脈絡寧注射液對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護作用的研究*

吳 婷 蔣寶平 田 磊 居文政△

（1.南京中醫藥大學附屬醫院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫藥大學藥學院，江蘇 南京210029）

脈絡寧注射液對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護作用的研究*

吳 婷1蔣寶平2田 磊1居文政1△

（1.南京中醫藥大學附屬醫院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫藥大學藥學院，江蘇 南京210029）

目的觀察脈絡寧注射液對腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織的保護作用損傷的療效。方法將24只大鼠隨機分成3組，即假手術組、模型組和脈絡寧組（每組各8只），后兩組采用線栓法造成大鼠多發性腦梗死，脈絡寧組給脈絡寧注射液尾靜脈注射；觀察比較3組大鼠行為學改變及腦含水量、腦指數、腦組織內SOD、MDA含量變化。結果 脈絡寧注射液可降低腦缺血再灌注大鼠的腦指數與腦含水量，降低大鼠腦組織內MDA含量，提高SOD活性（均P＜0.05或P＜0.01）。結論脈絡寧注射液對腦缺血再灌注損傷有一定的保護作用。

脈絡寧注射液 腦缺血再灌注 腦指數 腦含水量 SOD MDA

脈絡寧注射液由金銀花、牛膝、玄參、石斛組成，具有養陰清熱、補益肝腎、活血化瘀的功效，其治療腦梗死療效最為顯著［1］。筆者建立大鼠大腦中動脈缺血再灌注（MCAO）模型，觀察尾靜脈注射脈絡寧注射液后，大鼠神經行為學的改變及腦梗死率、腦含水量、腦指數指標、SOD、MDA的影響，以驗證脈絡寧注射液對腦缺血再灌注損傷的保護作用。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 脈絡寧注射液，金陵藥業股份有限公司，批號20110501。紅四氮唑（TTC），上海試劑三廠，批號070410。MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號20031012。SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號20041010。

1.2 動物 SD大鼠，清潔級，雄性，體質量250～350 g，由南京中醫藥大學動物中心提供，實驗動物合格證號SCXK（浙）2008-0033，大鼠飼養于南京中醫藥大學動物實驗室全屏障清潔級動物實驗房內。

1.3 儀器 DGG-9140型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海森信實驗儀器有限公司；賽多利斯CAP225D電子天平（德國）；752分光光度計，上海第三分析儀器廠。

1.4 分組與造模 24只SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、脈絡寧組各8只。腹腔注射10％水合氯醛，待動物麻醉后，用鼠板固定。頸正中切開，分離肌肉和筋膜，顯露出右側頸總動脈 （CCA），沿頭部方向分離CCA、頸外動脈（ECA）、頸內動脈（ICA）以及ICA的顱外分支翼突腭動脈。結扎CCA的近端，用眼科剪在距分叉處約1 cm血管壁上剪一小口，將線栓自ECA沿心臟方向插入，剪斷與其相連的ECA血管，線栓經CCA分叉處通過ICA入大腦前動脈，將ECA連同線栓一起結扎固定，縫合肌肉和皮膚，青霉素外涂于傷口以防感染。缺血4 h后再灌注20 h，再灌注時外拉線使其球端回至ECA內即可。假手術組除不插線外其余步驟同上。

1.5 給藥方法 大鼠術前12h禁食不禁水。假手術組于手術后4 h尾靜脈注射0.9％氯化鈉注射液4 mL/kg，模型組與脈絡寧組分別在缺血 4 h后尾靜脈注射0.9％氯化鈉注射液4 mL/kg、脈絡寧注射液4 mL/kg，而后再灌注20 h。

1.6 標本采集與檢測 （1）待MCAO大鼠麻醉清醒后4 h及24 h，進行行為學檢測并加以評分。（2）實驗結束后，大鼠斷頭取腦，置于冰鹽水中10 min，將腦組織進行冠狀切片，均勻切成2 mm厚腦片，放入2％TTC磷酸鹽緩沖溶液中37℃水浴20 min，缺血壞死的神經細胞，呈現白色，而非壞死的神經細胞呈現鮮紅色。分離并稱重梗死區域，求出梗死區質量占腦質量的百分比，即腦梗死率。大鼠斷頭取腦，稱質量后，置烘箱內，106℃烘干后稱重。公式：腦指數＝腦濕質量 （g）/體質量（100g）；腦含水量 （％）＝（濕質量-干質量）/濕質量× 100％。（3）取腦組織，稱質量，加冰生理鹽水制成10％腦組織勻漿，測定MDA含量、SOD活性。

1.7 統計學處理 應用SPSS13.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

見表1～表3。與假手術組比較，模型組、脈絡寧組大鼠行為學評分均呈顯著升高（P＜0.01）；脈絡寧組大鼠與模型組比較，行為學評分顯著降低（P＜0.01），表明脈絡寧注射液對大鼠的神經功能缺損有顯著改善作用。脈絡寧注射液組大鼠的腦指數、腦含水量及腦梗死率明顯低于模型組（P＜0.05）。與假手術組比較，模型組的SOD活性明顯下降，MDA含量明顯升高 （P＜ 0.05）。與模型組相比，脈絡寧組SOD活性升高 （P＜ 0.05），MDA含量下降（P＜0.05），表明脈絡寧注射液可以減少全腦缺血、缺氧后腦組織中SOD的消耗及MDA的生成。

表1 各組大鼠行為學評分比較（±s）

表1 各組大鼠行為學評分比較（±s）

與假手術組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組 別 n 清醒后4 h 清醒后24 h假手術組 8 0.63±0.14 0.38±0.12模型組 8 6.88±1.25** 6.50±1.41**脈絡寧組 8 3.98±1.32** 3.02±1.01**△△

表2 各組大鼠腦指數、腦梗死率及腦含水量比較（±s）

表2 各組大鼠腦指數、腦梗死率及腦含水量比較（±s）

組 別 n 腦指數C（g/100 g）假手術組 8 0.335±0.016模型組 8 0.366±0.027*脈絡寧組 8 0.336±0.026△腦含水量（％）腦梗死率（％）74.85±2.92 0.00±0.00 81.18±3.08* 8.55±3.28**76.27±3.66△ 6.88±1.76**△

表3 各組大鼠腦勻漿SOD活性、MDA含量比較（±s）

表3 各組大鼠腦勻漿SOD活性、MDA含量比較（±s）

組 別 n SOD（U/mg） MDA（nmol/mg）假手術組 8 326.6±63.4 14.16±2.31模型組 8 231.7±57.2* 21.04±7.03*脈絡寧組 8 305.2±66.5△ 14.55±2.87△

3 討論

在腦梗死早期，由于局部血液循環障礙，導致腦組織缺血水腫、腦細胞死亡。同時，由于顱內壓升高，壓迫腦部血管，影響腦部微循環。脈絡寧注射液能夠擴張血管、增加腦血流量、降低腦血管阻力、改善微循環，從而達到降低腦指數、減輕腦水腫、防止腦梗死的作用。發生腦梗死后快速促使缺血組織血流恢復，是防治細胞不可逆損傷的重要條件，但是在再灌注的同時，也可能加重缺血所致的損傷，其機制十分復雜。目前認為，自由基連鎖反應是多發性腦梗死后造成腦部功能損傷的主要原因之一，也是缺血再灌注損傷的主要機制［2-5］。腦梗患者體內的自由基代謝出現紊亂，動態平衡被破壞，使其含量顯著升高，而體內可清除過多自由基的SOD活性下降，導致腦損傷。MDA是脂質過氧化反應中的代謝產物，其含量的測定可以反映脂質過氧化程度，預知機體中自由基的含量，間接反映出細胞造成損傷的程度［6］。

本實驗結果顯示，脈絡寧注射液可降低腦缺血再灌注大鼠的行為指標評分，增加腦組織勻漿中SOD的水平、降低MDA含量、降低腦梗死面積，表明脈絡寧注射液具有抗氧化的作用，可減輕腦缺血再灌注所造成的損傷，改善腦功能。

［1］吳婷，張軍，儲繼紅，等.脈絡寧注射液藥理及藥代學研究進展［J］.江蘇中醫藥，2011，43（9）：93-94.

［2］White BC，Sullivan JM，Degracia DJ，et al.Brain ischemia and reperfusion：molecular mechanisms of neuronalinjury［J］. J Neurol Sci，2000，179（S 1-2）：1-33.

［3］Jiang MZ，Tsukahara H，Ohshima Y，et a1.Effects of antioxidants and nitric oxide on TNF-alpha-induced adhesion molecule expression and NF-kappaB activation in human dermal microvascular endothelial cells［J］.Life Sci，2004，75（10）：1159-1170.

［4］姜德華，金男革，玄漢石，等.大鼠急性局灶腦缺血再灌注腦組織NO含量和NOS活性的變化［J］.臨床神經病學雜志，2000，13（4）：201-203.

［5］Yamawaki M，Sasaki N，Simoyama M，et al.Protective efectof edaravone against hypoxia-reoxygenation injury in rabbitcar diomyocytes［J］.Br J pharmacol，2004，142（3）：618-626.

［6］ 章軍建，阮旭中，張蘇明.大鼠局灶性腦缺血再灌流半暗帶神經細胞壞死與凋亡的動態變化［J］.中華老年醫學雜志，1999，18（3）：170-173.

Study of M ailuoning Injection on Rats w ith Focal Cerebral Ischem ia Reperfusion Injury

WU Ting，JIANG Bao-ping，TIAN Lei，et al.Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu Nanjing 210029，China

Objective：To establish rats with focal cerebral ischemia reperfusion model and to investigate effect of Mailuoning injection on injury induced by cerebral ischemia reperfusion.M ethods：twenty-four male SD rats were random ly divided into three groups with eight rats in each group：sham-operation control group，model group，and Mailuoning group.The model was established by middle cerebral artery occlusion.Neurological deficits scores，cerebral water content，activity of SOD，and the content of MDA were observed.Results：Compared with model group，Mailuoning group can significantly reduce the neurological deficits scores and cerebral water content，decrease the content of MDA，and increase SOD activity.Conclusion：Mailuoning injection can alleviate cerebral ischemia reperfusion injury in rats.

Mailuoning injection；Cerebral ischemia reperfusion；Cerebral index；Cerebral water content

R285.5

A

1004-745X（2014）04-0570-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.04.003

科技部重大新藥創制科技重大專項——中藥新藥臨床評價研究技術平臺（南京）建設（No 2012ZX09303009-002）；江蘇省中醫藥領軍人才（LJ200906）；江蘇高校優勢學科建設工程資助項目（2010）

△通信作者

2013-12-26）