國(guó)烏頭堿的限量要求。另外，稀碘化鉍鉀試液+碘蒸汽熏蒸下的圖像較紫外線的圖像更加清晰可見(jiàn)，可用于烏頭堿的限量研究。

利用HPLC法測(cè)定藥物中成分的含量研究較多，但是其在虎力散膠囊烏頭堿含量較少。本文利用HPLC法測(cè)定虎力散膠囊烏頭堿含量實(shí)驗(yàn)，其設(shè)計(jì)科學(xué)合理，實(shí)驗(yàn)的精密性、穩(wěn)定性、重復(fù)性及回收率均達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的標(biāo)準(zhǔn)。本文測(cè)的虎力散膠囊中的烏頭堿含量為0.68%～0.69%，含量較低穩(wěn)定，符合要求。

參考文獻(xiàn)：

[1]王東青，張亞麗.應(yīng)高度重視烏頭類中藥的毒副作用[J].國(guó)醫(yī)論壇，2009，24（2）：37-38.

[2]招榮鑑，孫亦群，彭彤.祛風(fēng)通絡(luò)散中大黃與兩面針的薄層色譜鑒別及酯型生物堿的限量檢查[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17（7）：1258-1259.

[3]凌志敏，李娟，曾翠梅等.虎力散膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中蓮為導(dǎo)最，2009，4（15）：85-87.

編輯/蘇小梅