赤霉酸A4，A7原藥高效液相色譜分析方法的研究

（江西新瑞豐生化有限公司,江西 新干 331307）

（江西新瑞豐生化有限公司,江西 新干 331307）

采用高效液相色譜分析法對赤霉酸A4,A7原藥中的A4,A7進行分離與測定，將甲醇與水作為流動相，調整甲醇與水的體積比，在210nm波長下，使用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充物的不銹鋼柱和可調波長紫外檢測器，對試樣中的赤霉酸A4,A7進行高效液相色譜分離和測定。結果表明，此方法屬于準確、可靠、快速、簡單的分析方法。

赤霉酸A4,A7原藥；高效液相色譜；甲醇；分析方法

1 前言

赤霉酸GA4+7屬植物生長調節劑，是GA4和GA7的混合物，在國外得到廣泛應用。它不僅能改善果蔬的品質，還能改變果形和大小，提高單果重量，從而達到顯著增產的目的。赤霉酸A4，A7原藥的ISO通用名：GibberellinA4，A7，原藥為白色結晶粉末，熔點：GA4：222oC；GA7：202oC。本文采用高效液相色譜法對赤霉酸A4，A7原藥中A4，A7進行分離和測定。

2 實驗部分

（1）實驗試劑和溶液。二次蒸餾水、甲醇（色譜純）、甲酸（分析純）、赤霉酸GA4，GA7標準品：已知質量分數≥95.0％.（GA4質量分數：63.5％；GA7質量分數：31.5％）。

（2）實驗儀器。高效液相色譜儀；可調波長紫外檢測；數據處理站；C18柱；微量進樣器：50μL；過濾器，濾膜孔直徑為0.45μm。

（3）高效液相色譜操作條件。流動相：甲醇+水+甲酸=67+33+0.05（V/V）；流速：0.7mL/min，柱溫：30oC；檢測波長：210nm，進樣體積：20μL左右，而赤霉酸GA4保留時間約9.4min，GA7保留時間約11.0min。

圖1 試樣中赤霉酸A4，A7高效液相色譜圖

（4）制備標樣溶液。稱取赤霉酸A4，A7標準品25 mg（精確到0.0002g）于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度。

（5）制備試樣溶液。稱取試樣25 mg（精確到0.0002g），于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定溶至刻度。

（6）實驗測定。在上述高效液相色譜操作條件下，等儀器基線穩定之后，連續注入數針標樣溶液，待相鄰兩針的相對響應值變化均小于1.5％時，按標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液，標樣溶液的順序進行測定。

（7）結果計算。將測得的兩針試樣溶液以及試樣溶液前后兩針標樣溶液中GA4與GA7峰面積之和分別進行平均。，按照下列公式計算試樣中赤霉酸

上述計算公式中，A1—標樣溶液中GA4、GA7的峰值面積之和平均值；A2—試樣溶液中GA4、GA7的峰值面積之和平均值；m1—標樣質量（g），m2—試樣質量（g），P—標樣溶液GA4、GA7的質量分數（％）。

3 結果分析

（1）液相色譜條件。參照赤霉酸原藥的國家標準檢測方法[1]，通過調整甲醇與水的體積比，當甲醇與水的體積比為67比33時 ，基線平穩，GA4，GA7的峰型好，避免了峰拖尾的現象，分離效果較好。

（2）標準曲線的線性分析。不同濃度梯度的GA4+7的HPLC的吸收值（見表1），以赤霉酸濃度為橫坐標，峰面積值為縱坐標繪圖，能夠得到赤霉酸線性方程y=43131x-285.74（圖2），相關系數是0.9997。

表1

圖2 赤霉酸線性圖

（3）測定方法的精密度。在上述色譜操作條件對同一樣品平行測定5次，赤霉酸 （GA4+GA7）的標準偏差是，0.38，RSD為0.4％

（4）測定方法的準確度。通過在已知含量的樣品中添加不同質量的標樣，在上述色譜操作條件下進行測定，經過計算，赤霉酸的回收率的平均值為99.45％，分析方法準確度實驗結果（見表3）。

表2

表3 分析方法精度實驗結果

4 結論

在本文的高效液相色譜的檢測條件下對赤霉酸GA4+ GA7可以準確檢測出來，分離效果好，GA4和GA7的峰型良好，保留時間穩定，操作快速、方便，而且精密度、準確度較高，和定量分析的要求一致，屬于準確、快速、簡單實用的分析方法。

[1]中國石油和化學工業協會.GB 15955-2011,赤霉酸原藥[S].北京：中國標準出版社,2011.

[2]雷琪，于福利，王玉萍.3.6％芐氨·赤霉酸可溶液劑高效液相色譜分析方法研究[J].現代農藥,2012,11（06）：20-21.

[3]戴冬艷,朱靜毅,聞琍毓.液相色譜-質譜聯用技術在藥物分析中的應用[J].天津藥學,2012,7（13）：99-100.

[4]王偉麗.高效液相色譜-質譜聯用技術在藥物分析中的應用[J].中國藥業,2009,18（14）：83-84.

赤霉酸A4，A7原藥高效液相色譜分析方法的研究

王紅亞,張 麗