紅外分光光度法鑒別阿苯達唑原料

章安源 張志民 李淑花 劉道中 （山東省獸藥質量檢驗所 濟南 250012）

紅外分光光度法鑒別阿苯達唑原料

章安源 張志民 李淑花 劉道中 （山東省獸藥質量檢驗所 濟南 250012）

本研究建立了阿苯達唑快速、專屬的鑒別方法。分別采用直接檢測樣品法和以乙醇為溶劑進行提取法，進行紅外鑒別。作精密度和比對分析。乙醇提取法在含量測定、與標準圖譜相似度較直接監測樣品法有統計學差異(P＜0.05)。結果表明，本法專屬性好，可準確地鑒別本品。

紅外分光光度法 阿苯達唑 溴化鉀

阿苯達唑(abendazuo)為抗蠕蟲藥，對于其原料藥鑒別方法為一般的化學反應和紅外吸收圖譜。而紅外吸收光譜是有機化合物的重要特征之一，具有高 度的專屬性和特異性，是藥品檢驗中鑒別有機藥物的重要方法。“英國藥典2009凡例Ⅱ[1]中說明當紅外鑒別用于需要一定預處理樣品時，有可能無法達到嚴格一致，此時樣品光譜需與對照光譜大致相同”。為快速有效地鑒別阿苯達唑原料藥，本文研究了用兩種不同方法處理阿苯達唑，對兩種方法作一定的評價。

1 材料和方法

1.1 儀器與試藥 傅立葉65紅外分光光度儀(美國PE公司)、UV-2550紫外分光光度計(日本島津公司)、BT125D電子天平(美國賽多利斯公司)。阿苯達唑對照品(中國藥品生物制品檢定所、批號100373-200502，純度100.0%)、阿苯達唑原料(常州亞邦齊暉醫藥化工有限公司，批號60118327、60112471、60112017)，無水乙醇、溴化鉀均為分析純。

1.2 方法 （1）直接制備對照品片及供試品(簡稱方法1)：將溴化鉀在120℃干燥5h后，取溴化鉀約300mg，置瑪瑙研缽中研細，壓片，作為溴化鉀空白片。目測，空白片呈透明狀，上機后譜圖顯示基線透光率大于75%。取阿苯達唑對照品與樣品各約0.5mg，分別與經干燥的溴化鉀約70mg，置瑪瑙研缽中混合，研細后壓片，制得對照品，供試品。上機后，扣除空白片背景后，光譜圖顯示基線透光率大于80%。制備的對照品和供試品透光率均符合紅外圖譜要求。（2）處理后制備對照品片及供試品(簡稱方法2)：根據阿苯達唑在丙酮中微溶，在乙醇中幾乎不溶，在水中不溶的性質，選擇以無水乙醇溶解[2]。取對照品和供試品適量，分別溶于無水乙醇中，研磨使溶解，濾過，濾液置水浴上蒸干后，105℃干燥1h后[3,4]，取殘渣，滴加1ml左右液狀石蠟，置研缽中研成均勻的糊狀物，取適量糊狀物均勻涂抹與兩個空白溴化鉀片之間，制得對照品和供試品。二者的光譜圖顯示基線透光率大于80%。符合檢測要求。

1.3 統計學分析 采用spss10.0統計軟件，檢測數據以x±S表示，兩種方法比較用t檢驗，以P＜0.05為差異顯著。

2 結果

2.1 精密度試驗 對照品和供試品各3批，每批進行2個樣品平行試驗，同一天不同時間、不同天重復3次，所得紅外譜線基本一致[5]。

2.2 穩定性試驗 取對照品和供試品各3批，放入干燥器，每隔1h測定1次，12h內所得所得紅外圖譜基本一致。

2.3 重復性試驗 取對照品和供試品按每批進行2個樣品平行試驗，連續測定3批，重復3次。所得紅外譜線基本一致。

2.4 樣品的含量測定 取兩種方法制下制備合格的對照品和供試品，按《中國獸藥典》紫外-可見分光法測定阿苯達唑含量，所有對照品和供試品含量均合格，符合紅外光譜測定的要求。（1）對照品和供試品分別用兩種不同的處理方法(方法1和方法2)連續進行18次盲測，經t檢驗分析，結果表明兩種不同方法測定對照品的含量值之間無統計學差異(P＞0.05)；不同方法測定供試品的含量值之間的總體差異有統計學意義(P＜0.05)。結果見表1。

表1 二種不同前處理方法測定含量(±S) (%)

表1 二種不同前處理方法測定含量(±S) (%)

注：*P＜0.05，下表類同。

測試方法 對照品 供試品方法1 99.9±0.10 99.2±0.05方法2 100.0±0.01 99.4±0.26*

2.5 對照品和供試品紅外圖譜測定 經過計算機對多次測定得到的對照品和供試品紅外圖譜進行平均化處理，作為紅外標準圖譜[6]，見圖1、2、3、4、5。

圖1 對照品(方法1)

圖2 供試品(方法1)

圖3 對照品(方法2)

圖4 供試品(方法2)

圖5 阿苯達唑標準圖譜(獸藥典)

2.6 數據處理 標準化后的對照品和供試品圖譜與2010版《獸藥典》提供的阿苯達唑標準圖譜進行比較。計算機自動計算其相似度，相似度最低限的閾值為90%.0[6]。這些數據可以作為評價方法1和方法2是否對紅外圖譜有影響。經t檢驗分析，結果表明兩種不同前處理后測得的對照品圖譜與標注圖譜之間差異不顯著(P＞0.05)；兩種不同方法處理的供試品圖譜與標準圖譜之間差異顯著(P＜0.05)。結果見表2。

表2 兩種不同前處理方法后的譜線比對試驗(x±S) (%)

3 討論

（1）精密度反映實驗結果的重現性，其中批內精密度反映的同1份標本在一天內使用同一試劑不同時間點檢測結果的重現性，批間精密度反映的是同1份標本在不同天內檢測結果的重現性，二者都對實驗室結果常規檢測質量的評價有重要影響[5]。本試驗設計對照品和供試品分別檢測3批，每批2個平行樣品，重復3次，從結果表2中可以看出，本試驗對兩種不同方法處理過的對照品和供試品的圖譜相似度的批內、批間CV均小于5%，重復性好，兩種方法總體間CV符合情況很好，可以滿足紅外圖譜測定要求；可能是方法2前處理包括藥品的提純及干燥去水的過程，而且制片為非傳統的石蠟糊法制片，因而檢測的重復性好，從而可以大大提高紅外檢測的靈敏度和分析的特異性。是一種較理想的測定方法。從表1和表2結果顯示方法2處理過的供試品無論是含量還是與標注圖譜的相似度兩個指標都較方法1差異顯著(P＜0.05)。（2）紅外分光光度法已廣泛應用于藥物的定性鑒別中。而光譜圖的質量很大程度上取決于樣品的制備。對于原料藥可直接取樣壓片，但如果測得的光譜圖與《藥品紅外光譜集》所收載的對照圖譜不一致時，在排除可能影響測定的外在因素后，可按該藥物光譜圖中備注的方法或藥品標準中該品種項下規定的方法進行預處理后，再錄制光譜圖與對照圖譜比對[7]。本試驗對分析得到的阿苯達唑圖譜與獸藥典提供的標準圖譜進行了對比，阿苯達唑供試品未經處理(方法1)直接壓片后得出的紅外圖譜與《獸藥紅外光譜集》所收載的標準圖譜在1380cm-1處的吸收峰有差異，與標準圖譜比較相似度在91%左右。分子的紅外光譜是發生紅移還是藍移，是多種因素綜合作用的結果[8]。目前由多晶型藥物引起紅外光譜的差異占全部晶型藥物的數量還很有限[9]。丙酮作粉碎或分散促進劑情況下，往往會加速晶型轉變[10]，多晶型的變化會導致紅外光譜的差異，因此，當紅外光譜不一致時，首先應考慮樣品的純度是否符合要求，不純的樣品雜質檢出率有時可低至1%[11]。所以本試驗設計乙醇提取后既能提取有效成份，也可能除去了絕大部分的輔料，而且去掉部分輔料，供試品的純度較高，結果顯示供試品圖譜的相似度較方法1有提高(P＜0.05)。（3）另外水分的存在也會使紅外譜圖失真，也應考慮采取有效的方法去除水分的干擾。無論是原料藥還是制劑的提取物，對于非揮發性或熔點較高(105℃以上)的樣品在壓片前均應進行干燥處理[12]。阿苯達唑的熔點在206～212℃，所以經過溶劑提取后作者又根據供試品自身的理化性質采用了105℃，時間在1h。（4）雖然在粉劑樣品制樣中，壓片法是最優先選用的方法，但易受潮或空氣而產生化學反應，重現性差，用方法2處理過的樣品是使用的石蠟糊法，試驗的穩定性良好[13]，這是因為石蠟里的油質能包裹住研磨好的粉狀樣品的顆粒表面，樣品如糊狀平鋪于兩塊空白溴化鉀空白片之間，能夠對樣品形成保護的外環境，容易得到穩定不變的紅外光譜圖。（5）經過方法2處理后的對照品和供試品，測得的紅外譜線，與標準圖譜進行比較，供試品圖譜與標注圖譜相似度均在 93.0% 左右，并且特征峰明顯，重現性好。證明了應用紅外鑒別阿苯達唑原料的可行性。因此推斷，輔料和水分均有可能干擾阿苯達唑的紅外分光光度法測定。

由圖可見，經過處理(方法2)過的阿苯達唑供試品與《獸藥紅外光譜集》所收載的標準圖譜大體一致。因此，本法可作為阿苯達唑原料的鑒別方法之一，省時，準確。從而更好地為檢測紅外的任務服務。

[1] 于大海, 蘇佳妍. 關于英國藥典中制劑的紅外光譜鑒別方法的討論[J]. 藥物分析雜質, 2011(4)∶ 31.

[2] 中國獸藥典委員會. 中國獸藥典[S]. 北京∶中國農業出版社. 2010∶113.

[3] 呂紅. 紅外分光光度法鑒別貝諾酯片[J]. 黑龍江醫藥, 2008(5)∶ 21.

[4] 葛曉瑩, 余振喜, 楊敏智. 紅外分光光度法鑒別鹽酸二甲雙胍片和鹽酸乙胺丁醇片[J]. 中國藥師. 2012(1)∶ 15.

[5] 譚愛華.ELISA法檢測中應注意的問題[J]. 應用醫技雜志. 2008(19), 15.

[6] 馬欣, 李洪宇, 張麗華. 中藥柴胡與其偽品的紅外鑒別[J]. 北華大學學報(自然科學版). 2012(2)∶ 13.

[7] 李夏林. 紅外分光光度法在藥品鑒別試驗中的制樣技術分析[J].北方藥學. 2011(5)∶ 8.

[8] 李莉娟, 孫鳳久, 樓丹花等.納米氧化鋁的晶型及粒度對其紅外光譜的影響[J]. 功能材料, 2007(38)∶ 3

[9] 李志萬.藥物晶型的分析方法[J]． 中國獸藥雜志, 2006(1)∶ 40.

[10] 殷萌, 楊鋒, 張欣榮等. 藥物多晶型的研究現狀[J]．藥學實踐雜志, 2008(3)∶ 26.

[11] 李榮生, 王玉, 黃朝瑜等. 藥品紅外光譜鑒別中常見問題及分析[J]. 中國藥品標準, 2012(5)∶ 13.

[12] 侯鵬高, 呂長淮. 紅外光譜法在藥物制劑鑒別中的應用研究進展[J]. 中國醫院藥學雜志. 2013(8)∶ 33.

[13] 劉軍. 紅外光譜法在藥物鑒別中的應用[J]. 天津藥學. 1995(2). 7.

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1007-1733(2014)04-0005-03

2013–12–23）