巴戟天多糖對去卵巢大鼠骨質疏松癥的防治作用

劉亦恒，吳多慶，朱振標，黃重，陳曉虹，張海英

(1.?？谑腥嗣襻t院骨科中心，海南?？?570208；2.海南醫學院人體解剖學教研室，海南?？?71101)

巴戟天多糖對去卵巢大鼠骨質疏松癥的防治作用

劉亦恒1，吳多慶1，朱振標1，黃重1，陳曉虹1，張海英2

(1.?？谑腥嗣襻t院骨科中心，海南?？?570208；2.海南醫學院人體解剖學教研室，海南?？?71101)

目的觀察巴戟天多糖對去卵巢大鼠骨質疏松癥的影響。方法成年雌性SD大鼠30只，隨機分為假手術組、模型組、巴戟天多糖組，每組10只。采用摘取雙側卵巢法建立骨質疏松模型，造模2周后開始給藥，給藥3個月后觀察巴戟多糖天對大鼠骨密度、骨礦物質含量、血清雌二醇、骨鈣素及1，25-二羥基維生素D3的影響。結果給藥3個月后，與模型組比較，巴戟天多糖組能顯著提高去卵巢大鼠的骨密度、骨礦物質、1，25-二羥基維生素D及骨鈣素的含量。結論巴戟天多糖對去卵巢所致的大鼠骨質疏松癥具有良好的防治作用。

骨質疏松；去卵巢大鼠；巴戟天多糖

骨質疏松癥(Osteoporosis，OP)是以骨量減少、骨組織顯微結構退化為特征，以致骨的脆性增高而骨折危險性增加的一種全身性骨病，是老年人，尤其是絕經后婦女最常見的代謝性骨病。中醫理論認為：腎為先天之本，“主骨生髓”，骨的生長、發育、強弱與腎精盛衰關系密切。南藥巴戟天屬茜草科植物巴戟天(Morinda officialis How)的干燥根，具有補腎助陽、強壯筋骨的作用?，F代研究證明，巴戟天含有多種化學成分，如蒽醌類、多糖類、氨基酸、烯醚萜及苷類等，多糖類在巴戟天含量占20%左右[1-2]。前期實驗表明，巴戟天多糖多糖能促進成骨細胞的增殖能力和ALP的活性，影響骨代謝[3]。本實驗觀察巴戟天多糖對雌性去卵巢大鼠骨質疏松癥的防治作用，為進一步研究巴戟天多糖治療骨質疏松癥提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器健康雌性SD大鼠30只，3個月齡，體重(270±20)g，購自海南醫學院；巴戟天藥材產于海南萬寧；大鼠雌二醇放射免疫測定盒(125I標記)購自北京北方生物技術研究所；骨鈣素、1，25-二羥基維生素D3、雌二醇ELISA試劑盒購自上海恒遠生物科技有限公司；DPX-L型雙能X射線骨密度儀(美國Lunar公司)；酶標儀(北京六一儀器)等。

1.2 方法

1.2.1 巴戟天多糖的制備取200 g巴戟天干制品粉碎，烘干，過40目篩，加入10倍體積的水，煮沸1 h，濾過，再加入3倍體積的乙醇，靜置12 h，收集沉淀，得巴戟天燥粗多糖；粗多糖加水復溶，用Sevag法脫蛋白(重復2次)，活性炭脫色，無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，濾過。用蒸餾水溶解沉淀物，用無水乙醇加至其濃度為85%，離心收集沉淀物，得巴戟天多糖純品。由海南醫學院藥學系制備鑒定。

1.2.2 去卵巢大鼠模型制備隨機取20只大鼠，用2%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔麻醉，取背側雙切口。于脊柱外側2 cm，髂前上棘上方1.5 cm，備皮去毛，消毒后切開局部皮膚、肌肉和腹膜，輕輕將脂肪團拉開并分離，暴露卵巢，結扎卵巢下端輸卵管，摘除卵巢，縫合切口。另10只大鼠只做手術切口，不去除卵巢。

1.2.3 實驗分組30只雌性SD大鼠分為三組，每組10只，分別為模型組(生理鹽水+去卵巢)，假手術組(生理鹽水+假手術)，巴戟天多糖組(去卵巢+ 100 mg/kg巴戟天多糖)。術后2周開始，巴戟天多糖組予灌胃給藥，假手術組和模型組給予等體積的生理鹽水，共12周。

1.2.4 骨密度及骨鈣、骨磷測定于術后3個月，在麻醉狀態下對各組大鼠用雙能X射線骨密度儀的小動物測量軟件測定右股骨頸的骨密度(BMD)。骨密度測定后收集大鼠右側股骨，馬福爐800℃灰化，灰化后標本測定骨中鈣、磷的百分含量。

1.2.5 血清生化指標測定于術后3個月采血，分別按照試劑盒操作說明檢測血清雌二醇、血清骨鈣素及1，25-二羥基維生素D3水平。

1.3 統計學方法采用-SPSS13.0軟件進行統計，計量數據以均數±標準差(±S)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 巴戟天多糖對去卵巢大鼠骨密度及骨鈣、磷的影響與假手術組比較，模型組的BMD和骨鈣、磷含量均降低，兩者之間差異具有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)；與模型組較，巴戟天多糖組的BMD和骨鈣、磷含量均升高，兩組之間差異具有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)，見表1。

表1 巴戟天多糖對去卵巢大鼠骨密度及骨鈣、磷的影響(±S)

表1 巴戟天多糖對去卵巢大鼠骨密度及骨鈣、磷的影響(±S)

注：與假手術組比較，aP＜0.01，bP＜0. 05；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

組別模型組假手術組巴戟天多糖組動物數(只) 10 10 10骨密度(g/cm2) 0.158±0.015a0.227±0.024 0.219±0.012d骨鈣(%) 61.47±2.86b64.98±1.35 64.19±1.26c骨磷(%) 27.64±1.21b29.74±1.47 29.37±1.85c

2.2 巴戟天多糖對大鼠血清雌二醇、骨鈣素和1，25-二羥基維生素D3的影響與假手術組比較，模型組大鼠血清雌二醇、骨鈣素和1，25-二羥基維生素D3水平顯著降低，兩者之間差異有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)；與模型組比較，巴戟天多糖組鈣素和1，25-二羥基維生素D3水平升高，兩者之間差異有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)，見表2。

表2 巴戟天多糖對去卵巢大鼠血清雌二醇、骨鈣素和1，25-二羥基維生素D的影響(±S)

表2 巴戟天多糖對去卵巢大鼠血清雌二醇、骨鈣素和1，25-二羥基維生素D的影響(±S)

注：與假手術組比較，aP＜0.01，bP＜0. 05；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

組別模型組假手術組巴戟天多糖組動物數(只) 10 10 10雌二醇(ng/L) 9.820±1.024a18.145±3.741 10.841±4.512骨鈣素(μg/L) 1.489±0.157b2.586±0.345 2.605±0.378c1，25-二羥基維生素D3(ng/L) 2.822±0.244a11.206±0821 7.186±0.428d

3 討論

骨質疏松癥是老年人尤其是絕經后婦女常見、多發的骨代謝疾病。婦女絕經后，由于卵巢功能下降，導致雌激素水平急劇下降，繼發甲狀旁腺功能亢進使降鈣素分泌不足，從而導致骨代謝平衡破壞，骨吸收大于骨形成，骨量逐漸減少和骨組織微結構退行性病變。故如何預防骨質疏松癥一直是相關領域的研究熱點。

巴戟天是我國四大南藥之一，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的功效。近年來，有研究表明巴戟天能增加去卵巢小鼠子宮重量及血清雌二醇含量，具有雌激素樣作用[4]。進一步的研究發現巴戟天多糖可以刺激體外培養的骨髓基質細胞及成骨細胞增殖[5]，這預示著巴戟天用于防治骨質疏松癥具有重要的研究意義。

骨密度(BMD)值是反映骨質疏松程度，預測骨折危險性的重要依據，也是診斷骨質疏松的重要指標。骨質疏松癥總是伴隨著骨總量的丟失，即是鈣、磷的喪失，因此應用骨鈣、骨磷含量的變化評價骨質疏松藥物治療的有效性已得到了廣泛的認同。大鼠切除卵巢后，模型組的BMD和骨鈣、骨磷含量下降，給藥3個月后巴戟天多糖組大鼠BMD和骨鈣、骨磷含量均升高，說明巴戟天多糖有促進大鼠骨礦物含量增加，提高BMD的作用。

骨鈣素又稱骨γ-羧谷氨酸包含蛋白(Bone gamma-carboxyglutamic-acid-containing proteins，BGP)，是成骨細胞合成并分泌的，在鈣的生物調節中起著重要的調節作用。大鼠切除卵巢后，由于雌激素減少，骨平衡被破壞，骨轉換增加，骨量丟失增多，從而形成骨質疏松。實驗中巴戟天多糖組BGP水平升高，提示巴戟天多糖具有抵制骨吸收，降低骨轉換，提高骨質量的作用。

維生素D(Vitamin D)為代謝物及其類似物對骨質疏松的防治有重要作用。1，25-二羥基維生素D3是維生素D生物活性的最高形式[6]，其主要靶器官是小腸黏膜、骨骼、腎小管，在維持鈣、磷代謝平衡中有重要作用，能增加腸道對鈣的吸收。已有動物實驗證實了血清1，25-二羥基維生素D3與骨密度之間有緊密關聯，還能促成骨細胞的增殖和堿性磷酸酶的合成[7-8]。大鼠切除卵巢后，模型組中的1，25-二羥基維生素D3水平下降，給藥3個月后巴戟天多糖組1，25-二羥基維生素D3升高，說明巴戟天多糖提高血清中1，25-二羥基維生素D3含量，達到促進腸道對鈣、磷吸收的作用。

綜上所述，巴戟天多糖可以通過提高骨鈣素含量達到促進成骨的作用，增加了去卵巢大鼠骨密度、骨礦物質含量；通過提高1，25-二羥基維生素D3濃度，促進腸道對鈣、磷的吸收，維持血鈣濃度以促進鈣在骨的沉積，具有減緩骨吸收的作用。對于去卵巢大鼠所致骨質疏松有較好的防治作用。

參考資料：

[1]梁麗敏,徐勇.南藥巴戟天多糖的研究進展[J].食品工業科技, 2011,32(8):478-450.

[2]Zhang HL,Zhang QW,Zhang XQ,et al.Chemical constituents from the roots of Morinda officinalis[J].Chinese Journal of Natural Medicines,2010,8(3):192-195.

[3]崔可賾,劉亦恒,張壽,等.巴戟天多糖含藥血清對體外成骨細胞DKK-1表達的影響[J].時珍國醫國藥,2012,23(4):871-872.

[4]王寅,張巧艷.巴戟天雌激素樣作用的實驗研究[J].時珍國醫國藥,2011,22(3):527-528.

[5]李楠,王和鳴,郭素華,等.巴戟天多糖及其水提物對體外培養成骨細胞活性的影響[J].中國組織工程研究與臨床康復,2007, 11(23):4570-4572.

[6]文鵬,趙梨,吳堅,等.活性維生素D3類藥物的研究進展[J].華西藥學雜志,2011,26(l):87-90.

[7]Wacker M,Holick MF.Vitamin D-effects on skeletal and extraskeletal health and the need for supplementation[J].Nutrients,2013,5(1): 111-148.

[8]Chen TC,Chimeh F,Lu Z,et al.Factors that influence the cutaneous synthesis and dietary sources of vitamin D[J].Arch Bio-chem Biophys,2007,460(2):213-217.

Protective and therapeutic effects of morindae officinails polysaccharides on osteoporosis of ovariectomized rats.

LIU Yi-heng1,WU Duo-qing1,ZHU Zhen-biao1,HUANG Zhong1,CHEN Xiao-hong1,ZHANG Hai-ying2.1. Depantment of Orthopaedics,Haikou Municipal People's Hospital,Haikou 570208,Hainan,CHINA;2.Department of Anatomy,Hainan Medical College,Haikou 571101,Hainan,CHINA

ObjectiveTo observe the protective and therapeutic effects of morindae officinails polysaccharides on osteoporosis of ovariectomized rats.MethodsThirty adult female SD rats were divided randomly into sham-operated group,model group,morindae officinails polysaccharides group.Every group had ten rats.We extracted bilateral ovaries to establish osteoporosis model,which were treated with medicine two weeks postoperationally for consecutively 3 months.Then we observed the protective and therapeutic effects of morindae officinails polysaccharides on rat bone mineral density(BMD),bone mineral content,estrogen,osteocalcin,1,25-dihydroxyvitamin D3. ResultsAfter 3 months,the morindae officinails polysaccharides group could significantly improve the BMD,bone mineral content,osteocalcin,1,25-dihydroxyvitamin D3 of the ovariectomized rats,compared with model group. ConclusionMorindae officinails polysaccharides can antagonize osteoporosis of the ovariectomized rats.

Osteoporosis;Ovariectomized rats;Morindae officinails polysaccharides

R-332

A

1003—6350（2014）20—2973—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.20.1170

2014-05-05)

海南省自然科學基金(編號：811156)；海南省衛生廳資助項目(編號：瓊衛2010-69)；?？谑兄攸c科技項目(編號：2011-0135)

劉亦恒。E-mail：1398345154@qq.com