人軟骨降解標志物尿Ⅱ型膠原羧基段多肽（CTX-Ⅱ）與腰椎間盤突出癥及其中醫證型的相關性研究

傅永波 季衛鋒 馬鎮川

（1.浙江中醫藥大學，浙江 杭州 310053；2.浙江中醫藥大學附屬第一醫院，浙江 杭州 310006）

人軟骨降解標志物尿Ⅱ型膠原羧基段多肽（CTX-Ⅱ）與腰椎間盤突出癥及其中醫證型的相關性研究

傅永波1季衛鋒2馬鎮川2

（1.浙江中醫藥大學，浙江 杭州 310053；2.浙江中醫藥大學附屬第一醫院，浙江 杭州 310006）

目的分析尿中尿Ⅱ型膠原羧基段多肽（CTX-Ⅱ）水平與患者腰椎間盤突出癥的關系。方法隨機納入20～60歲的腰椎間盤突出癥患者40例，健康體檢患者20例，收集留取患者尿樣，用人骨退化特異標志物（CTX-Ⅱ）ELISA試劑盒測定尿液中的CTX-Ⅱ值，然后對所得數據進行整理和分析。結果椎間盤突出患者中存在顯著差異（P＜0.05），其尿中Ⅱ型膠原C端肽明顯升高。青壯年患者尿中CTX-Ⅱ水平均較中老年患者尿中CTX-Ⅱ水平高，血瘀型患者和濕熱型患者尿中CTX-Ⅱ水平較肝腎虧虛型患者尿中CTX-Ⅱ水平高（P＜0.05），而其他各組間無統計學意義。結論尿中CTX-Ⅱ水平的升高與腰椎間盤突出癥的發生具有正相關性，尿中CTX-Ⅱ水平青壯年人群較中老年人群高，血瘀型患者和濕熱型患者較肝腎虧虛型患者高。

軟骨降解標志物 腰椎間盤突出 中醫證型 Ⅱ型膠原羧基段多肽

腰椎間盤退變性疾病病理特點主要是椎間盤組織含水量的下降以及軟骨終板的退變，從而導致椎間盤纖維環破裂，髓核突出［1-2］。目前，主要依靠臨床表現（如疼痛、感覺減退、活動受限等）、放射影像來診斷腰椎間盤突出癥。但是X線、CT及臨床體征對軟骨退變的敏感性較低，而MRI雖然能早期診斷腰椎間盤退變［3-4］，但由于價格比較昂貴，很難以普及和臨床應用。有研究表明，尿Ⅱ型膠原羧基段多肽（CTX-Ⅱ）能早期預測關節軟骨破壞進展的情況［5］，在椎間盤退變發生后，患者尿液中CTX-Ⅱ水平也有顯著升高［6］。另有表明頸椎不穩可誘發鄰近節段頸椎退變，表現為椎間盤發生形態學變化，蛋白多糖、Ⅱ型膠原含量下降［7］。說明尿中CTX-Ⅱ水平與椎間盤退變具有正相關性，為早期預防和診斷腰椎間盤退行性疾病提供有力證據。

中醫學認為腰椎間盤退變性疾病屬 “痹證”、“痿證”等范疇。“氣虛血瘀”、“本虛標實”是椎間盤退變的重要病理基礎。目前《中醫病證診斷療效標準》將其分為血瘀型、寒濕型、濕熱型、肝腎虧虛4型。臨床上以血瘀型和肝腎虧虛型最為多見，通過探究中醫證型和CTX-Ⅱ的關系，尋找防治腰椎間盤退變性疾病的新思路和新方法。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 研究對象為浙江省中醫院骨科病房的40例腰椎間盤突出癥患者和體檢中心20例健康人群，均無其他骨骼系統疾病。分別確定為A組和B組，同時根據中醫辨證分析。A組男性22例，女性18例，其中20～39歲21例，40～60歲19例，中位年齡39.3歲。分型：血瘀型16例，寒濕型5例，濕熱型8例，肝腎虧虛型11例。B組男性11例，女性9例；年齡20～39歲11例，40～60歲9例，中位年齡41.00歲。A、B兩組患者年齡、性別差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 尿樣收集 收集兩組患者晨尿10 mL，密封保存于-20℃冰箱。

1.3 檢測方法 采用人骨退化特異標志物（CTX-Ⅱ）ELISA試劑盒，將稀釋離心后的檢測液與底物溶液反應，最后加入終止溶液，用酶聯儀在450 nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。底物溶液：四甲基聯苯胺（TMB）底物溶于酸性溶液中。終止液：2NH2SO4。

1.4 統計學處理 根據樣品的OD值，繪出標準曲線（使用專業制作曲線軟件curve expert 1.3進行分析），測定結果用SPSS 17進行數據處理，將兩組患者的CTX-Ⅱ校正值進行方差齊性檢驗、正態性分布后，再將組與組之間的單樣本作方差分析，并分別對腰椎間盤突出癥患者的年齡、性別及中醫證型與尿中CTX-Ⅱ進行回歸分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者尿液中CTX-Ⅱ測定結果 見表1。A組20～39歲，年齡段患者尿CTX-Ⅱ值高于40～60歲年齡段患者（P＜0.05）；B組不同年齡段CTX-Ⅱ值差異有統計學意義（P＜0.05）；A組、B組相同年齡段CTX-Ⅱ值差異有統計學意義（P＜0.05）。由此可知，A組尿中CTX-Ⅱ水平較同一年齡段的B組尿中CTX-Ⅱ水平高；同一組別中青壯年人群尿中CTX-Ⅱ含量較中老年者尿中CTX-Ⅱ含量高。

表1 兩組不同年齡段尿中的CTX-Ⅱ值測定結果（g/moL，±s）

表1 兩組不同年齡段尿中的CTX-Ⅱ值測定結果（g/moL，±s）

與本組40～60歲比較，*P＜0.05；與B組同年齡段比較，△P＜0.05。

組 別 年齡（歲）n 尿CTX-ⅡA組 20～39 40～60 B組 20～39 21 55.5±10.3*△19 39.1±6.6△11 43.3±10.0*△40～609 32.2±7.6△

2.2 不同中醫證型患者尿液中CTX-Ⅱ值結果 見表2。血瘀型組和寒濕型組差異有統計學意義（P＜0.05）；血瘀型組和濕熱型組差異無統計學意義（P＞0.05）；血瘀型組和肝腎虧虛型組差異有統計學意義（P＜0.05）；寒濕型組和濕熱型組差異無統計學意義（P＞0.05）；寒濕型組和肝腎虧虛型組差異無統計學意義（P＞0.05）；濕熱型組和肝腎虧虛型組差異有統計學意義（P＜0.05）。由此得出，血瘀型患者尿中CTX-Ⅱ水平較寒濕型、肝腎虧虛型患者高，濕熱型患者尿中CTX-Ⅱ水平也較肝腎虧虛型患者高，其他各組間無統計學差異。

表2 不同證型患者尿中CTX-Ⅱ值測定結果（g/moL，±s）

表2 不同證型患者尿中CTX-Ⅱ值測定結果（g/moL，±s）

與寒濕型比較，△P＜0.05；與血瘀型比較，▲P＜0.05；與濕熱型比較，#P＜0.05。

證型n 尿CTX-Ⅱ血瘀型寒濕型濕熱型16 56.1±10.1△5 39.6±7.6▲8 48.9±11.8肝腎虧虛型11 38.3±6.7▲#

3 討論

自Eyre等在1987年首次發現CTX-Ⅱ后，一直是以生物標記物的形式，研究軟骨退變變性疾病［8］。近年許多學者也都將對CTX-Ⅱ的研究重點放在骨性關節炎上，而對椎間盤突出癥的相關性研究相對較少，但椎間盤作為軟骨的一部分，主要成分就是Ⅰ、Ⅱ型膠原，Ⅰ、Ⅱ型膠原之間的比例失調，是椎間盤退變最直接的原因。近來的一些研究也顯示，腰椎間盤退變的患者中往往都存在尿中CTX-Ⅱ水平的升高。因為椎間盤變性后，Ⅱ型膠原不斷降解，降解后產物隨尿液排出體外。所以尿中的CTX-Ⅱ水平健康人群都低于腰椎間盤突出的患者，這與本試驗的結果相符。在青壯年的時候，由于組織代謝活躍，細胞的凋零和重生能力較快，即生活條件及自身體質的改變很容易導致椎間盤發生退行改變，整個椎間盤的Ⅰ型膠原正比例上升，Ⅱ型膠原降解迅速，故青壯年時期尿中CTX-Ⅱ水平越高，這與本試驗的結果是一致的，即20～40歲人群的尿中CTX-Ⅱ水平較40～60歲人群尿中的CTX-Ⅱ高。

中醫對腰椎間盤突出很早就有認識。如《素問·刺腰痛》篇中說“衡絡之脈令人腰痛，不可以俯仰，仰則恐仆，得之舉重傷腰”，《醫學心悟》也說“腰痛拘急，牽引腿足”。目前，對腰椎間盤突出癥的中醫分型較多，大多從“氣血”、“虛實”進行辨證。但較為多見的是血瘀型、寒濕型、濕熱型、肝腎虧虛4型。有研究表明，益氣化瘀法能夠使退變的椎間盤高度明顯增加，防止纖維環撕裂，增加膠原聯系，減少裂隙，防止軟骨終板非鈣化層膠原基質排列紊亂［9］。益氣化瘀法還能降低軟骨終板膠原表達，增加椎間盤髓核細胞外基質中Ⅱ型膠原的蛋白表達，其機制是促進Ⅱ型膠原基因轉錄過程中一些酶的作用，開啟了Ⅱ型膠原合成的基因表達。即血瘀證腰突癥患者，其Ⅱ型膠原的降解可能較其他證型劇烈，此類患者尿中的CTX-Ⅱ水平較其他證型尿中CTX-Ⅱ水平高，與本實驗的結果基本相符。

綜上所述，尿中CTX-Ⅱ水平的升高與腰椎間盤突出癥的發生具有相關性，且青壯年尿中CTX-Ⅱ水平較中老年者尿中CTX-Ⅱ水平高。血瘀型患者尿中CTX-Ⅱ水平較寒濕型、肝腎虧虛型患者高，濕熱型患者尿中CTX-Ⅱ水平也較肝腎虧虛型患者高，其他各組間無明顯差異。但因樣本基數較小，且受到諸多因素的影響，故中醫證型之間對尿中CTX-Ⅱ水平的影響關系及機制仍有待進一步的研究。而另一方面，通過尿常規檢測CTX-Ⅱ來達到早期診斷腰椎間盤突出癥的情況，將理論運用于臨床實踐還是一個漫長的過程。

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2013-12-08）