浸潤性乳腺癌PTEN、p53、EGFR與ER、PR及HER-2表達的關系

湯永峰，馮曉敏，謝莉莉

（1.南通體臣衛生學校，江蘇南通 226007；2.南京市婦幼保健院病理科，江蘇南京 210004）

浸潤性乳腺癌PTEN、p53、EGFR與ER、PR及HER-2表達的關系

湯永峰1，馮曉敏1，謝莉莉2

（1.南通體臣衛生學校，江蘇南通 226007；2.南京市婦幼保健院病理科，江蘇南京 210004）

目的研究乳腺癌中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、表皮生長因子受體2(HER-2)與丟失性磷酸酶-張力蛋白基因(PTEN)、蛋白p53、表皮生長因子受體(EGFR)的關系。方法采用免疫組織化學S-P法檢測ER、PR、HER-2、PTEN、p53和EGFR在68例乳腺浸潤性癌和10例乳腺纖維腺瘤組織標本中的表達。結果ER、PR、HER-2、PTEN、p53和EGFR的表達分別是44.1%、47.1%、54.4%、45.6%、51.5%、58.8%，PTEN蛋白表達與ER呈正相關；p53蛋白表達與ER、PR表達呈負相關；EGFR的表達與ER呈負相關、與HER-2呈正相關。結論聯合檢測ER、PR、HER-2、PTEN、p53、EGFR對臨床上乳腺癌患者判斷預后和靶向治療有重要臨床意義。

乳腺癌；雌激素受體（ER）；表皮生長因子受體2；p53；表皮生長因子受體

乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一。據統計，全球每年有50萬婦女死于乳腺癌，在我國的一些大中城市乳腺癌的發病已呈上升趨勢，已成為威脅女性生命健康最常見的疾病。目前有關乳腺癌基因及一些相關因子的研究甚多，對于丟失性磷酸酶-張力蛋白基因(PTEN)、p53和表皮生長因子受體(EGFR)三種標志物的生物學作用的研究也較為廣泛，但是有關雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、表皮生長因子受體2(HER-2)、PTEN、p53和EGFR在乳腺癌中共同表達的研究較少。本研究采用免疫組化S-P法檢測68例浸潤性乳腺癌組織中PTEN、p53和EGFR蛋白的表達，分析它們與激素受體及癌基因HER-2的關系。

1 材料與方法

1.1 標本68例標本均由南通大學附屬醫院病理科提供的2004-2005年期間乳腺癌術后存檔石蠟標本，病理類型全部為乳腺浸潤性癌，所有病例術前均未進行任何放療、化療或激素治療。患者均為女性，年齡30～71歲，平均53.2歲；腫瘤直徑＜3 cm者39例，≥3 cm者29例；腋窩淋巴結轉移者32例，未見腋窩淋巴結轉移者36例；按組織學分級：Ⅰ級20例，Ⅱ級25例，Ⅲ級23例。根據TNM臨床分期Ⅰ期21例，Ⅱ期27例，Ⅲ期20例。其中46例有完整的隨訪資料，39例存活，7例死亡。隨機選取病理診斷為乳腺纖維腺瘤病理蠟塊10例為正常對照組，患者年齡19～44歲，平均36.5歲。

1.2 方法全部標本常規10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片。所用試劑均購自福州邁新生物技術有限公司，免疫組化采用SP法。

1.3 結果判斷免疫組化結果均采用參照文獻[1]的標準記分：即根據陽性細胞百分比以及陽性細胞染色強弱判斷免疫組化結果。(1)按細胞染色的強弱記分，無陽性反應細胞為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。(2)按陽性細胞百分比記分，陽性細胞數≤10%為0分，陽性細胞數11%～25%為1分，陽性細胞數26%～50%為2分，陽性細胞數＞50%為3分。根據兩項之和判斷其結果，如在同一病變中存在多個不同評分的視野，則取最大值和最小值的平均值作為免疫組化評分，＜2分判為陰性，2～6分判為陽性。

1.4 統計學方法采用STATA7.0軟件進行統計學分析，采用χ2檢驗及Spearman相關性分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ER、PR、HER-2、PTEN、p53和EGFR在乳腺癌中的表達情況68例乳腺癌組織中ER陽性30例(44.1%)，PR陽性32例(47.1%)，HER-2陽性37例(54.4%)，PTEN陽性31例(45.6%)，p53陽性35例(51.5%)，EGFR陽性40例(58.8%)。10例纖維腺瘤組織中PTEN、p53及EGFR的陽性表達率分別為100%、0、10%。3種基因蛋白在上述兩組表達的陽性率之間差異有統計學意義(P＜0.01)，見表1。

表1 PTEN、p53、EGFR在乳腺癌和乳腺纖維腺瘤中的表達(例)

2.2 PTEN蛋白表達與ER、PR、HER-2的關系PTEN蛋白的表達與組織學分級、腋窩淋巴結轉移情況、ER狀態有關，而與發病年齡、腫瘤大小、臨床分期、PR、HER-2無關。在ER陽性組中，PTEN蛋白的陽性率為60%(18/30)，在ER陰性組中，PTEN蛋白的陽性率為34.2%(13/38)，組間差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 PTEN蛋白表達與ER、PR、HER-2的關系(例)

2.3 p53蛋白表達與ER、PR、HER-2的關系p53蛋白在乳腺癌中的表達與組織學分級、腋窩淋巴結轉移情況、ER、PR狀態有關，與發病年齡、腫瘤大小、臨床分期、癌基因HER-2無關。在ER陰性組中p53蛋白的陽性率為63.2%(24/38)，明顯高于ER陽性組中陽性率[36.7%(11/30)]，組間差異有統計學意義(P＜0.05)；在PR陰性組的p53蛋白陽性率為66.7%(24/36)，明顯高于PR陽性組中的陽性率[34.4%(11/32)]，組間差異有統計學意義(P＜0.01)，見表3。

表3 p53蛋白表達與ER、PR、HER-2的關系(例)

2.4 EGFR蛋白表達與ER、PR、HER-2的關系EGFR蛋白的表達與乳腺癌組織學分級、腋窩淋巴結轉移情況、ER狀態、HER-2有關，而與發病年齡、腫瘤大小、臨床分期、PR無關。EGFR在ER陰性組陽性率為71.1%(27/38)，明顯高于ER陽性組的陽性率[43.3%(13/30)]，差異有統計學意義(P＜0.05)；在癌基因HER-2陽性組中，EGFR陽性率為70.3%(26/37)，明顯高于陰性組中EGFR陽性率[45.2%(14/31)]，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表4。

表4 EGFR蛋白表達與ER、PR、HER-2的關系(例)

3 討論

3.1 PTEN在乳腺癌中的表達與激素受體關系PTEN又稱MMACI或TEPI，是1997年由美國三個實驗室先后發現的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，定位于染色體10q23，全長約20 kb，含9個外顯子和8個內含子，其cDNA共有1 209個核昔酸，編碼403個氨基酸殘基組成的蛋白[2]。PTEN蛋白在乳腺癌中的表達缺失率為27.3%～60.0%[3-4]。Depowski等[5]認為PTEN蛋白的低表達是乳腺癌常見的分子事件，而且PTEN蛋白表達缺失與不利的預后因素包括雌孕激素受體陰性、淋巴結轉移，以及與乳腺癌存活率明顯相關，即PTEN蛋白表達缺失常常與乳腺癌預后不良相聯系。研究認為PTEN蛋白表達與ER呈正相關，且PTEN和ER同時陽性表達的乳腺癌患者預后較好[6-7]。Bose等[2]的實驗發現PTEN的雜合性丟失與ER表達的缺失高度相關，認為PTEN蛋白下降表達與ER失表達密切相關，而與PR無關。Shoman等[7]的研究也表明在ER陽性乳腺癌中PTEN表達的下調與抗雌激素抵抗之間有非常密切的聯系。本研究結果顯示：ER陽性組PTEN陽性率高于ER陰性組，差異有統計學意義(P＜0.05)，提示PTEN表達與ER呈正相關，而與PR、HER-2的表達無關，與上述報道一致。我們推測在乳腺癌的進展和轉移過程中，PTEN基因的10q23區的某種特異基因改變或PTEN蛋白的表達缺失與雌激素失調之間存在著一定的相關性。而最近有研究發現AKT激活與PTEN基因的缺失或者HER-2過表達高度正相關，并且與PR呈負相關，認為PTEN基因缺失和HER-2過表達同時出現加強了AKT活性，可能導致PR陰性表達[8]。

3.2 p53 在乳腺癌中的表達與激素受體關系p53基因是人類腫瘤中最頻繁突變的抑癌基因，人類p53基因定位于17號染色體短臂1區3.1帶(17p13.1)，全長16～20 kb，基因組有11個外顯子、10個內含子，轉錄產生的mRNA約2.5 kb。Van't Veer等[9]認為p53基因突變與表達在乳腺癌早期階段已發生。且隨著分級的提高，突變型p53蛋白的表達量也增加。國內[10]也有研究發現突變型p53在良性病變未見陽性表達，隨著癌變動態過程(乳腺正常組織-良性增生-原位癌-早期浸潤癌-浸潤性導管癌)突變型p53的表達在逐漸升高，說明細胞周期調控因子p53基因突變參與了乳腺癌的發生與發展過程，可能是正常乳腺組織癌變的一個早期分子事件。本研究結果顯示：乳腺癌中p53表達在ER、PR陰性組陽性率明顯高于陽性組，差異有統計學意義(P＜0.05)，提示p53蛋白表達與ER、PR表達呈負相關，與文獻[11]報道一致，推測由于雌激素和孕激素通過活化p53基因而減少乳腺癌發生，p53一旦突變后，雌激素和孕激素則加速乳腺癌發生。而Bourdon等[12]認為野生型p53可通過Scotin-ER途徑完成促細胞凋亡過程，所以突變型p53過度表達則意味著ER、PR可能同時喪失了受體活性，導致細胞凋亡過程受抑制并逐步向細胞惡性增殖演變。我們認為乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，雌激素作為刺激乳腺組織分裂增殖的重要因子，在乳腺癌發生發展過程中扮演重要角色。因此乳腺癌中p53蛋白與ER、PR的同時檢測對判斷預后、指導內分泌治療具有一定的指導意義。有關p53表達與HER-2的關系，文獻[13-14]報道兩者在乳腺癌中的表達呈正相關，Bull等[13]的實驗觀察同時有HER-2擴增和p53突變時，乳腺癌患者復發和死亡危險性增高，它們的共同表達有較高的預后價值。本實驗結果顯示：p53蛋白表達與HER-2無關(P＞0.05)，這可能與實驗條件、實驗方法的不同以及判斷陽性標準的不同有關。

3.3 EGFR在乳腺癌中的表達與激素受體關系EGFR是原癌基因C-erbB-1的表達產物，其基因定位于人類第七號染色體短臂上(7p13-p12)，它是含有1 186個氨基酸的跨膜糖蛋白，分子量為170 kD，具有酪氨酸激酶活性，是一種跨膜分布的細胞表面傳感器。其結構由細胞外區、跨膜區和細胞內區三部分組成：細胞外區為受體部位，由621個氨基酸殘基組成；跨膜區由23個氨基酸組成；細胞內區由542個氨基酸組成[15]。多數研究者認為EGFR表達與ER、PR呈負相關[16]，與癌基因HER-2表達呈正相關[17-18]。本實驗結果為：乳腺癌中EGFR陽性率在ER陰性組為71.1%，明顯高于ER陽性組(43.3%)，兩者比較差異有統計學意義(P＜0.05)，顯示EGFR的表達與ER呈負相關，與上述報道一致。推測EGFR在癌細胞內的活化參與了對ER功能狀態的抑制，最終導致其激素依賴性消失，說明EGFR過度表達的乳腺癌其發生、發展可能不依賴女性性激素，因此對化療及內分泌治療療效差、預后不佳。實驗結果還顯示EGFR陽性率在HER-2陽性組明顯高于陰性組，組間差異有統計學意義(P＜0.05)，表明兩者表達呈正相關。Park等[17]的研究表明在HER-2基因擴增的乳腺癌組織中EGFR的蛋白表達也顯著增加，認為EGFR在乳腺癌中的表達與原癌基因HER-2的表達高度正相關。HER-2作為乳腺癌預后判斷的一項獨立因子也已經基本被公認。我們認為HER-2基因與EGFR同屬表皮生長因子家族，它們具有同源性，均編碼具有酪氨酸激酶活性的細胞膜糖蛋白，因而EGFR和HER-2可能共同參與腫瘤細胞的生長、增殖，兩者在乳腺癌的發生發展中起協同作用。

綜上所述，腫瘤的發生發展是一個多因素、多階段的過程，聯合檢測ER、PR、HER-2、PTEN、p53、EGFR對臨床上乳腺癌患者判斷預后和靶向治療有重要臨床意義。

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Expression of PTEN,p53,EGFR,ER,PR and HER-2 in invasive breast cancer.

TANG Yong-feng1,FENG Xiao-min1,XIE Li-li2.1.Nantong Tichen Health School,Nantong 226007,Jiangsu,CHINA;2.Department of Pathology,Nanjing Maternity and Child Health Care Hospital,Nanjing 210004,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo evaluate the expression and significance of estrogen receptor(ER),progesterone receptor(PR),human epidermal growth factor receptor 2(HER-2),phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten(PTEN),protein 53(p53)and epithelial growth factor receptor(EGFR)in the invasive breast cancer. MethodsS-P immunohistochemistry was used to detect the expression of ER,PR,HER-2,PTEN,p53 and EGFR in 68 cases of breast cancer and 10 cases of breast fibroadenoma.ResultsThe expression rate of ER,PR,HER-2, PTEN,p53 and EGFR were 44.1%,47.1%,54.4%,45.6%,51.5%and 58.8%,respectively.The expression of PTEN was positively correlated with the expression of ER,and the expression of p53 was negatively correlated with the expression of ER and PR.EGFR expression was negatively correlated with ER expression,while positively correlated with HER-2 expression.ConclusionThe combined detection of ER,PR HER-2,PTEN,p53,EGFR could indicate the prognosis of breast cancer,which plays an important role in individual treatment.

Breast cancer;Estrogen receptor(ER);Human epidermal growth factor receptor 2(HER-2);Protein 53(p53);Epithelial growth factor receptor(EGFR)

R737.9

A

1003—6350（2014）05—0630—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.05.0247

2013-08-10)

謝莉莉。E-mail：nantongxielili@sina.com