放療聯合高效細胞因子誘導殺傷細胞治療鼻咽癌的臨床療效觀察

溫演偉，董洪松，田耕

(深圳市第二人民醫院耳鼻喉科，廣東深圳 518035）

放療聯合高效細胞因子誘導殺傷細胞治療鼻咽癌的臨床療效觀察

溫演偉，董洪松，田耕

(深圳市第二人民醫院耳鼻喉科，廣東深圳 518035）

目的分析高效細胞因子誘導的殺傷細胞聯合放射治療治療鼻咽癌臨床療效和安全性。方法選取2010年6月至2013年6月在我院就診的60例鼻咽癌患者為研究對象，應用隨機數字表法將患者分為分為實驗組和對照組，每組各30例，對照組給予放射治療，實驗組則在對照組治療的基礎上給予高效細胞因子誘導的殺傷細胞治療，比較觀察兩組患者免疫指標變化和Karnofsky評分變化。結果治療4周后兩組患者CD4+/CD8+比值、Treg細胞百分率、NK細胞百分率、NKT細胞百分率均較前明顯改善，但實驗組患者Treg細胞百分率和NKT細胞百分率上調更明顯，而CD4+/CD8+比值和NK細胞百分率下降更明顯，差異有統計學意義(P＜0.05)。實驗組患者的Karnofsky評分明顯優于對照組患者，其差異也有統計學意義(P＜0.05)。結論高效細胞因子誘導的殺傷細胞聯合放射治療能夠有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活質量，值得在臨床上進一步推廣。

高效細胞因子；殺傷細胞；放射治療；鼻咽癌；臨床療效

在我國，鼻咽癌是最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅患者的身心健康，甚至危及患者的性命[1-2]。治療上，疾病早期首選放射治療[3-4]，而對于晚期鼻咽癌患者多選用以放射治療為主、化療為輔的綜合治療[5-6]。為此，學者們和腫瘤科醫師一直致力于優化安全高效的綜合治療方案。高效CIK細胞對肝癌的治療已經有明確的治療效果，而高效CIK治療其他系統的腫瘤具有相同的治療機制。本研究中筆者采用高效細胞因子誘導的殺傷細胞聯合放射治療在我院就診的60例鼻咽癌患者，收到了滿意的臨床效果，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2010年6月至2013年6月在我院就診的60例鼻咽癌患者為研究對象。患者入組條件：(1)年齡18～75歲；(2)預期生存期大于3個月；(3)病理組織學上確認的鼻咽癌，已經放射治療，或放療失敗的轉移性Ⅳ期患者；(4)血肌酐≤1.5 μlm(正常值上限)，血膽紅素≤1.5 μlm(正常值上限)，ALT和AST≤2.5 μlm；(5)骨髓儲備充足(白細胞數＞3×109/L，淋巴細胞計數＞0.83×109/L，血小板＞50×109/L)；(6)患者簽署知情同意書；(8)無明確過敏史；(9)經濟上可以承受。排除標準：(1)有活動的未控制的感染者；(2)有嚴重心臟病史，未控制的高血壓病，不穩定心絞痛，或充血性心力衰竭；(3)懷孕或哺乳期女性；(4)有T淋巴細胞相關的免疫疾病史。應用隨機數字表法將患者分為實驗組和對照組。其中，對照組30例患者中男性16例，女性14例；年齡51～75歲，平均(58.62±18.47)歲。實驗組30例患者中男性17例，女性13例；年齡50～75歲，平均(59.45±18.87)歲。兩組患者性別構成和平均年齡等方面比較差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法對照組患者給予放射治療，實驗組患者則在上述治療的基礎上給予高效細胞因子誘導的殺傷細胞治療。本試驗用的高效CIK細胞由患者自身提供20～100 ml外周血(根據患者本人淋巴細胞絕對值決定所需要的血量)，體外培養擴增至原來的100～1 000倍。每次回輸含3～10×109細胞/ 100～200 ml含1%白蛋白的生理鹽水。細胞產品無細菌、霉菌、支原體、病毒等任何微生物和內毒素的污染。抽外周血后約2周開始回輸，患者每周回輸一次，至少回輸4次。

1.3 免疫指標及其檢測方法觀察兩組患者的CD4+/CD8+比值、Treg細胞百分率、NK細胞百分率、NKT細胞百分率。檢測方法：分別于治療前1 d及治療4周后采集患者2 ml清晨空腹以肝素抗凝外周靜脈血。嚴格按照說明書進行操作，取100 μl外周靜脈血與20 μl相應抗體充分混勻，在混勻后置于室溫時避光反應20 min，加入2 ml 0.85%NH4Cl溶液，再將其置于室溫下避光反應10 min，離心去除上清，再PBS洗滌2次，最后將其置于流式細胞儀進行檢測。

1.4 Karnofsky評分[7]患者正常，無癥狀和體征為100分；能進行正?；顒樱休p微癥狀和體征為90分；勉強進行正?；顒?，有一些癥狀或體征為80分；患者生活能自理，但不能維持正常生活和工作為70分；患者生活能大部分自理，但偶爾需要別人幫助為60分；患者常需要人照料為50分；患者生活不能自理，需要特別照顧和幫助為40分；患者生活嚴重不能自理為30分；患者病重，需要住院和積極的支持治療為20分；患者重危，臨近死亡為10分；患者死亡為0分。量表得分越高，健康狀況越好。等分越低，健康狀況越差。

1.5 統計學方法應用SPSS19.0軟件包進行數據分析，組間計量資料比較采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者免疫指標變化比較治療前兩組患者CD4+/CD8+比值、Treg細胞百分率、NK細胞百分率、NKT細胞百分率差異無統計學意義(P＞0.05)，治療4周后，兩組患者CD4+/CD8+比值、Treg細胞百分率、NK細胞百分率、NKT細胞百分率均較前明顯改善，但是，實驗組患者Treg細胞百分率和NKT細胞百分率上調更明顯，而CD4+/CD8+比值和NK細胞百分率下降更明顯，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者免疫指標變化比較(±s)

表1 兩組患者免疫指標變化比較(±s)

項目例數CD4+/CD8+NK(%)NKT(%)Treg(%)對照組實驗組t值P值30 30治療前0.94±0.14 0.93±0.16 0.258＞0.05治療4周后1.18±0.21 1.46±0.22 5.043＜0.05治療前15.76±2.65 15.84±2.72 0.115＞0.05治療4周后17.23±3.21 22.26±3.13 6.145＜0.05治療前5.42±2.56 5.48±2.70 0.088＞0.05治療4周后10.41±2.85 14.38±2.79 5.452＜0.05治療前9.21±1.53 9.15±1.47 0.155＞0.05治療4周后6.28±1.27 4.21±1.23 6.413＜0.05

2.2 兩組患者Karnofsky評分比較治療前兩組患者Karnofsky評分差異無統計學意義(P＞0.05)，治療4周后，兩組患者Karnofsky評分均較前明顯改善，但是實驗組患者Karnofsky評分明顯優于對照組患者，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

2.3 毒副反應觀察實驗組患者在回輸高效細胞因子誘導的殺傷細胞過程中有6例出現低熱，給予物理降溫對癥處理后體溫均降至正常；1例出現輕度皮疹，給予抗過敏治療后患者的皮疹消退。

表2 兩組患者Karnofsky評分比較（±s，分）

表2 兩組患者Karnofsky評分比較（±s，分）

組別對照組實驗組t值P值例數30 30治療前73.18±6.63 72.80±7.02 13.296＞0.05治療4周后82.57±5.70 89.94±6.89 4.514＜0.05 t值5.882 9.88 P值＜0.05＜0.05

3 討論

近30年來隨著我國人民生活水平的提高和人均壽命不斷延長，腫瘤已成為最主要的居民死亡原因。鼻咽癌是一種常見的頭頸部惡性腫瘤。在東南亞及我國南方多見，廣東省是其中高發地。放療是治療鼻咽癌的主要方法，但在鼻咽癌放療不敏感、復發、轉移的情況下，缺乏有效、不良反應輕的治療手段。目前免疫治療已經成為手術、化療、放療之后的一種無創、有效的治療方法，得到全世界廣泛承認。

隨著對腫瘤免疫和免疫逃逸機制的深入了解，以及淋巴細胞體外培養技術的長足進步，不同方式的實體瘤的細胞免疫治療顯現了有前景的療效，其中包括對腫瘤復發轉移的抑制作用、對腫瘤瘤體本身的消除作用、對患者生存期的延長作用和對患者生存質量的改善作用，因此在國際上逐漸通過了不同國家的藥監機構審查[7-10]，成為進入Ⅲ期臨床和獲得臨床使用新藥文號的制劑，如美國Dendreon公司的樹突狀細胞疫苗Sipuleucel-T和Lapuleucel-T等過繼免疫治療。這使得免疫治療成為腫瘤的第四種治療模式漸漸成為現實。

在我國，已有利用LAK和CIK(Cytokine Induced Killer Cell，細胞因子誘導的殺傷細胞)進行實體瘤治療的經驗，治療所采用的細胞來源和培養方法在各地、各醫院差異較大。隨著細胞生物學、腫瘤免疫學近年來在技術手段上的突破和機制研究的發展，新一代的腫瘤細胞免疫治療方法正在逐步形成并發展。在本研究中，我們采用一種新型的細胞治療-高效細胞因子誘導的殺傷細胞(高效CIK)進行免疫治療。該方法使用的淋巴細胞來源于患者自身的少量外周血。在約2周的短時間內，這些淋巴細胞可以活化擴增達約1 000倍后，再回輸于患者體內。高效CIK試劑系統培養的自體淋巴細胞在日本為常規使用的腫瘤細胞免疫治療的手段。日本在治療肝癌的隨機臨床試驗中，使用高效CIK進行的免疫治療可提高患者的無復發存活率：經過5次高效CIK回輸治療的肝癌術后患者，與不經該治療的對照組比較，免疫治療組出現首次復發的時間要明顯延長(P=0.008)。與無該治療的患者比較，高效CIK治療組肝癌術后復發率降低18%，復發的危險率減少了41%(P=0.01)。高效CIK在韓國于2007年被批準進入肝癌治療的Ⅳ期臨床，惡性腦腫瘤治療的Ⅲ期臨床試驗。日本和韓國截止到2004年為止有2 134例不同系統的腫瘤患者參加了這項治療，其中完全緩解的患者為5%，部分緩解的患者是17%，長期病情穩定的患者為16%。同時沒有發現Ⅲ和Ⅳ度的不良反應。

本研究發現：實驗組患者Treg細胞百分率和NKT細胞百分率上調更明顯，而比值和NK細胞百分率下降更明顯，差異有統計學意義(P＜0.05)。實驗組患者Karnofsky評分明顯優于對照組患者的，差異有統計學意義(P＜0.05)。究其原因可能與以下原因有關：患者細胞減少會使腫瘤細胞免疫逃逸，而細胞升高則引起細胞免疫損害，導致患者體內比值明顯下降。在腫瘤免疫抑制及逃逸機制中起重要作用的Treg細胞廣泛存在于淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、肝癌、肺癌等多種腫瘤微環境中，且患者局部的Treg細胞數量與患者預后密切相關。本研究筆者采用高效細胞因子誘導的殺傷細胞治療能夠明顯改善患者T淋巴細胞的數量和比例，刺激T淋巴細胞活化，Treg細胞、NKT細胞、NK細胞、比值異常情況得到糾正，增強腫瘤患者機體細胞和體液免疫功能，有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活質量。

綜上所述，高效細胞因子誘導的殺傷細胞聯合放射治療能夠有效改善患者的免疫功能，改善患者的生活質量，值得臨床上進一步推廣應用。

[1]Xue WQ,Qin HD,Ruan HL,et al.Quantitative association of tobacco smoking with the risk of nasopharyngealcarcinoma:a comprehensive meta-analysis of studies conducted between 1979 and 2011 [J].Am J Epidemiol,2013,178(3):325-338.

[2]Nguyen NP,Ceizyk M,Vinh-Hung V,et al.Feasibility of tomotherapy to reduce cochlea radiation dose in patients with locally advanced nasopharyngeal cancer[J].Tumori,2012,98(6):709-714.

[3]Boghani Z,Husain Q,Kanumuri VV,et al.Juvenile nasopharyngeal angiofibroma:a systematic review and comparison of endoscopic,endoscopic-assisted,and open resection in 1047 cases[J]. Laryngoscope,2013,123(4):859-869.

[4]Leong SC.A systematic review of surgical outcomes for advanced juvenile nasopharyngealangiofibroma with intracranial involvement [J].Laryngoscope,2013,123(5):1125-1131.

[5]邢宏,韓方正,汪莉萍.細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)的基礎與臨床研究新進展[J].中國免疫學雜志,2011,27(1):88-92.

[6]要跟東,劉愛民,霍紅旗,等.CIK對三種鼻咽癌細胞株殺傷活性的研究[J].山東醫藥,2011,51(3):79-80.

[7]李曉英,鮑楊漪,江蓓蕾,等.不同類型腫瘤患者自體CIK細胞治療對機體免疫狀態及臨床癥狀改善的影響[J].安徽醫科大學學報,2012,47(4):434-437.

[8]董毅,朱太崗,李月紅,等.CIK細胞與DC-CIK細胞抗腫瘤效應的對照研究[J].中華全科醫學,2011,9(12):1844-1846.

[9]郭云泉,趙峰,梁麗萍,等.CIK細胞的體外擴增能力及殺瘤效應[J].新疆醫科大學學報,2011,34(11):1244-1246.

[10]Li JJ,Gu MF,Pan K,et al.Autologous cytokine-induced killer cell transfusion in combination with gemcitabine plus cisplatin regimen chemotherapy for metastatic nasopharyngeal carcinoma[J].J Immunother,2012,35(2):189-195.

Observation of clinical efficacy and safety of nasopharyngeal carcinoma treated with radiotherapy combined cytokine-induced killer cells therapy.

WEN Yan-wei,DONG Hong-song,TIAN Geng.Department of Otolaryngology, The Second People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518035,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo analyze the clinical efficacy and safety of nasopharyngeal carcinoma treated with radiotherapy combined combined cytokine-induced killer cells therapy.MethodsSixty cases of patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC)from June 2010 to June 2013 in our hospital were selected as the research objects,and were divided into experimental group and control group by random number table method.The 30 cases in control group were given radiotherapy,and the another 30 cases in experimental group were given cytokine-induced killer cell therapy combined with radiotherapy.And then immune indexes and Karnofsky scores in both groups were observed.ResultsAfter 4 weeks treatment,CD4+/CD8+ratio,the percentages of Treg cells,the percentages of NK cells and NKT cells in both groups were obviously improved.Compared to the control group,the percentages of Treg cells and NKT cells in experimental group increased more obviously,while CD4+/CD8+ratio and NK cells percentage decreased more significantly with statistical differences(P＜0.05).The Karnofsky score in experimental group was better than that in control group with statistically significant difference(P＜0.05).ConclusionThe cytokine-induced killer cells with radiation therapy can effectively improve the patient's immune function as well as the quality of life,which is worthy of further clinical application.

Efficient cell factor;Killer cells;Radiation therapy;Nasopharyngeal carcinoma;Clinical curative effect

R739.63

A

1003—6350（2014）11—1570—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.11.0610

2013-11-25)

2012年深圳市科技局項目（編號：201202025）

溫演偉。E-mail：wyw55@126.com