血性體液細胞學涂片及包埋方法的改進

摘要：目的 探討血性體液細胞學涂片及包埋方法。方法 選取新鮮血性體液細胞學標本編號后隨機分為對照組和實驗組，對照組將編號的新鮮血性體液細胞學標本靜置片刻后，取底部沉淀的體液90 mL，分別放入2支45 mL離心管，離心機以3000 r/min離心10 min，不加任何處理，直接涂片備用。剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片備用。實驗組在對照組的基礎上離心后，一次性去上清液后，加入10%冰醋酸10 mL在振蕩儀上振蕩10 min，再次以3000 r/min離心10 min，去冰醋酸，吸管吸取表層部分沉渣涂片，用酒精燈烤干涂片冷卻后放入90%酒精固定備用，剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片備用。觀察兩組涂片處理效果。結果 對照組染色效果不佳，出現嚴重的非特異性背景染色，致陽性定位不清；實驗組染色清晰，非特異性背景染色少，對腫瘤細胞、間皮細胞等陽性定位準確。結論 本方法避免了傳統涂片的不足，陽性檢出率高，試劑配制簡單，成本低，具有較高的應用價值，值得推廣。

關鍵詞：血性體液細胞學涂片；冰醋酸；包埋切片；陽性定位；非特異性背景

細胞學檢查診斷胸、腹水等惡性腫瘤已成為病理科一項常規檢查項目，其具有取材方便、易行、患者痛苦少等優點。日常工作中，胸腹水等細胞診斷難度很大，尤其是腺癌、間皮瘤和間皮增生的鑒別診斷。提高細胞制片質量，做出穩定可靠的細胞片，是保證診斷準確性的前提條件。但多數體液細胞學標本中含有大量紅細胞，難以制作優良的細胞涂片，常影響結果觀察，采取何種方法除去紅細胞？獲得良好的細胞學涂片及包埋制片，以提高陽性檢出率。為此，我科經過長期反復摸索，對傳統的血性體液細胞學涂片及包埋方法進行了改進，將血性體液細胞離心后，加入10%冰醋酸振蕩處理，除去紅細胞，再行沉渣涂片及包埋制片，收到了滿意的效果，現將方法介紹如下。

1資料與方法

1.1一般資料 2013年1月～2014年5月安徽省中醫院病理科血性胸腹水、尿等體液細胞學標本。

1.2方法 實驗組將編號的新鮮血性體液細胞學標本靜置片刻后，標本中有形細胞受重力影響大部沉于底部，故取底部沉淀的體液90 mL，分別放入2支45 mL離心管，離心機以3000 r/min離心10 min，一次性去上清液后，加入10%冰醋酸10 mL在振蕩儀上振蕩10 min，再次以3000 r/min離心10 min，去冰醋酸，吸管吸取表層部分沉渣涂片，用酒精燈烤干涂片冷卻后放入90%酒精固定備用，剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片備用。對照組將編號的新鮮血性體液細胞學標本靜置片刻后，取底部沉淀的體液90 mL，分別放入2支45 mL離心管，離心機以3000 r/min離心10 min，不加任何處理，直接涂片備用。剩余沉渣用95%酒精固定做包埋切片備用。

2結果

對照組未處理的涂片，背景一片紅染，模糊不清，細胞結構顯示不清晰，見圖1。由于大量紅細胞存在，易造成涂片厚薄不均，染色效果不佳，甚至涂片在染色水洗過程中脫片，大量紅細胞遮擋或覆蓋腫瘤細胞、間皮細胞、炎細胞等有診斷價值細胞，造成漏診或誤診；沉渣包埋切片由于紅細胞過多，加做的免疫酶標及特殊染色的，出現嚴重的非特異性背景染色，致陽性定位不清，見圖2。

實驗組經10%冰醋酸處理沉渣的涂片中紅細胞幾乎消失或淡染，背景干凈，腫瘤細胞、間皮細胞、炎細胞等核膜、染色質、核仁結構清晰，染色分明，細胞無變形，亦無脫片掉片現象，見圖3；沉渣包埋切片加做免疫酶標及特殊染色，非特異性背景染色少，對腫瘤細胞、間皮細胞等陽性定位準確。陽性率明顯提高，見圖4。

3討論

胸腹水是臨床上多種腫瘤的常見伴隨癥狀，而且是多種腫瘤的首發癥狀，在腫瘤的診斷及治療中具有重要意義[1]。長期以來，對提高細胞學陽性率和準確性的研究，一直是細胞病理工作者研究的重點，國內外主要集中在兩個方面：①對細胞學制片方法的改進的研究；②如何鑒別良惡性細胞的主觀判斷。病理工作者一直都在尋找和研究更加客觀的新技術方法和診斷指標。而\"許多診斷困難的涂片，實際上是涂片制作質量不佳造成的\"，質量優良的涂片細胞必須清楚，核膜，染色質、核仁等結構必須清晰[2]。涂片中有效細胞量的多少也是涂片質量的重要方面，細胞太少，容易漏診，細胞量太多，涂片太厚，容易造成染色水洗時掉片外，還影響讀片效果，本方法可以明顯提高涂片質量。通過吸取底層少量細胞涂片，不會涂片太厚，避免掉片。

血性體液標本，離心后沉渣經過10%冰醋酸處理，低滲冰醋酸可使部分紅細胞迅速破裂溶解[3]。冰醋酸能固定核蛋白，使細胞核形態清晰，便于辨 認[4]。涂片中紅細胞幾乎消失，腫瘤細胞染色清晰，結構保存完好；剩余沉渣做包埋后常規石蠟切片，增加了細胞量，避免細胞涂片由于細胞量少，造成漏診現象。

《阿克曼外科病理學》中提到腹水細胞學診斷存在兩個最困難的問題，①反應性間皮和腫瘤性間皮的鑒別，②惡性間皮瘤與轉移癌的鑒別。并指出免疫組化應用于細胞學標本，以期提高診斷的準確性[5-6]。診斷誤區常常在于將反應性改變的間皮細胞誤判為惡性細胞，因此，診斷轉移惡性細胞的關鍵是鑒別反應性間皮細胞。轉移瘤細胞一般都具有惡性的基本特征，它們是\"長著惡性面孔的外來者\"，周圍常能見良性的間皮細胞；當反應性間皮細胞酷似轉移瘤細胞時，需借助其他手段（如免疫化學染色）進行鑒別[7-9]。由于石蠟切片可以連續大量切片及長期保存的特性，可加做免疫組化及特殊染色，無紅細胞背景干擾，有利于腫瘤診斷和鑒別診斷，提高了診斷依據及準確性。

綜上所述，本方法避免了傳統涂片的不足，陽性檢出率高，試劑配制簡單，成本低，具有較高的應用價值，值得推廣，但在操作過程中需要注意：①標本離心涂片后，立即用酒精燈烤干冷卻后固定，固定時間不少于10 min，否則影響染色效果。②冰醋酸濃度不宜過高，低滲的冰醋酸才能去除紅細胞。③所有玻片必須清潔干凈，必要時可用防脫載玻片。

參考文獻：

[1]Ghole SA，Bakhtary S，Staudenmayer K，et al.Ruptured biliary cystadenoma managed by angiographic embolization and interval partial hepatectomy[J].Digestive Diseases and Sciences，2011，56（7）：1949-1953.

[2]劉復生，馬正中，中國腫瘤病理學分類[M].北京科學技術出版社，2001：619.

[3]趙杰，周淑芬.冰醋酸在漿膜腔積液、腦脊液細胞學檢查中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2012，33（8）：1023.

[4]Fassina A，Fedeli U，Corradin M，et al.Accuracy and reproducibility of pleural effusion cytology[J].Leg Med（Takyo），2008，10（1）：20.

[5]阿克曼.外科病理學[M].8版.沈陽：遼寧教育出版社，1999：2149-2150.

[6]Agarwal PK.Cytologic examination of hemorrhagic fluid by capillary centrifugation： a new technique[J].Acta Cytologica，2009，53（5）：527-532.

[7]細胞病理學，診斷圖譜及實驗技術[M].北京：科學技術出版社，2009：118-119.

[8]Farina J，Millana MC，Fernandez Acenero MJ et al.Uremia associated with erythrophagocytosis by small intestine epithelial cells： a case report.[J].Acta Cytologica，2006，50（2）：198-200.

[9]Agarwal PK.Cytologic examination of hemorrhagic fluid by capillary centrifugation： a new technique[J].Acta Cytologica，2009，53（5）：527-532.編輯/張燕