四種結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用綜合評(píng)析

摘要：目的 探究培養(yǎng)、涂片、PCR和增菌PCR四種方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的臨床作用。方法 在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結(jié)核患者、35例疑似肺結(jié)核患者、35例非肺結(jié)核患者提取痰液分別進(jìn)行培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果 臨床確診的35例肺結(jié)核患者的培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR（4d）、增菌PCR（7d）的四種檢測(cè)結(jié)果陽性率為25.7%、34.3%、54.3%、74.3%、88.6%；35例疑似肺結(jié)核患者的陽性率為14.3%、20.0%、34.4%、42.9%、51.4%。兩組數(shù)據(jù)均具有數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。35例非肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本培養(yǎng)、涂片檢測(cè)結(jié)果均為陰性，PCR和增菌PCR均出現(xiàn)2例（5.71%）假陽性（P<0.05）。結(jié)論 增菌PCR檢測(cè)法對(duì)于結(jié)核分枝桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性，可有效輔助診斷肺結(jié)核病。

關(guān)鍵詞：肺結(jié)核；PCR；涂片；培養(yǎng)

肺結(jié)核是肺部；受到結(jié)核桿菌影響而引起的肺部感染性疾病，已對(duì)人類健康造成重大威脅。傳播途徑為呼吸道，傳染源為肺結(jié)核患者。感染肺結(jié)核桿菌的健康人群不一定會(huì)發(fā)病，當(dāng)其免疫力降低的時(shí)候才可能發(fā)病。根據(jù)每年的世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)可知，每年世界上約會(huì)發(fā)生結(jié)核病800～1000萬，大約會(huì)死亡300萬，已經(jīng)成為單一傳染病中死亡率最高的[1]。對(duì)于肺結(jié)核病而言，只要發(fā)現(xiàn)早治療合適還是可以治愈的，因此對(duì)肺結(jié)核的診斷尤為重要，本文對(duì)培養(yǎng)、涂片、PCR和增菌PCR四種方法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的臨床作用進(jìn)行對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)增菌PCR對(duì)結(jié)核桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性，現(xiàn)詳細(xì)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結(jié)核患者、35例疑似肺結(jié)核患者、35例非肺結(jié)核患者提取痰液分別進(jìn)行培養(yǎng)、涂片、PCR、增液PCR四種方法進(jìn)行檢測(cè)。臨床確診的患者均經(jīng)過確診；疑似結(jié)核病患者均為我院門診及住院患者；非肺結(jié)核病患者均為肺炎、肺癌、慢性支氣管炎患者等。

1.2 方法

1.2.1培養(yǎng)和培養(yǎng) 參照（結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程）[2]利用NaOH液化痰標(biāo)本，用PBS離心處理2次，取出沉淀后用PBS溶解，隨后分別吸取0.1ml進(jìn)行培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR檢測(cè)。

1.2.2 PCR擴(kuò)增 參照標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行操作。設(shè)置條件為94℃變性5min，94℃1min；68℃1min；72℃1min；35次循環(huán)；72℃延伸5min。利用PCR-ELISA對(duì)擴(kuò)增物進(jìn)行鑒定[3]。

1.2.3增菌PCR 取上述經(jīng)液化、離心洗滌處理后的標(biāo)本沉淀物0.1ml接種在1ml液體培養(yǎng)基上，在37℃溫度下培養(yǎng)4d和7d，參照PCR方法進(jìn)行檢查。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn) 本文數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0軟件處理，用例數(shù)、百分?jǐn)?shù)（n，%）進(jìn)行數(shù)據(jù)表示，組間數(shù)據(jù)用χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料，P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

四種檢測(cè)方法的結(jié)果，臨床確診的35例肺結(jié)核患者的培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR（4d）、增液PCR（7d）的四種檢測(cè)結(jié)果陽性率為23.1%、33.4%、56.1%、66.3%、88.3%；35例疑似肺結(jié)核患者的陽性率為14.3%、19.3%、29.1%、38.3%、53.4%。兩組數(shù)據(jù)均具有數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。35例非肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本培養(yǎng)、涂片檢測(cè)結(jié)果均為陰性，PCR和增菌PCR均出現(xiàn)2例（5.71%）假陽性（P<0.05）。見表1。

3 討論

治療結(jié)核病最重要的便是提早診斷盡早治療。因此結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)檢查在診斷早期具有重要意義。現(xiàn)在全球范圍內(nèi)使用最廣泛最基本的細(xì)菌學(xué)檢查方法是痰涂片抗酸染色檢查，具有簡(jiǎn)便快捷、價(jià)廉的優(yōu)點(diǎn)，但是敏感性低、特異性差。細(xì)菌培養(yǎng)法靈敏度高于痰涂片法，檢查整體耗時(shí)長(zhǎng)，約4～8w[4]。因此PCR就以其高靈敏度高特異性的優(yōu)點(diǎn)成為了最有價(jià)值的診斷手段。本文為探究PCR的臨床診斷價(jià)值，在我院就診的患者中抽取35例臨床確診的肺結(jié)核患者、35例疑似肺結(jié)核患者、35例非肺結(jié)核患者提取痰液分別進(jìn)行培養(yǎng)、涂片、PCR、增液PCR四種方法進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)：臨床確診的35例肺結(jié)核患者的培養(yǎng)、涂片、PCR、增菌PCR（4d）、增菌PCR（7d）的四種檢測(cè)結(jié)果陽性率為25.7%、34.3%、54.3%、74.3%、88.6%；35例疑似肺結(jié)核患者的陽性率為14.3%、20.0%、34.4%、42.9%、51.4%。兩組數(shù)據(jù)均具有數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。35例非肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本培養(yǎng)、涂片檢測(cè)結(jié)果均為陰性，PCR和增菌PCR均出現(xiàn)2例（5.71%）假陽性（P<0.05）。可得出結(jié)論：增菌PCR檢測(cè)法對(duì)于肺結(jié)核桿菌的診斷具有高敏感性和高特異性，可有效輔助診斷肺結(jié)核病。

參考文獻(xiàn)：

[1]張翊，盧建平，葉淼.四種結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].中國防癆雜志，2006，12（01）：14-17.

[2]康麗軍，洪峰，馮建兵，等.結(jié)核/非結(jié)核分枝桿菌核酸快速檢測(cè)方法臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國防癆雜志，2011，21（05）：263-266.

[3]袁凱.酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)在脊柱結(jié)核輔助診斷中的應(yīng)用研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2013：235-236.

[4]王華鈞，孫小軍，金法祥，諸雪萍.4種結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法的比較[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，11（7）：2472-2474.

編輯/哈濤