一種提高抗酸桿菌檢出率的染色方法

摘要：目的 提高抗酸桿菌的檢出率。方法 通過對經典的Ziehl-Neelsen抗酸桿菌染色法的改良，雙氧水氧化20min。染液經微波作用3min下，染液迅速成熟，立即滴加在切片上，室溫40min，抗酸桿菌較易著色，并保持在鹽酸酒精作用下不脫色。結果 抗酸桿菌呈鮮艷的紅色，背景成藍色。結論 雙氧水氧化作用和微波技術在抗酸染色中聯合使用，能提高抗酸桿菌檢出率。

關鍵詞：抗酸染色；氧化；微波；方法

抗酸染色是針對抗酸桿菌進行的一種染色方法，它的原理是，抗酸桿菌的細胞壁中含有較多的脂質，占菌體干重的20%~40%，經5%石炭酸復紅加溫然后能抵抗3%的鹽酸酒精的脫色[1]。我們通過對Ziehl-Neelsen抗酸桿菌[2]染色法的改良，陽性檢出率提高，切片著色層次清晰。

1 資料與方法

1.1復紅染液的配制

1.1.1堿性品紅酒精液；堿性品紅5g，無水酒精100ml，細細碾磨，讓品紅完全溶解于無水酒精中，

1.1.2苯酚水溶液；稍加溫使苯酚結晶融化，量取5ml苯酚溶液，95ml蒸餾水，混勻待用。取堿性品紅液1ml，苯酚水溶液9ml，混合即復紅染液

1.2 方法

1.2.1常規石蠟切片，一般3~5um，70℃烤片40min，放入1：1松節油、汽油中脫蠟2次，10min/次。

1.2.2吸水紙檫干組織周圍的液體，流水稍洗，滴加3%H2O2室溫氧化20min，流水沖洗。

1.2.3取50ml復紅液，放到微波爐中（品牌：美的，型號：MM721AAU-PW，工作頻率2450MHz），中檔3min，然后取出，立即滴加到切片上，室溫染色40min。

1.2.4流水沖去多余的染液，3%的鹽酸酒精分化，直到切片無紅色染液流下時，流水沖洗5min。

1.2.5滴加甲苯胺藍染色5s，流水稍洗。吹干切片，二甲苯透明。

2 結果

見圖1，其中抗酸（麻風）桿菌呈鮮紅色，背景藍色，對比清晰。

3 討論

微波是一種特殊的電磁波，能提高分子的運動能力，加速染液的成熟，立即滴加在切片上，也增加了染液的穿透力和與組織間的親和力[3]。組織切片脫蠟，我們采用的1:1的松節油、汽油。它比二甲苯的優點它可以保存細胞壁的完整性和脂質不受破壞，并且使在脫水過程中被溶解的部分得已修復，從而著色力好。如果細胞壁的完整性破壞，隨之抗酸性也會減弱或消失，可能導致染色失敗[4]。通過3%H2O2氧化作用，使抗酸桿菌的菌體增粗，其脂質包膜更易著色，抗酸陽性切片的保存時間長，對比清晰。室溫保存3，4年的切片，再次進行抗酸染色，仍可查見大量的結核桿菌。我們通過反復試驗，室溫40min可以到達加溫的染色效果，而且背景教加溫染色清晰。

參考文獻：

[1]周正任，李凡，編著.醫學微生物學[M].第6版.北京:人民衛生出版，2003，193-194.

[2]中華醫學會編著.臨床技術操作規范[M].北京:人民軍醫出版社，2004 .139.

[3]陳明城，田野，張偉，等.微波在抗酸染色中的應用改進[J].中國組織化學與細胞化學雜志，2010.315.

[4]梁建中，陳倪勇，劉勇冬，等.改良傳統組織切片抗酸染色法[J].廣東醫學，2005.11，26(11) 1545.

編輯/王海靜