新疆石榴皮生用與制用對急性腹瀉大腸濕熱證模型大鼠IL—1β、IL—6影響的實驗研究

摘要：目的 觀察新疆石榴皮生用與制用對急性腹瀉大腸濕熱證模型大鼠IL -1β、IL-6及腸道病理變化的影響。方法 將50只清潔級Wistar大鼠隨機分為空白組、模型組、治療1組、治療2組、對照組5組各10只。除空白組外，其余4組采用高糖高脂飲食、高溫高濕環境、番瀉葉水煎劑灌胃建立急性腹瀉大腸濕熱證模型。造模同時治療1組、2組及對照組分別予生石榴皮、制石榴皮煎液及思密達灌胃6d，觀察各組大鼠一般狀況，結腸回腸病理及IL-6（白介素-6）及IL -1β（白介素-1β）水平。結果 ①治療1組、治療2組及對照組較模型組大鼠大便成形、一般狀況改善；②模型組、治療2組IL-1β、IL-6含量顯著高于空白組，差異有統計學意義（P<0.05）；治療1組、治療2組及對照組IL-1β、IL-6水平較模型組下降，差異有統計學意義（P<0.05）；③治療1組、2組較模型組腸道炎癥變化減輕，且治療1組改善效果更顯著。結論新疆石榴皮在改善急性腹瀉大腸濕熱證模型大鼠一般狀況，腸道炎癥反應方面生用優于制用；在降低IL -1β、IL-6水平方面，生用較制用指標更接近空白組。

關鍵詞：急性腹瀉；大腸濕熱證；新疆石榴皮；實驗研究

石榴皮為石榴干燥成熟的果皮，曬干生用或炮制炒用，其性溫、味酸澀，具有澀腸止瀉、止血、殺蟲之功效。研究發現石榴皮的主要成分是總多酚，新疆石榴皮總多酚含量高于內地，在藥效學方面有不可替代的優勢 [1-2]。近年來研究報道針對急性腹瀉大腸濕熱證新疆石榴皮有較好的止瀉作用，為進一步探討生用和制用療效及機理，進行本次研究，具體內容如下：

1 臨床資料

1.1實驗動物及飼料 6～8w齡雌性Wistar大鼠50只，體重 160～200g。高糖高脂飼料為普通飼料加5%～10%的蜂蜜，12%豬油制成。（均由新疆醫科大學動物實驗中心提供）

1. 2藥品 ①石榴皮（購自新疆維吾爾醫院），產地新疆。石榴皮的炒制及水煎液的制備均由新疆醫科大學中醫學院實驗室完成，制成1g/ml （即1mL含生藥1.0g）的藥液。②思密達（博福-益普生（天津）制藥有限公司生產，批準文號：國藥準字H20000690）制成濃度為8%的混懸液。③番瀉葉參考文獻[3]制成0.3g/ml（即1mL含生藥0.3g）的藥液。

1.3試劑 IL-1β、IL-6酶聯免疫分析試劑盒購自武漢博士德生物有限公司。

1.4儀器 人工氣候箱SHH-500GS型、電子體重秤、低溫離心機KWS-MAE型、移液器、冰箱BCD-206型、BIO-RAD酶標儀Xmark、智能型電熱恒溫培養箱、全自動洗板機、超薄切片機、顯微鏡、照相機等。

2 方法

2.1 造模方法

2.1.1 實驗分組及模型制備 參照李學、魏連波及周干南等[4]造模方法將50只清潔級Wistar大鼠，適應性喂養3d后隨機分為空白組、模型組、治療1組、治療2組及對照組5組，每組10只。空白組予自然環境、普通飼料喂養，其余4組造模。造模過程如下：①高糖、高脂飼料飼養10d；②放置于高溫倉中（溫度為35℃，相對濕度85﹪）持續8h/d，連續3d；③予自然環境，普通飼料喂養1d后自由飲水，禁食10h予番瀉葉水煎劑0.3g/ml， 1.0 mL/100g/d灌胃。

2. 1.2給藥方法 造模成功后，治療1組、2組、對照組及模型組上午定時予番瀉葉煎劑（0.3g/ml），1.0 mL/100g/d灌胃，1次/d，下午分別予生石榴皮煎劑（1g/ml）、制石榴皮煎劑（1g/ml） 、思密達混懸液（濃度為8%）1.0 mL/100g/d及等量蒸餾水灌胃，1次/d，共6d。

2.2檢測方法

2.2.1一般狀況的觀察 觀察大鼠的精神、活動、飲食水、毛發、肛周、糞便、體重等情況。

2.2.2血清IL-1β、IL-6測定 腹腔麻醉，取大鼠腹主動脈血5 mL，離心取上清液 2 mL于- 20C冰箱儲存； IL-1β、IL-6均采用酶聯免疫分析法，由新疆醫科大學一附院免疫實驗室協助檢測。

2.2.3結腸、回腸組織病理檢查（HE染色法） 取血后處死大鼠，切取結腸、回腸段各1cm，清水沖凈置于10%福爾馬林溶液浸泡24h以上固定，由新疆醫科大學病理實驗室脫水、透明、浸蠟、切片、HE染色。顯微鏡下觀察染色情況并拍照。

2.3 統計學方法 所有數據均采用SPSS？17.0軟件進行統計分析，以P<0.05表示有統計學差異。計量資料用均數±標準差（）表示，多組樣本比較單因素方差分析。

3 結果

3.1一般狀況觀察 造模鼠進入高溫倉后，精神不振，拱背懶動，食量減少，部分大鼠出現稀便；予番瀉葉水煎劑后大鼠精神萎靡、行動緩慢、被毛蓬松泛黃、食欲不振、飲水少、肛周紅腫、便溏、便色黃褐性黏味臭、體重下降。空白組大鼠活躍，大便呈顆粒狀，無上述改變。治療1組、治療2組及對照組用藥后大鼠諸癥較前改善、便次減少成形、穢濁氣味減輕、活動飲食水量增大、皮毛漸光澤、體重逐漸回升。治療2組個別大鼠見稍稀軟便。

3.2 5組大鼠IL-1β、IL-6含量測定見表1所示，①模型組、治療2組IL-1β、IL-6含量顯著高于空白組，差異有統計學意義（P=0.000，P<0.001）。②治療1組、2組及對照組IL-1β、IL-6水平較模型組下降，差異有統計學意義（P=0.000，P<0.001）。

3.3結腸、回腸組織病理檢查結果

3.3.1 模型組腸粘膜充血、水腫、滲出，有大量炎細胞浸潤，呈現急性炎癥反應。空白組腸粘膜完好，細胞形態無異常。如圖1、2所示。

3.3.2治療1組腸黏膜完整，細胞形態無異常，炎癥明顯好轉。對照組腸粘膜完整，細胞形態無異常、炎癥明顯好轉。如圖3、4所示。

3.3.3治療2組粘膜仍可見充血，水腫、黏膜下可見炎性細胞浸潤；對照組腸粘膜完整，細胞形態無異常、炎癥明顯好轉。如圖5、6所示。

4 討論

本實驗發現， 針對急性腹瀉大腸濕熱證模型大鼠的一般狀況、結腸、回腸炎癥改善方面，新疆石榴皮煎劑生用優于制用，在降低調控因子IL-1β、IL-6水平方面，新疆石榴皮生用指標更接近空白組。大腸濕熱證中醫辨證為熱證、實證，治用清熱利濕法，制石榴皮通過炒法加熱使藥性由溫變熱，其治療違背了中醫“熱者寒之”的治療原則。現代藥理研究石榴皮主要有效成分為鞣質，其具有收斂性，內服可治療泄瀉，加熱炮制后鞣質含量顯著降低，生石榴皮鞣質平均含量為13. 79%，制石榴皮碳鞣質平均含量為5. 99%[5]。后期藥理實驗結果亦表明本次實驗中石榴皮生品有效成分含量高于制品。

目前研究證實大腸濕熱證的發生與機體的免疫和炎癥過程相關，細胞因子IL-1、IL-2、IL-6水平升高[6]及腸道急性炎癥變化可能是大腸濕熱證的客觀指標。IL-1β介導了炎癥的重要過程，IL-6參與多種炎性疾病的病生過程在機體免疫反應中起重要作用。故本次試驗選用IL-1β、IL-6及大鼠腸道病理切片作為檢測指標。通過新疆石榴皮煎液生用與制用治療對比研究，為新疆石榴皮治療急性腹瀉大腸濕熱證提供藥理依據。

參考文獻：

[1]趙國平，戴慎，陳仁壽.中藥大辭典[M].2 版.上海：上海科學技術出版社，2006：301-302.

[2]陳孝娟，顧政一.不同產地的石榴總多酚的含量測定[J]，時珍國醫國，2011，22（53）：541-5.

[3]周干南，胡之華.小鼠腹瀉模型的制備與腹瀉指數的應用[J].中草藥，1994，25（4）：195-199.

[4]李 學，魏連波等.中醫大腸濕熱證模型SD大鼠腸道的病理變化[J].河北中醫藥學報，2004，19（4） ：4-5.

[5]崔翠翠.張學蘭.李慧芬炮制對石榴皮中沒食子酸、鞣花酸和鞣質含量的影響[J].中成藥，2010，32（4）：613-615.

[6]慕瀾，佟麗等.大腸濕熱證模型大鼠血清部分白細胞介素含量的變化[J].中國中西醫結合消化雜志，2003，11（5）：262-263.

編輯/蘇小梅