連麥通淋顆粒中連翹苷的含量測定

宋 嵐，鄺 明，陳 菊

（1.瀘州醫學院附屬中醫院，四川 瀘州646000；2.四川省瀘州市食品藥品檢驗所，四川 瀘州646000）

連麥通淋顆粒由瞿麥、萹蓄、連翹、地黃、梔子、牡丹皮、川木通、車前子、蒲公英、白茅根等10味藥組方，具有清熱解毒、利濕通淋等作用，用于下焦濕熱所致急慢性腎盂腎炎、膀胱炎、尿道炎等泌尿系統感染。原標準僅對梔子的有效成分梔子苷、連翹的有效成分連翹苷進行了薄層鑒別。連翹苷為主藥連翹的主要有效成分，故以連翹苷作為測定指標，建立了測定連麥通淋顆粒中主要有效成分連翹苷含量的高效液相色譜法，以期為進一步完善該制劑的質量控制標準提供依據。

1 儀器與試藥

2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；2489型紫外/可見光檢測器；XS205DU型電子天平（梅特勒－托利多公司）；MJ－600型超聲波清洗儀（無錫市美潔超聲設備有限公司）。連翹苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110821－200711，供含量測定用，含量為98.9%）；連麥通淋顆粒（瀘州醫學院附屬中醫院，批號為20120628，20120629，20120727，20121018，20121211）；甲醇為色譜純(經0.45μm濾膜過濾)，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Waters C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈－水（20:80）；檢測波長：277nm；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10μL。理論板數按連翹苷峰計算應不低于3000。在此條件下，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取連翹苷對照品12mg，置200mL容量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。精密吸取對照品貯備液5mL，置10mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL含30μg的對照品溶液。取本品10袋，研細，取約2.0g，精密稱定，置錐形瓶中，用甲醇加熱回流2次，每次25mL，每次30min，濾過，殘渣及濾器用甲醇15mL分次洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘渣加稀乙醇10mL使溶解，加在中性氧化鋁柱（100～200目，3g，內徑為1cm）上，用稀乙醇70mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用50%甲醇溶解，轉移至25mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方取缺連翹的陰性樣品2.0g，按上述供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密吸取2.2項下3種溶液各10μL，按擬訂色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1。可見，在對照品溶液色譜主峰處，供試品溶液色譜具有相同保留時間的色譜峰，陰性對照品溶液色譜則無此峰，說明樣品中其他成分對連翹苷的測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密量取對照品貯備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，分別置10mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻。分別吸取上述溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值。以進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積積分值（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程Y＝6659X＋1406.6，r＝0.9997（n＝5）。結果表明，連翹苷進樣量在6～36μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，連續進樣5次。結果連翹苷峰面積的RSD為0.3%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液（批號為20121211），分別于0，1，3，6，10h時各進樣10μL，測定連翹苷峰面積。結果的RSD為0.4%（n＝5），表明供試品溶液在配制后10h內基本穩定。

重復性試驗：取同一批（批號為20121211）樣品，依法平行制備6份供試品溶液，依法測定。結果連翹苷的平均含量為8.00mg/g，RSD為1.0%（n＝6），表明方法重復性較好。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批（批號為20121211）樣品（含連翹苷8.05mg/g）6份，分別精密加入對照品貯備液適量，依法制備所需溶液，并按擬訂條件進行測定。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

按擬訂的含量測定方法測定5批樣品，以外標法計算樣品中連翹苷的含量。結果批號為20120628，20120629，20120727，20121018，20121211的樣品含量分別為3.857，3.621，3.158，3.255，3.567mg/g。

表1 連翹苷加樣回收試驗結果（n＝6）

3 討論

供試品溶液的制備時，比較了加熱回流法[2]、超聲提取法、甲醇加熱回流過中性氧化鋁柱用稀乙醇洗脫法[3]，結果顯示以甲醇加熱回流過中性氧化鋁柱用稀乙醇洗脫法效果最理想。對流動相的組成及比例進行了反復試驗，結果顯示以乙腈－水（20:80）為流動相[4]，分離效果較好。本方法操作簡便，結果準確，重現性好，可用于連麥通淋顆粒的質量控制。

參考文獻：

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[2]何春玲，丘明明.HPLC法測定病毒清口服液中連翹苷的含量[J].中國藥房，2012，23（15）：1413－1414.

[3]孔 濤，張月芹.高效液相色譜法測定芩蘭口服液中連翹苷的含量[J].中國藥業，2012，21（22）：52－53.

[4]雷建林，李艷桃，聶會生，等.HPLC法測定不同產地連翹藥材中連翹苷的含量[J].中華中醫藥學刊，2012，30（1）：202－204.