長效乳酸環丙沙星注射液的急性毒性試驗和安全評價

黃迪海 張從敬 劉 霞 徐秀榮 盛曉丹 陳宗靜 秦卓明③*（①山東省健牧生物藥業有限公司 濟南 250100 ②濟南市動物生物藥品工程技術研究中心 濟南③山東省農業科學院家禽研究所 濟南)

長效乳酸環丙沙星注射液的急性毒性試驗和安全評價

黃迪海①②張從敬①②劉 霞①②徐秀榮①②盛曉丹①②陳宗靜①②秦卓明①②③*（①山東省健牧生物藥業有限公司 濟南 250100 ②濟南市動物生物藥品工程技術研究中心 濟南③山東省農業科學院家禽研究所 濟南)

通過對昆明小鼠肌肉注射和皮下注射緩釋長效乳酸環丙沙星注射液，對其急性毒性進行評價。結果表明：小鼠肌肉注射及皮下注射給藥的LD50分別為839.27mg/kg、2504.38mg/kg，95%的可信限分別為750.76mg/kg～938.21mg/kg、1976.97mg/kg～3172.49mg/kg，符合低毒標準，說明該產品皮下注射和肌肉注射使用安全。

長效 乳酸環丙沙星 急性毒性

乳酸環丙沙星(Ciprofloxacin Lactate)是第三類人工合成喹諾酮類抗菌藥，具有廣譜抗菌活性，廣泛應用于畜牧養殖，主要用于大腸桿菌、沙門氏菌、克雷伯氏桿菌、巴氏桿菌及金黃色葡萄球菌等致病菌感染。獸醫臨床正在使用的乳酸環丙沙星注射液是其傳統制劑，肌肉注射吸收迅速而完全，生物利用度豬為91.9%，奶牛為82%，半衰期奶牛為5.9h，豬為4.6h[1]，主要存在藥物有效濃度維持時間短、使用次數多、大家畜不易注射等問題。為解決上述問題，我們利用骨架緩釋技術研制出其新型緩釋長效制劑，具有延長藥物作用時間、降低毒副作用、節約人力成本等優點。為研究緩釋長效乳酸環丙沙星注射液的急性毒性和安全性，進行了該試驗，以期為其在獸醫臨床上的開發和應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗藥品 長效乳酸環丙沙星注射液，規格10ml：0.4g，由山東省健牧生物藥業有限公司提供，批號：20111101、20111102、20111103。

1.2 試驗動物 清潔級昆明種健康小鼠，6～8周齡，體重18～22g，雌雄各半，購自山東大學實驗動物中心。試驗期間小鼠雌雄分籠，全價飼料喂養，室溫20～25℃，相對濕度40%～70%，人工晝夜(12h白晝，12h黑夜)。

1.3 試驗方法 取小鼠100只隨機分成10組，每組10只，雌雄各半，1～5組皮下注射給藥，6～10組肌肉注射給藥。在預試驗的基礎上確定各組小鼠用藥量，按改良寇氏法設置組間劑量比r1(皮下注射)為1∶0.71，r2(肌肉注射)為1∶0.84。1～5組用藥劑量分別為4800.00、3600.00、2700.00、2025.00、1518.75mg/kg；6～10組用藥劑量分別為1000.00、840.00、705.60、592.70、497.87mg/kg。用生理鹽水將藥物溶解至合適的濃度，并分別按0.2ml/10g體重、0.1ml/10g體重皮下注射和肌肉注射。

1.4 觀察指標 給藥后，即刻觀察動物外觀體征、飲食、行為活動及動物死亡情況，連續觀察7d并記錄觀察結果。對死亡動物進行病理剖檢，記錄病變情況。

1.5 結果計算 用改進寇氏法計算半數致死量(LD50)及其95%可信區間。公式[2]：LD50=lg-1[Xm-i(∑p-0.5)] (1)，LD50的95%可信限Sx50) (3)。式中，Xm為最大劑量的對數值；i為相鄰兩組劑量對數值之差；p為各組的死亡率，用小數表示；q為各劑量組存活率，q=1-p；∑p為各組動物死亡率的總和；n為各組動物數；Sx50為lgLD50的標準誤差。

2 結果與分析

2.1 急性毒性試驗結果 見表1。

表1 緩釋長效乳酸環丙沙星對小鼠毒性 (mg·kg-1、%)

2.2 中毒癥狀及死亡小鼠剖檢觀察 各組小鼠給藥后即見活動減少，呆滯，畏寒扎堆，抽搐，食欲減退等癥狀。用藥后3h各組小鼠相繼出現死亡，死前精神極度沉郁，食欲廢絕，抽搐，未見明顯掙扎。死亡時間多集中于4～10h，死亡動物與其性別無明顯相關性。用藥后24h，未死亡的小鼠精神、食欲逐漸恢復。繼續觀察7d，未見小鼠再有死亡，體重增長在正常范圍內，但是皮下和肌肉注射處出現不同程度的脫毛現象。

剖檢各死亡小鼠，2、3、4組皮下注射處有明顯的組織壞死和潰爛。肌肉注射組織器官無肉眼可見的明顯病變。

2.3 LD50的計算 采用改良寇氏法進行計算，皮下注射LD50=2504.38mg/kg，其95%的可信限為1976.97～3172.49 mg/kg；肌肉注射LD50=839.27mg/kg，其95%的可信限為750.76～938.21mg/kg。

3 結論

本試驗表明，緩釋長效乳酸環丙沙星注射液按毒性分級標準屬于低毒性藥物[2]，皮下和肌肉注射分別為臨床推薦用量(10mg/kg)的250倍和84倍，臨床使用安全。李孝文等[3]報道，復方環丙沙星乳劑腹腔注射最大耐受量為8181.8mg/kg，為復方環丙沙星注射液LD50(LD50為1058.93 mg/kg)的7.726倍，毒性顯著降低。本試驗也證明了將乳酸環丙沙星制成緩釋長效制劑后肌肉注射和皮下注射給藥毒性降低[4]。

本試驗發現，大劑量注射環丙沙星后，導致動物皮下組織壞死，在臨床應用時應引起注意。

[1] 林輝, 中藥緩釋制劑的發展[J]. 海峽藥學, 2002, 14(5)∶ 114-117.

[2] 獸藥急性毒性試驗(LD50測定)指導原則[S]. 中華人民共和國農業部公告第1247號. 2009.

[3] 李孝文, 李佳緣, 楊亮等. 復方環丙沙星乳劑急性毒性試驗[J]. 動物醫學進展, 2010, 31(11)∶ 56-58.

[4] 林赴田, 余蘭香, 于鋒等. 環丙氟哌酸的藥效學和毒理學研究[J], 中國抗生素雜志, 1990(4).

S859.79+4

A

1007-1733(2014)04-0011-02

2014–01–04）

濟南市企業自主創新計劃項目（編號∶201003070）

*通訊作者