肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液T細胞亞群變化與分析

吳小磊，張慧玉，田 玲，陳冬梅，李曉娟，黃光舉，嚴 慧

（唐山市婦幼保健院，河北唐山063000）

肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液T細胞亞群變化與分析

吳小磊，張慧玉＊，田 玲，陳冬梅，李曉娟，黃光舉，嚴 慧

（唐山市婦幼保健院，河北唐山063000）

肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是兒科常見的呼吸道感染性疾病，也是兒科最常見的非典型肺炎之一，其發病率呈逐年增高趨勢，近年來難治或重癥病例逐漸增多，因此其發病機制引起了兒科醫師的廣泛關注，其中細胞免疫發揮的作用已得到公認，但其免疫機制尚不十分清楚。本文回顧性總結分析72例RMPP患兒、63例普通MPP患兒的支氣管肺泡灌洗液T細胞亞群水平及變化，探討其變化與肺炎支原體肺炎病情輕重的關系。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

1.1.1 病例來源 選擇2011年12月～2012年11月在我院住院行支氣管肺泡灌洗的肺炎支原體肺炎患兒共135例，入選標準：符合實用兒科學第7版肺炎診斷標準；起病4周內雙份血清肺炎支原體抗體滴度升高有4倍以上。排除支氣管哮喘、肺結核等其他呼吸系統疾病，留取標本前未使用免疫調節劑、免疫抑制劑及糖皮質激素。在入選病例中根據臨床表現分為MPP組63例和RMPP組72例，RMPP組除符合上述條件外尚符合以下3項中任意一條：①經規范的大環內酯類抗生素治療，仍持續高熱超過10d以上、劇烈咳嗽影響睡眠；②影像學表現為雙側或單側大葉高密度肺實變，合并中大量胸腔積液，甚至出現壞死性肺炎表現，或表現為雙側彌漫性間質性肺侵潤；③合并肝臟、心肌等肺外臟器損害，可發生肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）。MPP組男性30例，女性33例，平均年齡（5.43±1.80）歲。RMPP組男性32例，女性40例，平均年齡（5.94±1.92）歲。

1.1.2 對照組 氣管異物住院、異物取出4周后支氣管鏡復查的患兒為對照組30例，且雙份血清確診無肺炎支原體（mycoplasma，MP）感染，其中男性12例，女性18例，平均年齡（5.23±1.45）歲。各組在年齡、性別分布無統計學差異。本研究取得患兒家長的同意，并簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 由兒科專業護士無菌抽取清晨空腹靜脈血2ml，抗凝，3 000r／min離心10min取血清測定T細胞亞群水平。

1.2.2 支氣管鏡選擇 采用日本富士能支氣管鏡外徑分別為3.8mm，操作孔徑為1.2mm。

1.2.3 支氣管肺泡灌洗液標本留取 采用日本O－lymPus纖維支氣管鏡（纖支鏡），使用前用2%戊二醛浸泡0.5小時，然后用無菌生理鹽水反復沖洗，具體操作如下：患兒行纖維支氣管鏡術，術前30分鐘肌肉注射阿托品0.01－0.03mg／kg（最大量不超過0.5mg）減少呼吸道分泌物，并防止術中迷走反射引起的呼吸心跳驟停，術前10分鐘靜脈推注咪唑安定0.1－0.3mg／kg，鎮靜和近期遺忘的作用，以免患兒對操作過程有痛苦記憶。患者取仰臥位，由專業的兒科醫生將纖支鏡經鼻腔進入氣管，當纖支鏡通過聲門進入氣管隆突后，用2%利多卡因1ml經活檢孔噴灑，再用5ml空氣加壓注入進行局部表面麻醉。將纖支鏡嵌入病變最嚴重部位或右肺中葉作為灌洗部位，急性支氣管異物患兒的灌洗部位為非異物側肺，用10ml無菌針筒經纖支鏡吸引孔注入37℃無菌生理鹽水灌洗并回收BALF，無菌生理鹽水注入量為每次1ml／kg，共3次，回收量大于40%，將回收液體立即用無菌紗布除去粘液及痰液，裝入硅塑瓶，置于含有冰塊的保溫瓶中，立即送往實驗室，在4℃以下以1 800r／min離心10min，測定T細胞亞群水平。

1.2.4 血及肺泡灌洗液T細胞亞群測定 由流式細胞儀（FACSCalibur，美國Becton Dickinson公司）及CellQuest軟件測定，按說明書操作。

1.3 統計學處理

連續性正態分布的計量資料數據以均數±標準差（ˉx±s）表示，兩獨立樣本均數比較采用t檢驗，多組間均數比較采用方差分析，多組均數的多重比較采用LSD－t檢驗方法，以P＜0.05作為差異有顯著性的標準。

2 結果

2.1 不同組間兒童血清中CD3、CD4、CD4／CD8水平有差異，具有統計學意義（P＜0.01），CD8水平無統計學差異（P＞0.05），經兩兩比較發現，RMPP組兒童血清CD3、CD4、CD4／CD8水平明顯低于MPP組和支氣管異物組兒童水平（P＜0.01），RMPP組CD8及MPP組血清CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平與支氣管異物組無差異（P＞0.05），見表1。

表1 各組血中T細胞亞群分析

2.2 不同組間兒童BALF中CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平有差異，具有統計學意義（P＜0.01），經兩兩比較發現，RMPP組兒童BALF中CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平低于MPP組和支氣管異物組兒童水平（P＜0.01），MPP組BALF中CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平與支氣管異物組無差異（P＞0.05），見表2。

表2 各組BALF中T細胞亞群分析

2.3 MPP組BALF及血中CD3、CD4、CD8、CD4／CD8水平差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

2.4 RMPP組患兒BALF中CD3、CD4、CD8水平均低于血中相應指標水平，差異有統計學意義（P＜0.01），BALF及血中CD4／CD8水平差異無統計學意義（P＞0.05），見表4。

表3 MPP組血及BALF中T細胞亞群分析

表4 RMPP組血及BALF中T細胞亞群分析

3 討論

MP是5－15歲兒童社區獲得性肺炎（CAP）的常見病原，占10%－30%［1］。MP常侵襲大齡兒童，但據流行病學調查發現，近年來MP感染有發病年齡提前的現象，5歲以內兒童發病率明顯上升，部分患兒病情較重，它不僅可造成嚴重的肺部感染，而且可以發生多器官、多系統損害，如不及時治療，部分患兒甚至出現多器官功能障礙或多器官功能衰竭，對兒童的健康造成很大的危害［2］。因此MPP的發病機制日益受到兒科醫生的高度重視。迄今，MPP的發病機制尚不明確，但其免疫機制已得到認可，其中細胞免疫占重要作用。

國外研究表明，MP可使淋巴細胞多克隆活化［3］，對淋巴細胞有絲裂原的作用，導致細胞增殖和破壞正常T細胞亞群的比例。CD3細胞是成熟T淋巴細胞的特征性標志，T淋巴細胞因其CD3分子以外的其它表面標記物以及生物學功能不同，而分為許多亞群。其中CD4細胞可促進B細胞、T細胞及其他免疫細胞的增殖、分化和發揮免疫效應功能，故稱為輔助性T淋巴細胞；而CD8的功能是直接殺傷靶抗原，故稱為細胞毒性T淋巴細胞。正常情況下，CD4／CD8細胞比值在一定的范圍內，維持著動態平衡，一旦失去平衡，將導致免疫功能紊亂和免疫防御能力降低，致使疾病發生。T淋巴細胞亞群的比例是反映機體免疫功能變化的主要指標。CD3水平下降說明了T淋巴細胞活化功能受抑制，這可能是導致機體免疫功能降低的關鍵因素。國內研究［4－6］發現MPP患兒急性期和恢復期CD3、CD4比例及CD4／CD8比值明顯降低，而CD8細胞比例較正常對照組明顯升高。本研究發現RMPP患兒血清及BALF中CD3、CD4水平及CD4／CD8水平明顯下降，且BALF中改變更明顯，說明RMPP患兒成熟T細胞數目減少，Th細胞免疫功能下降，其結果導致免疫功能減退、免疫調節功能紊亂，而MPP組血清中C3、CD4水平及CD4／CD8比值較對照組無明顯下降，與上述研究結果不符，考慮與所選病人輕重程度不同有關。MPP組BALF中CD4較對照組有下降，說明BALF中CD4改變較血清中更敏感。

總之，本研究提示了T細胞免疫功能異常在MPP尤其是RMPP發病機制中起重要作用。目前兒童MP感染的抗生素治療主要以大環內酯類為主，但大環內酯類抗生素的耐藥問題越來越嚴重［7］，故機體免疫功能的增強及改善在MPP的治療過程中顯得尤為重要。嚴永東［8］用免疫調節劑匹多莫德治療難治性MPP有一定療效，提示我們對RMPP可給予免疫調節治療，以助于提高療效、縮短病程。

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吳小磊（1982－），女，本科，主治醫師。

2013－06－15）

1007－4287（2014）07－1122－03

＊通訊作者