復方大黃凈化液提取工藝研究

摘要：目的 優選復方大黃凈化液提取工藝。方法 基于復方大黃凈化液組方原則，兼顧大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃素、大黃酚主要指標成分含量和干浸膏收率，以加水倍數、浸泡時間、提取時間和提取次數為考察因素，采用正交試驗優選復方大黃凈化液提取工藝條件。結果 制劑最佳提取工藝為加水量為10倍量，浸泡30 min，提取時間1 h，提取次數3次。結論 該方法有效的優選出復方大黃凈化液提取工藝，工藝合理穩定，操作易行。

關鍵詞：復方大黃凈化液；正交試驗；提取工藝

Abstract：Objective To optimize extracting techniques of compound Dahuangjinghua liquid. Methods Based on compound Dahuangjinghua liquid formula principle ，take the aloe-emodin， rhein， emodin， methyl ether， emodin， rhubarb phenol main index component content and water-soluble total Fried， with multiple water， soaking time， extracting time and extracting times to examine factors， optimizing compound rhubarb purification liquid extraction process by orthogonal experiment.Results The best condition is soaking 30 minutes， extracting 1 hour， extracting for 3 times， to add ten times of water. Conclusion The method is effective optimized compound Dahuangjinghua liquid extraction process， reasonable process stability， and easy to operate.

Key words：Compound Dahuangjinghua liquid； Orthogonal experiment； Extraction technology

慢性腎功能衰竭常常因為腎臟疾病而發展導致，一般現慢性進行性腎實質損害，后來會演變成為尿毒癥，腎衰竭病情嚴重，病死率非常高，臨床上的治有相當大的困難。人工腎及腎移植技術由于科學技術的不斷發展顯現出比較好的療效，但花費昂貴、存在技術難度大，不能很好普及。開發運用中醫藥方法來治療慢性腎功能衰竭是熱門的研究方向，中醫藥治療方法具有良好發展趨勢。復方大黃凈化液（大黃、附子、桂枝等七味藥材）是繼承廣西壯族自治區中醫醫院腎內科老專家豐富臨床經驗，遵循\"補腎與瀉濁\"、\"養血填精與活血化瘀\"相結合的辨證治療思路，經由多年大量臨床實踐探究而研發出的方劑，其運用\"瀉濁\" 原則來指導并通過結腸透析來進行慢性腎功能衰竭治療。

本研究釆用正交試驗設計，以干浸膏收率、大黃五種游離蒽醌含量作為評價指標對提取時間、加水量、提取次數和浸泡時間四個因素進行了優化，確定了制劑提取工藝，為規范其提取制備工藝，發揮其最大臨床療效，提供試驗依據。

1資料與方法

1.1儀器 LC-20AT高效液相色譜儀；GH-252電子分析天平；HH-W420數顯三用恒溫水箱；KQ3200DE型數控超聲波清洗器；CD-UPT-II-10L超純水機；電爐。

1.2試藥 大黃、附子、桂枝等七味藥材均符合《中國藥典》2010年版一部各品種項下標準。大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃素、大黃酚對照品（購自中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純，水為超純水。

1.3方法

1.3.1正交實驗設計 選取浸泡時間、加水量、煎煮時間和煎煮次數作為正交試驗的考察因素，各取三水平，以大黃五種蒽醌總含量和干浸膏收率為評價指標，所選因素水平，見表 1。

1.3.2樣品的制備 試驗方法：分別按處方比例稱取全方藥材九份，按正交設計表L9（34）項下實驗條件進行實驗，藥液分別濃縮定容至1000 mL，備用。

1.3.3蒽醌含量測定[2] 分別制備供試品溶液和對照品溶液，確立色譜條件：流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15）；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；進樣量：20 μL。理論塔板數按大黃素峰計算應不低于3000。精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，采用外標法分別計算大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃酸等大黃蒽醌含量。

1.3.4干浸膏收率測定 精密吸取各正交試驗樣品液20 mL，水浴蒸干后迅速精密稱定重量，計算干浸膏收率。

1.3.5評分標準 將測定大黃五種蒽醌含量作為主要確定提取效率的總體優化指標；另增加干浸膏收率作為一個工藝優化的總體指標。以兩項指標的綜合評分，規定綜合評分滿分為1，總蒽醌含量綜合評分權重系數分別定為0.7，以總蒽醌含量最高為定為0.7；干浸膏收率綜合評分權重系數分別定為0.3，以最高者定為0.3。

2結果

2.1提取工藝正交試驗結果 試驗結果見表1，方差分析見表2。

2.2影響因素 數據表明極差中C>B>A>D，說明因素C提取次數為主要因素，因素B提取時間其次，因素A加水倍數量影響比較小，因素D浸泡時間對本實驗的影響最小。即總蒽醌含量和干浸膏收率受煎煮次數影響最大，煎煮時間其次，受加水量影響較小，而受浸泡時間影響最小。

2.3各列水平情況 第一列因素A加水倍數量K3>K2>K1；第二列因素B提取時間K3>K2>K1；第三列因素C提取次數K3>K2>K1；第四列因素D浸泡時間K1>K2>K3。所以，煎煮提取條件優選各因素水平為A3B3C3D1，即加水10倍量，浸泡30 min，煎煮90 min，提取3次。

2.4方差分析 C因素煎煮次數具有顯著性， A因素加水量、B因素煎煮時間、D因素浸泡時間等因素不具顯著性。因此，為節約水、電和工時，降低成本，確定水煎煮提工藝方案為A3B2C3D1，即加10倍量水， 浸泡30 min，提取3次，60 min/次，見表3。

2.5驗證試驗 為了驗證正交實驗結果的準確性，以保證復方大黃凈化液的煎煮提取工藝的合理可靠，按照正交試驗優化的提取工藝條件進行重復驗證試驗。結果表明采用優選的工藝條件進行水煎煮提取，這三份藥材的提取效率均達到了較高水平，且工藝穩定，適用于大生產，見表4。

3討論

正交設計是一種高效、快速的多因素試驗設計方法，可用最少的試驗次數篩選出最佳試驗條件。本實驗采用三水平四因素的正交實驗，以大黃五個蒽醌總量和干浸膏收率為評價指標對制備工藝進行優化。在單因素實驗結果中表明浸泡時間為30 min時提取率最高，加水量為8倍量時提取率最高，提取時間為60 min時提取率最高，提取次數為4次時提取率最高，這與優化提取工藝條件加10倍量水，浸泡30 min，提取3次，60 min/次大體相一致，結合最佳工藝驗證試驗實驗以及中試產品生產實驗表明，正交實驗優選煎煮提取工藝條件合理、穩定，工藝條件較易控制，具有良好的連續性、穩定性，可操作性強，應用設備為普通常用生產設備，符合復方大黃凈化液大生產實際需要。

參考文獻：

[1]郭志偉，劉琳娜.大黃及其有效成分的藥理研究概況[J].中國藥房，2006，17（22）：1741.

[2]伍小燕，黃權芳，陳朝.正交試驗法優選復方大黃灌腸液的提取工藝[J].時珍國醫國藥，2013，24（7）：1639-1641.

編輯/張燕