吡唑并[1 5-a]嘧啶酮類M通道開放劑脂水分配系數的測定及計算

摘要：目的計算并測定吡唑并[1，5-a]嘧啶酮類（PPOs）化合物QO-58，QO-58-L及QO-58-Cl的脂水分配系數，并比較兩者的相符程度。方法搖瓶法（正辛醇/水）處理樣品，水相用C18固相萃取小柱濃縮，高效液相色譜外標法測定QO-58，QO-58-L和 QO-58-Cl水相和油相中的濃度，并分別計算其脂水分配系數（log P）。結果QO-58的logP=2.43，QO-58-L的logP=1.07，QO-58-Cl的logP=5.50。結論PPOs結構修飾后的脂水分配系數發生了較大改變，與計算結果趨勢相符。關鍵詞：高效液相色譜法；QO-58；QO-58-L；QO-58-Cl；脂水分配系數

Detection and Calculation for Lipohilicity ( Log P ) of PPOs compound M Channel Openers

LI Rui-hong1，SHEN Li-ru2，QI Jin-long3

(1.Department of Pharmacy ，Children's Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050031，Hebei，China;2.Tangshan City Food and Drug Inspection Center，Tangshan 063000，Hebei，China;3.Department of Pharmacology，Hebei Medical University，Shijiazhuang 050071，Hebei，China)

Abstract：ObjectiveTo calculate and detect the lipohilicity ( Log P ) of PPOs compound， including QO-58， QO-58-L， QO-58-Cl as M channel openers， and to compare the conformity of two results.MethodsDetermined by high performance liquid chromatography， the peak area of QO-58， QO-58-L and QO-58-Cl can infer their lipid-water partition coefficient ( octanol / water ). The fixed phase is Spherisorb C18 ( 34/118 ) 10L 4.6 × 250 mm reverse column， and the mobile phases are acetonitrile-0.2mol/L ammonium acetate ( 57:43， QO-58 )， acetonitrile-0.2mol/L ammonium acetate ( 57:43， QO-58-L )， methanol-0.2mol/L ammonium acetate ( 85:15， QO-58-Cl ).ResultsQO-58 log P=2.43， QO-58-L log P=1.07， QO-58-Cl log P=5.50.ConclusionAfter structural modification， the lipid-water partition coefficient of PPOs will change. Software verifies its trend correct.

Key words：HPLC; QO-58; QO-58-L; QO-58-Cl; log P

M通道是一種電壓依賴性非失活的鉀離子通道，屬于KCNQ家族。越來越多的研究證實KCNQ基因突變或M通道功能失調與許多疾病有關，并且已經發現一些藥物可以通過調節M通道達到治療作用[1]。PPOs系列化合物是我們發現的結構新穎的具有完全自主知識產權的M通道開放劑。通過藥理實驗證明優選化合物QO-58，具有選擇性高、治療效果好的優點。

QO-58的結構式為：

QO-58-L的結構式為：

QO-58-Cl的結構式為：

臨床前研究表明，該化合物對癲癇、疼痛均有效。但其溶解度較差，血腦屏障透過率低。因此，需對該藥物進行結構改造，改善溶解度，增大脂溶性，改善血腦透過率，促進新藥的進一步開發。

脂水分配系數（logP）是用來表示化合物的親脂性、透過生物膜的性能及與受體（包括酶）間疏水性結合力的一種參數[2]。疏水性影響藥物吸收、生物活性、疏水性藥物受體相互作用、分子代謝變化毒性等， 在定量構效關系的研究中很重要[3，4]。本實驗擬通過研究 QO-58及其結構改造后的藥物 QO-58-L和QO-58-Cl的脂水分配系數變化，發現改善其溶解性的結構改造規律。

1資料與方法

1.1儀器與試劑

1.1.1主要儀器LC-20A 型高效液相色譜儀（包括 LC-20A 泵， SPD-M20A PDA 檢測器，SIL-20A自動進樣器，島津 LC-solution 色譜工作站（日本島津公司）各種型號標準口玻璃儀器（上海玻璃儀器廠）。

1.1.2主要試劑，見表1。

1.2實驗部分

1.2.1 QO-58的測定

1.2.1.1 色譜條件色譜柱： Inertsil QDS-3( 4.6 mm×250 mm， 5μm )；流動相：乙腈-0.2M乙酸銨（57:43）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：285 nm；柱溫：35℃。

1.2.1.2 QO-58 標準溶液的制備與檢測取 QO-58 適量，精密稱定，用乙腈制成0.0108 mg/mL的溶液。進 HPLC測定，進樣量10 μL。平行測3份，測定平均值。

1.2.1.3 QO-58樣品處理取一定量正辛醇飽和的水，加入定量過量的QO-58，超聲15 min，用0.45 μm的微孔濾膜過濾。取濾液40 mL，上C18小柱（預先用甲醇潤濕）。接著用洗脫液（乙腈：乙酸銨=57:43）共3.5 mL洗脫，即可將C18小柱上的QO-58全部洗脫下來。最后，將洗脫液 10 μL 注入 HPLC 儀。平行測3份，外標法定量，測定平均值。

取一定量水飽和的正辛醇，加入定量過量的QO-58，超聲15 min，用0.45 μm的微孔濾膜過濾。取濾液300 μL，用乙腈稀釋10倍后，取10 μL進HPLC。平行測3份，外標法定量，測定平均值。軟件預測其CLog P值為4.08。

1.2.2 QO-58-L的測定

1.2.2.1 色譜條件色譜柱：Inertsil QDS-3( 4.6 mm×250 mm， 5μm )；流動相：乙腈-0.2M乙酸銨（57:43）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：285 nm；柱溫：35℃。

1.2.2.2 QO-58-L標準溶液的制備與檢測取QO-58-L 適量，精密稱定，溶于約含30%水的乙腈溶液中，制成0.2040 mg/mL的標準品，進HPLC，進樣量20 μL。平行測3份，測定平均值。

1.2.2.3 QO-58-L樣品處理取一定量正辛醇飽和的水，加入定量過量的QO-58-L，超聲15 min，用0.45 μm的微孔濾膜過濾。取濾液3 mL，上 C18小柱（預先用甲醇潤濕）。接著用洗脫液（乙腈：乙酸銨=90:10）共13 mL洗脫，即可將C18小柱上的QO-58-L全部洗脫下來。最后，將洗脫液20μL進HPLC。平行測3份，外標法定量，測定平均值。

取一定量水飽和的正辛醇，加入定量過量的QO-58-L，超聲15 min，用0.45 μm的微孔濾膜過濾。取濾液100 μL，加入水380 μL，乙腈1520 μL，稀釋20倍后，取 20 μL 進HPLC。平行測3份，外標法定量，測定平均值。軟件無法預測出其CLog P值。

1.2.3 QO-58-Cl的測定

1.2.3.1色譜條件色譜柱：Inertsil QDS-3( 4.6 mm×250 mm， 5μm )；流動相：甲醇-乙酸銨（85:15）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：255 nm；柱溫：35℃。

1.2.3.2 QO-58-Cl標準溶液的制備與檢測取QO-58-Cl適量，精密稱定，用乙腈制成0.1440 mg/mL的溶液。然后，進HPLC，進樣量為20 μL。平行測3份，測定平均值。

1.2.3.3 QO-58-Cl 樣品處理取一定量正辛醇飽和的水，加入定量過量的QO-58-Cl，超聲15 min，用0.45 μm的微孔濾膜過濾。取濾液40 mL，上 C18小柱（預先用甲醇潤濕）。接著用洗脫液（乙腈：乙酸銨=90:10）共3.5 mL洗脫，即可將C18小柱上的QO-58全部洗脫下來。最后，將洗脫液20 μL 注入 HPLC 儀。平行測3份，外標法定量，測定平均值。

取一定量水飽和的正辛醇，加入定量過量的QO-58-Cl，超聲15 min，用0.45 μm的微孔濾膜過濾。取濾液100 μL，用乙腈稀釋20倍后，取20 μL進HPLC。平行測3份，外標法定量，測定平均值。軟件預測其CLog P值為6.62。

2結果

見表2。

QO-58:logP=log■=log■=2.43

QO-58-L:logP=log■=log■=1.07

QO-58-Cl:logP= log■=log■=5.50

3討論

油水分配系數的測定有搖瓶法、產生柱法和反相高效液相色譜法。產生柱法測定步驟較多，達平衡時間過長，而反相高效液相色譜法需要用一系列已知P值的同系物來建立標準曲線，成本高，故而選用經典的搖瓶法來測定QO-58，QO-58-L，QO-58-Cl的油水分配系數，該法操作簡便，結果準確。

油水體系的選擇 許多有機溶劑曾被用來模擬生物相，如氯仿、橄欖油、正辛醇等。鑒于正辛醇的結構和理化性質的特點，更近似生物相，目前文獻也多以正辛醇作為有機相。本文選用的為正辛醇-水系統。

從QO-58，QO-58-L，QO-58-Cl的結構和脂水分配系數值可以推斷該藥脂溶性良好，可能有較高的組織分布。

QO-58-L為QO-58的賴氨酸鹽，所以軟件將其視為兩個化合物，無法預測其脂水分配系數（LogP）。實驗結果顯示，QO-58-L在水相和油相中的溶解度都明顯升高?？赡苁且驗槌甥}的緣故。

參考文獻：

[1]賈慶忠，張海林.M通道研究進展[J].生理科學進展，2005，36（4）：361.

[2]蘇笠，楊勁，王友群，等.化合物脂水分配系數計算軟件及比較研究[J].中國藥科大學學報，2008，39(2):178.

[3]卡米爾·喬治·維爾穆特.創新藥物化學[M].第 2版.廣州: 廣東世界圖書出版公司，2005:447-479.

[4]王連生，韓朔睽，孔令仁，等.分子結構、形式與活性[M].北京:化學工業出版社，1997:26-40.編輯/申磊