ELISA法檢測HBsAg假陽性原因分析

摘要：目的 了解ELISA法檢測HBsAg造成假陽性的原因。方法 采集160例ELISA法檢測HBsAg陽性標本進行膠體金法檢測，二者不符合者，重新抽血進行ELISA和膠體金法復檢。結果 初檢160例HBsAg陽性標本有7例假陽性。結論 ELISA法檢測HBsAg受多種因素影響，只有掌握ELISA法檢測HBsAg造成假陽性的影響因素，才能在工作中減少差錯事故。

關鍵詞：ELISA；HBsAg；假陽性；影響因素

Abstract：Objective Detection of HBsAg ELISA method to cause 1 positive.Methods Collection of 160 cases of ELISA was detected in HBsAg positive specimens were detected by colloidal gold method， the two do not meet， re were ELISA and colloidal gold method review.Results The initial inspection in 160 HBsAg positive cases and 7 1 positive .Conclusion Detection of HBsAg ELISA is affected by many factors， only to master the detection of HBsAg ELISA factors causing 1 positive， can reduce errors and accidents at work.

Key words：ELISA； HBsAg； False positive； Influencing factors

HBV感染呈世界性流行，我國屬高發區。人群感染HBsAg的陽性率約為9.09%[1]， HBsAg陽性將會給人們帶來招工，出國等煩惱，而且部分持續感染者可發展為肝硬化，原發性肝癌，因此，實驗室準確檢測HBsAg顯得異常重要。目前臨床上常用靈敏度高，特異性強的ELISA法檢測HBsAg。在日常工作中，由于溶血、離心等因素將會影響ELISA檢測，造成HBsAg假陽性，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1標本 采集 2011年1月～4月，本院門診或住院患者ELISA初檢HBsAg為陽性的160例患者血清標本。

1.1.2 試劑與儀器 采用上海科華生物工程股份有限公司生產的ELISA試劑盒，艾博生物醫藥（杭州）有限公司生產的膠體金試劑，北京普朗DNM-9602酶標分析儀。

1.2方法

1.2.1檢測方法 按照ELISA試劑盒說明書操作。

1.2.2評定標準 初檢HBsAg結果陽性者再用膠體金法檢測，兩者均為陽性則可報告陽性，若兩者檢測結果不一致，則重新抽血進行ELISA法和膠體金復檢，若兩次ELISA檢測均為陽性，則直接報陽性，否則，為假陽性。

2結果

ELISA和膠體金檢測的結果見表1，表2。

由表1，表2可知，ELISA初檢產生了7例假陽性，其中3例為孕婦，2例標本溶血，2例門診患者由于時間原因，抽取標本后就立即進行了離心，檢測。

3討論

ELISA檢測HBsAg受多種因素的影響，主要有以下幾點：

3.1選擇高質量的試劑是保證結果準確的關鍵之一，有的廠家酶標板孔底的平整度和透明度差異大，同時顯色液的穩定性也較差，這將導致檢驗結果的假陽性或假陰性增多[2]。

3.2標本溶血 紅細胞中含有類過氧化物酶活性物質，這些物質具有與辣根過氧化物酶類似的催化作用。紅細胞溶解后，這些物質進入血清中，反應過程中，若反應孔特異性地吸附了這些物質，就會催化底物反應，造成假陽性。溶血的原因很多，主要有物理因素（如機械性破壞、冰凍），化學性因素（如血樣接觸表面活性劑）和代謝性因素等，檢驗人員和護士應熟練操作，輕拿輕放。

3.3標本離心 血液尚未完全凝固就離心，分離的血清中可能殘留部分纖維蛋白原，它們和酶粘附在酶標板上，可造成非特異性吸附，使本底A值升高，而致假陽性。

3.4孕婦血清中含有高濃度的AFP，能夠與固相一抗，標記二抗FC結合或影響它們的結合而造成假陽性[3]。血清中補體、RF、免疫球蛋白聚合物也可以致假陽性結果[4]。

3.5溫育 抗原抗體反應需要一定的溫度，經過一定的時間才能達到反應的平衡，溫育溫度和時間應按操作說明規定的要求，否則會影響顯色結果，導致錯誤的檢驗結果。

3.6洗板 洗板是將酶標板上結合的抗原抗體復合物與其他物質分離，洗滌液濃度太稀，洗板次數太少以及洗板停留時間太短等都會導致HBsAg假陽性，洗滌時所用吸水紙不可重復使用，以免產生交叉污染。

3.7顯色與結果判斷 必須嚴格控制顯色時間和溫度，使用酶標儀檢測，肉眼判讀結果時，容易漏診弱陽性標本，顯色過程必須封板，封板紙不能重復使用。

3.8其他 標本加樣量不準，樣品未加在板孔的底部，有微生物污染的樣本等都可致假陽性。

ELISA法檢測HBsAg的影響因素很多，這就要求我們增強責任感，嚴格按照操作規程操作，加強業務學習，充分認識和避免以上因素的影響，確保檢驗結果的準確性。

參考文獻：

[1]倪語星，尚紅.臨床微生物學與檢驗[M].4版.北京：人民衛生出版社，2010：445.

[2]周紅妹，黃小虎.ELISA法檢測HBsAg影響因素分析[J].中國熱帶醫學，2006，6（10）：1867.

[3]韓文明，黃燕.ELISA檢測HBsAg影響因素的分析[J].中國醫學指南，2011，2（4）：49-50.

[4]王民強，周劍波，張廷，等.酶聯免疫吸附試驗檢測HBsAg的應用體會[J].中國誤診學雜志，2011，2（4）：874.

編輯/孫杰