高效液相色譜法測定安神養(yǎng)血口服液中芒柄花素含量

（廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠，廣西 南寧530021）

安神養(yǎng)血口服液是由制何首烏、雞血藤、首烏藤等7味中藥經(jīng)提取精制而成，具有養(yǎng)血安神功效，臨床用于治療肝血不足引起的失眠、健忘等癥。方中的雞血藤主要成分為芒柄花素，為強(qiáng)壯性之補(bǔ)血藥，適用于貧血性神經(jīng)麻痹癥及婦女月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉等，有活血鎮(zhèn)痛之效[1]。方中雞血藤與制何首烏同為補(bǔ)血養(yǎng)血之藥，目前安神養(yǎng)血口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)缺乏對(duì)雞血藤的質(zhì)量控制。為完善和提高質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，本研究中建立了測定安神養(yǎng)血口服液中芒柄花素含量的高效液相色譜法。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters515型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；N2000型色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息工程研究所）；BP211D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；UV－2100型雙光束紫外－可見分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）。芒柄花素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號(hào)111703－200501）；安神養(yǎng)血口服液（廣西醫(yī)科大學(xué)制藥廠，批號(hào)分別為20100302，20110501，20120201，規(guī)格為每瓶30mL）；乙腈為色譜純，甲醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈－水（45:55）；流速：1.0mL/min；檢測波長：250nm；AUFS1.000；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：25℃。理論板數(shù)以芒柄花素計(jì)均不低于4000。

2.2 溶液制備

精密稱取芒柄花素對(duì)照品7.08mg，加甲醇溶解定容至100mL，搖勻，得對(duì)照品貯備液（質(zhì)量濃度為70.8μg/mL）。精密取對(duì)照品貯備液，加甲醇稀釋制成含芒柄花素7.08μg/mL的對(duì)照品溶液。取安神養(yǎng)血口服液5mL，加70%甲醇定容至25mL，濾過，取濾液，即得供試品溶液。除雞血藤外，按安神養(yǎng)血口服液的處方比例及制備工藝制成缺雞血藤的陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法操作，制得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取供試品溶液及對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)行色譜分析。結(jié)果芒柄花素出峰時(shí)間為6.76min，峰形尖銳、對(duì)稱、陡峭，無雜質(zhì)峰干擾，見圖1。

線性關(guān)系考察：精密吸取芒柄花素對(duì)照品貯備溶液，制成含芒柄花素質(zhì)量濃度分別為1.416，4.248，7.08，10.62，14.16μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別進(jìn)樣10μL，按擬訂色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝252423.2X＋516.6，r＝0.9999（n＝5）。結(jié)果表明，芒柄花素進(jìn)樣量在0.01416～0.1416μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣10次。結(jié)果的RSD為0.87%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密取同一批（批號(hào)為20110501）樣品5份，按擬訂方法測定。結(jié)果芒柄花素的含量為5.0μg/mL，RSD為1.28%(n＝5)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10μL，分別于0，6，12h時(shí)進(jìn)樣，測定其峰面積。結(jié)果的RSD為0.98%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密取已知含量的樣品（批號(hào)為20110501）5mL，分別精密加入對(duì)照品溶液（70.8μg/mL）各1mL，共5份，依法制備待測溶液，按擬訂色譜條件測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，按擬訂色譜條件操作，測定含量，結(jié)果批號(hào)為20100302，20110501，20120201的3批樣品中芒柄花素含量分別為4.5，5.0，3.8μg/mL。

3 討論

檢測波長選擇：取芒柄花素對(duì)照品溶液，于200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果芒柄花素在250nm波長處有最大吸收，故選擇檢測波長為250nm[2－4]。

圖1 高效液相色譜圖

表1 芒柄花素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

流動(dòng)相選擇：可選用甲醇與水的混合物或乙睛水作為流動(dòng)相[2－4]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用適當(dāng)比例的乙腈與水的混合物，更容易得到對(duì)稱的峰形。從樣品含量測定結(jié)果分析，3批樣品的芒柄花素含量差別較大，可能與雞血藤產(chǎn)地、采收季節(jié)及提取工藝有很大關(guān)系。文獻(xiàn)[2－4]報(bào)道了雞血藤中芒柄花素的不同提取方法，建議應(yīng)用本試驗(yàn)所建立方法控制安神養(yǎng)血口服液的質(zhì)量時(shí)，應(yīng)對(duì)生產(chǎn)中的提取工藝作進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊）[M].上海：上海人民出版社，1977：1206.

[2]鐘小群，李 艷，王麗靜，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選豐城雞血藤的提取工藝研究[J].中草藥，2009，40（7）：1066－1068.

[3]楊遁嘉，霍 昕，劉文煒，等.雞血藤顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中成藥，2009，31（1）：144－146.

[4]劉加元，周 偉.雞血藤片質(zhì)量控制研究[J].中外醫(yī)療，2011（15）：150－151.