青天葵組織培養(yǎng)條件優(yōu)化

摘要：分別以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，采用正交試驗(yàn)研究植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)青天葵根狀莖繁殖和新球莖誘導(dǎo)的影響，進(jìn)而優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)。結(jié)果表明：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根狀莖增殖，增殖倍數(shù)為6.5；MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA適于誘導(dǎo)新球莖獲得再生植株，誘導(dǎo)系數(shù)為11.5，球莖移栽發(fā)芽成活率達(dá)到90%。

關(guān)鍵詞：青天葵；根狀莖；球莖；誘導(dǎo)；增殖

中圖分類號(hào)： Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）07-0066-03

收稿日期：2013-10-17

基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金（編號(hào)：2011GXNSFA018189）。

作者簡(jiǎn)介：李林軒（1986—），男，廣西全州人，助理研究員，從事中藥資源保護(hù)與開發(fā)利用研究。E-mail：starry1125@sina.com。

通信作者：白隆華，研究員，從事中藥資源保護(hù)與利用研究。E-mail：whitefh2008@126.com。青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭[Nervilia fordii （Hance）Schitr]的葉或帶球莖的葉，別名獨(dú)葉蓮、獨(dú)腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。青天葵性平，味苦，甘、涼，有清肺止咳、健脾消積、清熱解毒、消結(jié)散疬等功效，主治肺癆咯血、肺熱咳嗽、小兒肺炎、急性喉炎、 口腔炎、咽喉腫痛、瘰疬、瘡瘍腫毒、跌打損傷等[1]。青天葵是廣西特產(chǎn)藥材，也是我國出口創(chuàng)匯主要藥材，經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高，主產(chǎn)于廣西、廣東、四川、云南等地，屬于多年生宿根小草本。該物種瀕臨近危，已被列入中國物種紅色名錄[2]。栽培試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，青天葵組培球莖不僅能正常生長(zhǎng)，而且在相同條件下栽培組培球莖優(yōu)于野生球莖[3]。為了解決青天葵產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種源短缺的問題[4-7]，本研究利用現(xiàn)代生物技術(shù)優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)條件，以期為青天葵組織培養(yǎng)規(guī)模化生產(chǎn)育苗提供技術(shù)支撐。

1材料與方法

1.1材料

供試材料采自廣西藥用植物園科研基地內(nèi)引種栽培、生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的植株，經(jīng)廣西藥用植物園鑒定，選取其球莖為外植體。將球莖在洗潔精溶液中浸泡5 min，清洗干凈，用自來水沖洗10 min，置于0.1%氯化汞溶液（加1～2點(diǎn)的吐溫）浸泡消毒10 min，再用無菌水浸洗5次，然后直接將球莖接種于1/2MS+2.0 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上[8]，培養(yǎng)條件為pH 值5.8，平均照度2 000 lx，光照時(shí)間12 h/d，溫度（25±3） ℃，30 d后將其誘導(dǎo)出芽形成根狀莖，作為試驗(yàn)材料（圖1）。

1.2方法

1.2.1根狀莖繁殖取無菌根狀莖約2 cm長(zhǎng)的小段，接入添加不同濃度的6-BA、NAA、IAA（表1）的MS基本培養(yǎng)基中，觀察其對(duì)青天葵根狀莖繁殖的影響。

3結(jié)論與討論

6-BA是最重要的細(xì)胞分裂素，能促進(jìn)細(xì)胞分裂、非分化組織分化、側(cè)芽生長(zhǎng)等；NAA是植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大、誘導(dǎo)形成不定根等作用；IAA是植物生長(zhǎng)素，能促進(jìn)細(xì)胞分裂與細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)形成不定根[9]。多種因素組合能更有效促進(jìn)植物生長(zhǎng)，因此在MS培養(yǎng)基中配合使用6-BA、NAA、IAA對(duì)青天葵生長(zhǎng)具有較大影響。本研究表明，青天葵根狀莖增殖的最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA，在該培養(yǎng)基上形成根狀莖的數(shù)量最多，增殖數(shù)為6.5倍，且根狀莖粗細(xì)適中。

青天葵為蘭科植物，和其他蘭科植物一樣靠球莖繁殖。蘭科植物球莖的增殖方式在蘭科植物工業(yè)化上尤為重要[10]。杜勤等對(duì)青天葵組織培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)，在1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個(gè)月，根莖上長(zhǎng)出綠色的芽，并伸展成為葉柄和葉片，并在葉柄下端長(zhǎng)出白色的根[8]，這與本研究結(jié)果相似，都是使用細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)激素按1 ∶1比例進(jìn)行培養(yǎng)，青天葵根狀莖可以直接形成植株。但是直接形成植株的誘導(dǎo)率遠(yuǎn)低于新球莖誘導(dǎo)率，植株移栽成活率也低于球莖，且試管苗沒有球莖便于攜帶和運(yùn)送，不利于青天葵大規(guī)模生產(chǎn)與種植。但可為新品種遺傳改良提供材料。本研究表明，球莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，在該培養(yǎng)基中青天葵球莖誘導(dǎo)系數(shù)為11.5，且球莖質(zhì)量好，球莖發(fā)芽成活率達(dá)到90%。這與凌征柱等使用的MS+2.0 mg/L NAA誘導(dǎo)培養(yǎng)基[11]稍有不同，但都是使用高濃度生長(zhǎng)激素進(jìn)行球莖誘導(dǎo)。

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