調(diào)胃舒顆粒劑對萎縮性胃炎大鼠血清一氧化氮含量的影響*

孫云廷 趙文波 王淑玲 舒 暢 曾友華

（1.浙江省杭州市中醫(yī)院，浙江 杭州 310007；2.杭州師范大學(xué)生物醫(yī)藥與健康研究中心，浙江 杭州 321121）

調(diào)胃舒顆粒劑對萎縮性胃炎大鼠血清一氧化氮含量的影響*

孫云廷1趙文波1王淑玲2△舒 暢1曾友華1

（1.浙江省杭州市中醫(yī)院，浙江 杭州 310007；2.杭州師范大學(xué)生物醫(yī)藥與健康研究中心，浙江 杭州 321121）

目的觀察調(diào)胃舒顆粒劑對萎縮性胃炎大鼠血清一氧化氮（NO）含量的影響。方法將SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組（A）、模型組（B）、調(diào)胃舒顆粒劑小劑量組（C）、調(diào)胃舒顆粒劑大劑量組（D）、三九胃泰治療組（E），分別處理后觀察大鼠體質(zhì)量改變等一般情況，并測定血清NO含量。結(jié)果C組與D組血清NO含量均顯著高于B組與E組（P＜0.05）；D組顯著高于C組（P＜0.05）。D組大鼠體質(zhì)量上升情況顯著優(yōu)于B組、C組、E組。結(jié)論調(diào)胃舒顆粒劑對萎縮性胃炎大鼠有治療作用；對血清NO的影響呈量-效關(guān)系。

調(diào)胃舒顆粒劑 萎縮性胃炎 動(dòng)物模型 血清NO

調(diào)胃舒顆粒劑經(jīng)臨床反復(fù)驗(yàn)證，對慢性萎縮性胃炎（CAG）療效確切［1］。本研究通過觀察調(diào)胃舒顆粒劑對CAG模型大鼠血清NO含量的影響，探討調(diào)胃舒顆粒劑對CAG的治療機(jī)理，為臨床防治CAG提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠50只，2月齡，體質(zhì)量（180±20）g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料由杭州師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要試劑 調(diào)胃舒顆粒劑配方顆粒來源：江陰天江藥業(yè)有限公司。配制成含生藥濃度150 mg/mL和300 mg/mL的溶液。調(diào)胃舒顆粒配方主要組成：制半夏、黃芩、川黃連、干姜、炙甘草、西洋參、柴胡、醋香附、延胡索、白術(shù)。NO試劑盒由南昌貝塔生物科技有限公司提供，批號20120403。三九胃泰為華潤三九醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，批號Z44020705。每粒150 mg，用蒸餾水配成3 mg/mL懸濁液，隨配隨用；冰醋酸100％濃度，由杭州師范大學(xué)生物醫(yī)藥研究中心提供。

1.3 分組與造模 50只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為5組，每組10只：正常對照組（A）、模型組（B）、調(diào)胃舒顆粒劑小劑量組（C）、三九胃泰治療組（D）、調(diào)胃舒顆粒劑大劑量組（E）。參照文獻(xiàn)［2］方法，采用純度為99％的N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍飲用液代替飲用水，自由飲用法造模。并參照文獻(xiàn)方法［3］采用饑飽失常加耗氣瀉下法造模，加以改良，實(shí)驗(yàn)第5周開始模型組開始采用隔日喂食，自由飲MNNG飲用液。實(shí)驗(yàn)第6周開始，采用小承氣湯液灌胃，2 mL/（只·d）。（大黃、厚樸、枳實(shí)按4∶2∶3的比例，采用江陰天江制藥有限公司提供的中藥免煎顆粒劑，配制成含生藥200 mg/mL的藥液），連續(xù)造模60 d，于30 d、60 d禁食禁水12 h后隨機(jī)處死，做胃黏膜病理組織學(xué)檢查，見胃黏膜腺體萎縮，出現(xiàn)腸化生或不典型增生，確定CAG動(dòng)物模型復(fù)制成功。

1.4 處理方法 對各組動(dòng)物分別于治療前后稱取體質(zhì)量，再分別做如下處理。A組在相同條件下正常飼養(yǎng)，自然光照，不做其他處理。B組于造模后相同條件下正常飼養(yǎng)，自然光照，于造模后第3日開始，模擬捉拿、固定、擦拭、酒精消毒。生理鹽水灌胃1 mL/100 g。上午10∶00和下午3∶00共分2次灌服，共60 d。C組加用調(diào)胃舒顆粒溶液（含生藥0.15 g/mL）20 mL/（kg·d）灌胃（相當(dāng)人正常用量的20倍），上午10∶00和下午3∶00共分2次灌服，連續(xù)60 d。D組調(diào)胃舒顆粒劑大劑量治療組加用調(diào)胃舒顆粒溶液 （含生藥0.3 g/mL）20 mL/（kg·d）灌胃（相當(dāng)人正常用量的40倍），上午10：00和下午3：00共分2次灌服，連續(xù)60 d。E組造模后第3日開始用三九胃泰懸濁液灌胃，每日劑量1 mL/100 g體質(zhì)量，上午10∶00和下午3∶00共分2次灌服，連續(xù)60 d。

1.5 NO含量測定 治療完畢后處死大鼠，斷頭取血1 mL裝入P管，靜置2 h，以3000 rpm離心10 min，取上清夜測定NO含量，用化學(xué)法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書方法測定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同階段的大鼠的一般情況觀察結(jié)果 造模前各組大鼠行動(dòng)靈活，反應(yīng)迅速，目光有神，形體飽滿，皮毛光澤，食欲良好，大便成型。造模后1周A組大鼠未見異常，體質(zhì)量上升。其他各組大鼠行動(dòng)遲緩，反應(yīng)遲鈍，目光渾濁呆滯，形體消瘦，皮毛蓬松無澤，食量減少，糞便轉(zhuǎn)稀或不成形。用藥1周后C組、D組及E組大鼠行動(dòng)遲緩有明顯改善，反應(yīng)較為敏捷，雙目靈活，皮毛轉(zhuǎn)光澤，飲食增加，糞便轉(zhuǎn)干燥。B組無明顯改善。

2.2 各組血清中NO含量比較 見表1。B組與其他各組比較，NO含量顯著降低（P＜0.05）；E組顯著低于C組與D組（P＜0.05）；D組明顯高于C組（P＜0.05）。

2.3 大鼠體質(zhì)量的變化 見表2。C組、D組與E組體質(zhì)量上升情況均優(yōu)于B組（P＜0.05）；但均較A組差（P＜0.05）。D組體質(zhì)量上升情況優(yōu)于C組和E組（P＜ 0.05）。

表1 血清中NO含量的測定結(jié)果比較（μmol/L，s）

表1 血清中NO含量的測定結(jié)果比較（μmol/L，s）

與B組比較，*P＜0.05；與小C組比較，△P＜0.05；與C組比較，▲P＜0.05。

組 別 n A組 10 B組 10 C組 10 NO 12.93±0.88*12.11±0.95 13.33±0.63*▲D組 10 12.91±0.95*E組 10 13.92±0.86*△▲

表2 給藥后各組大鼠不同時(shí)期的體質(zhì)量變化（g，±s）

表2 給藥后各組大鼠不同時(shí)期的體質(zhì)量變化（g，±s）

與A組同期比較，*P＜0.05；與B組同期比較，△P＜0.05；與E組同期比較，▲P＜0.05。

組 別 n A組 10 B組 10 C組 10 1周 2周 4周 8周364.50±22.76 383.48±23.54 395.34±24.55 415.65±27.48 261.43±23.45* 272.33±24.69* 283.48±23.68* 309.44±24.12*287.55±25.43*△▲296.45±26.48*△▲321.38±31.82*△▲347.14±25.72*△▲D組 10 286.36±23.56*△▲297.33±23.12*△▲310.34±23.45*△▲326.49±28.19*△▲E組 10 312.54±23.87*△ 328.27±24.44*△ 351.32±23.34*△ 388.47±21.66*△

3 討論

調(diào)胃舒顆粒劑是本課題組經(jīng)過年多的臨床驗(yàn)證和篩選組成的治療萎縮性胃炎的經(jīng)驗(yàn)效方，由半夏、黃芩、川黃連、干姜、炙甘草、西洋參、柴胡、醋香附、延胡索、白術(shù)、茯苓、八月札、雞內(nèi)金、焦山楂、蒲黃等藥物組成，深度融合了清代程鐘齡的中醫(yī)治病八法中“和法”的理論，根據(jù)CAG患者普遍存在的肝郁氣滯、寒熱錯(cuò)雜、虛實(shí)互見、陰陽失調(diào)的復(fù)雜病機(jī)特點(diǎn)，將調(diào)和寒熱、調(diào)和陰陽、調(diào)和脾胃、調(diào)和肝脾等各種治法統(tǒng)籌兼顧，有機(jī)結(jié)合。前期臨床研究結(jié)果表明，調(diào)胃舒顆粒劑口服治療CAG，其痊愈率、顯效率、總有效率均顯著優(yōu)于服用嗎丁啉片以及乳酶生片對照組［1］。

NO是人體內(nèi)的一種具有生物活性的信息分子，是生物體內(nèi)重要的生理信使和病理介質(zhì)。NO不僅參與機(jī)體多種細(xì)胞的不同生理作用，而且還參與多種疾病發(fā)生發(fā)展的病理過程［4］。在生理狀態(tài)下，NO通過調(diào)節(jié)胃黏膜微循環(huán)和胃粘液的分泌保護(hù)胃黏膜；病理狀態(tài)下則可導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化損傷和細(xì)胞毒性［5］。目前的研究認(rèn)為NO對胃黏膜具有肯定的保護(hù)作用；已經(jīng)發(fā)現(xiàn)胃的平滑細(xì)胞和胃肌間神經(jīng)叢含有大量一氧化氮合酶（NOS），說明了NO在調(diào)節(jié)胃動(dòng)力方面的也有一定的重要性。

NO在胃黏膜的修復(fù)中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用調(diào)胃舒顆粒劑治療并觀察其與萎縮性胃炎大鼠血清NO含量的關(guān)系，結(jié)果表明，調(diào)胃舒顆粒劑小劑量和大劑量治療在CAG大鼠的體質(zhì)量上升方面均顯著優(yōu)于模型組，說明對CAG的治療作用是肯定的。調(diào)胃舒顆粒劑能顯著改變血清NO含量，可使CAG大鼠體內(nèi)NO含量升高，且優(yōu)于小劑量組、模型組和三九胃泰治療組，說明調(diào)胃舒顆粒劑對CAG有治療作用，不同劑量治療作用有所不同。其機(jī)制可能與改變NO含量有關(guān)。調(diào)胃舒顆粒劑的治療作用可能與其能顯著提高血清NO含量有關(guān)。

［1］孫云廷，王淑玲.調(diào)胃舒顆粒劑治療不同證型慢性萎縮性胃炎的臨床觀察［J］.中國中醫(yī)藥科技，2013，20（1）：67.

［2］李蘭珍，朱向東，段永強(qiáng)，等.胃炎靈對慢性萎縮性胃炎大鼠胃組織氧化與抗氧化系統(tǒng)的作用［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2008，14（3）：186-187.

［3］徐珊，周嘉鶴，王常松，等.慢性萎縮性胃炎證病結(jié)合模型的復(fù)制［J］.中國中醫(yī)藥科技，2008，15（1）：6-8.

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［5］孫波.腫瘤壞死因子α和白介素1β及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的表達(dá)與幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎的關(guān)系［J］.中國全科醫(yī)學(xué)，2010，13（4）：1155-1157.

Influence of Tiaoweishu Granules on Nitric Oxide Content in Serum of Rats w ith Atrophic Gastritis

SUN Yun-ting，ZHAO Wen-bo，WANG Shu-ling，et al. TCM Hospital of Hangzhou，Zhejiang Province，Zhejiang，Hangzhou 310007，China

Objective：To explore Nitric oxide（NO）levels in serum of rats with atrophic gastritis treated by Tiaoweishu Granules.M ethods：SD rats were random ly divided into five groups which were normal control group，atrophic gastritis model group，Tiaoweishu granules low-dose group，Tiaoweishu Granules high-dose group，and Sanjiuweitai treatment group.Change of weight was observed after treatment and contents of NO in serum were determined.Groups were compared after statistics processing.Results：Content of NO in serum of high-dose group and low-dose group were significantly higher than those of model group and Sanjiuweitai treatment group（P＜0.05）.Content of NO in serum of high-dose group was significantly higher than that of low-dose group（P＜ 0.05）.Rats putting more weight in high-dose group than ranitidine model group，low-dose group，and control group.Conclusion：Tiaoweishu Granules has a therapeutic effect on rats with atrophic gastritis and certain influence on NO in serum.Different dosage of Tiaoweishu granules has different effects on NO in serum.This could be one of the mechanisms of Tiaoweishu granules treating atrophic gastritis.

Tiaoweishu Granules；Atrophic Gastritis；Animal Models；NO in Serum

R285.5

A

1004-745X（2014）04-0617-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.04.022

浙江省中醫(yī)藥科學(xué)研究基金計(jì)劃（No.2012ZB109）；浙江省杭州市衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.2011A054）

△通信作者

2013-12-31）