中藥露蜂房蛋白對白血病患者免疫功能影響的研究

摘要：目的 研究中藥露蜂房蛋白對白血病患者免疫功能的影響，探討露蜂房蛋白治療白血病的免疫學機制，為開發新的抗白血病藥物和臨床應用提供實驗和理論依據。方法 分離急性白血病患者骨髓單個核細胞，采用細胞培養技術、免疫組織化學方法和圖像分析系統，研究露蜂房蛋白對急性白血病患者（AL）骨髓中T 細胞亞群和 NK 細胞的作用。結果 免疫組化顯示，露蜂房蛋白能提高AL患者骨髓中CD3+ T細胞、CD4+T細胞、NK細胞數量，CD4/CD8值升高。圖像分析系統檢測免疫組化陽性細胞的光密度值（OD），結果CD3、CD4、CD16表達增強，CD8表達減弱，經統計學處理，差異有顯著性(P<0.05)。結論 中藥露蜂房蛋白能調整AL患者骨髓T細胞亞群的分布和促進NK細胞的表達。

關鍵詞：露蜂房蛋白；白血病；細胞免疫

露蜂房是我國的傳統中藥，具有抗腫瘤的作用，其主要成分是各種蛋白質。近年來，人們對露蜂房蛋白的抗白血病作用進行了研究，體外實驗和動物實驗均顯示露蜂房蛋白具有抗白血病作用[1，2]，我們從免疫學機制對露蜂房蛋白的抗白血病作用進行了初步研究。

1資料與方法

1.1一般資料30例2010年～2012年我院初診急性白血病(AL)患者，急淋（ALL）8例，急非淋22例（ANLL），男性19例，女性11例，中位年齡45(16～69)歲。診斷標準符合張之南血液病診斷及療效標準。

1.2主要試劑露蜂房蛋白由濰坊醫學院張圣明教授惠贈，含有NVPl、NVP2、NVP3、NVP4四種蛋白，平均濃度為0．588mg／ml。鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD16抗血清購自北京中山生物技術有限公司。

1.3骨髓單個核細胞的分離和培養患者入院后抽取骨髓液1~2ml，Ficoll淋巴細胞分離液分離出骨髓單個核細胞， RPMI1640培養液培養，培養瓶中加入濃度為0．588mg/mlNVP，于37℃含5%CO2飽和濕度培養箱培養72h，同時設陰性對照。

1.4免疫組化測定AL患者T細胞亞群實驗組和陰性對照組細胞培養72h后收集，0.01MPBS洗2次，涂片備用。按試劑盒說明檢測患者CD3、CD4、CD8陽性細胞，計算陽性率。

1.5免疫組化測定AL患者NK細胞同T細胞亞群檢測。

1.6圖像分析采用CMIAS系列多功能真彩圖像分析儀，測定陽性細胞的光密度值(OD)，并進行組間統計學分析。

1.7統計分析所有數據以（x±s）表示，用SPSS10.0統計軟件進行方差分析，以P＜0.05為差異有顯著性意義。

2結果

2.1免疫組化T細胞亞群、NK細胞檢測結果CD3、CD4、CD8、CD16分子表達于細胞膜上，染色后呈紅色。NVP組CD3+T細胞和CD4+T細胞陽性率增高，與陰性對照組比較有顯著性差異（P<0.05）；CD8+T細胞數量下降，CD4+/ CD8+升高，與陰性對照組比較有顯著性差異（P<0.05）；NVP組CD16細胞陽性率增高，與陰性對照組比較有顯著性差異（P<0.01）。見表1。

2.2圖像分析系統檢測結果圖像分析OD值顯示，NVP組CD3、CD4 分子表達明顯增強（P<0.05）， CD8分子表達減弱（P<0.05）。NVP組 CD16 分子表達明顯增強（P<0.05）。見表2。

3討論

白血病作為一種惡性腫瘤，可以通過多種途徑干擾和抑制機體的免疫功能，致使機體不能及時有效的清除白血病細胞，使白血病細胞在體內增殖、擴散、浸潤，進一步削弱了機體的免疫功能，形成惡性循環。T淋巴細胞是機體免疫系統中具有識別抗原，活化、輔助抑制和殺傷腫瘤細胞作用的一群細胞。

既往研究發現，露蜂房蛋白對白血病細胞具有明顯抑制作用，能通過增強促凋亡基因表達來誘導白血病細胞凋亡。本實驗中，NVP組CD3+T細胞和CD4+T細胞數量上升，CD8+T細胞數量下降，CD4+/CD8+比例上升。CD4+T細胞數量增加，NK細胞噬細胞的激活作用增強，從而更有效的發揮它們的抗白血病細胞作用。免疫功能改善又會提高機體的抗腫瘤作用，從而形成良性循環。這可能是露蜂房蛋白治療白血病的免疫調節機制之一。

參考文獻：

[1]時彥，張圣明，張雪莉，等．露蜂房純化蛋白對急性髓系白血病患者骨髓細胞的影響[J]．中國藥理學通報，2007，23(5)：685-687.

[2]辛先貴，張圣明，時彥，等．中藥露蜂房蛋白對人紅白血病細胞增殖的影響[J]．解剖學報，2006，37(1)：73-78.

編輯/哈濤