香桂化濁膠囊藥效學研究*

劉紅淼，李艷玲，楊繼章，姜少灝

[1.河北醫科大學第一醫院藥劑科，石家莊 050031;2.石藥集團中奇制藥技術(石家莊)有限公司，石家莊050051;3.河北醫科大學，石家莊 050017]

香桂化濁膠囊藥效學研究*

劉紅淼1，李艷玲2，楊繼章1，姜少灝3

[1.河北醫科大學第一醫院藥劑科，石家莊 050031;2.石藥集團中奇制藥技術(石家莊)有限公司，石家莊050051;3.河北醫科大學，石家莊 050017]

目的 研究香桂化濁膠囊藥效學。方法采用體外抗真菌實驗觀察香桂化濁膠囊抗真菌作用,采用蓖麻油致小鼠腹瀉及小腸炭末模型觀察香桂化濁膠囊止瀉作用;采用角叉菜膠致大鼠足跖腫脹、大鼠棉球肉芽腫模型觀察香桂化濁膠囊抗炎作用;采用干酵母致大鼠發熱模型觀察香桂化濁膠囊解熱作用。結果香桂化濁膠囊能明顯抑制臨床株白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌和標準株白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌、煙曲霉菌、黃曲霉菌等的生長,可顯著減少蓖麻油所致小鼠腹瀉稀便灘數和排稀便動物數(P＜0.01),對小鼠小腸推進率延緩作用顯著(P＜0.01),對角叉菜膠所致大鼠足跖急性炎癥腫脹有明顯抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),對大鼠棉球肉芽腫增生無顯著影響;可顯著降低酵母所致大鼠體溫升高(P＜0.05,P＜0.01)。結論香桂化濁膠囊體外對臨床株白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌,以及標準株煙曲霉菌及黃曲霉菌均有很強的抗菌作用,且具有較好的的止瀉、抗炎、解熱等作用。

香桂化濁膠囊；抗真菌；止瀉；抗炎；解熱

香桂化濁膠囊處方為臨床應用多年的經驗方,由廣藿香、土大黃、肉桂等組成,具有芳香醒脾、清化濕濁之功效,主治各種疾病后邪留未盡、脾胃內傷所致長期大便溏泄或有黏液、腹脹腸鳴、納呆,或有低熱、舌苔白膩或白滑或見微黃,脈濡緩。主要用于慢性腸炎、真菌感染致腸炎證屬脾虛濕困的治療,療效確切。近年來,該藥的制劑工藝、質量控制和毒理學研究已有報道[1-6],為進一步研究其臨床療效,筆者在本實驗中對其進行藥效學實驗,以期為臨床應用提供藥理學依據。

1 材料與方法

1.1 試藥 香桂化濁膠囊(河北醫科大學第一醫院,批號:20110601),氟康唑膠囊(天津華津制藥有限公司,批號:111202),醋酸潑尼松(山東新華制藥股份有限公司,批號:1105242),復方地芬諾酯(北京雙鶴藥業股份有限公司,批號:110105),阿司匹林(石家莊歐意藥業有限公司,批號:110308),沙氏葡萄糖瓊脂培養基(中國食品藥品檢定研究院,批號:110824)。

1.2 菌種 臨床分離菌株來自河北醫科大學第二醫院皮膚科真菌室,均為致病性深部真菌(直接鏡檢可見大量菌絲,培養有念珠菌生長,經河北醫科大學微生物教研室鑒定,為白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌)。標準菌株購自中國醫學科學院微生物所。

1.3 實驗動物 昆明種小鼠(合格證號:1104158),清潔級SD大鼠(合格證號:1105075),均由河北醫科大學實驗動物中心提供,實驗動物許可證號:SYXK (冀)2008-0023。

1.4 體外抗真菌實驗

1.4.1 藥基配制 采用試管內藥基法,先將香桂化濁膠囊內容物用5倍0.9%氯化鈉溶液在研缽內研20 min,再與高壓滅菌后的沙氏葡萄糖瓊脂培養基趁熱(液態)充分混合,倍比稀釋成A(3.09 mg·mL-1)、B (1.545 mg·mL-1)、C(0.772mg·mL-1)、D (0.386 mg·mL-1)、E(0.193mg·mL-1)、F (0.096 mg·mL-1)、G(0.048 mg·mL-1)。氟康唑同上配制成A(2.0 mg·mL-1)、B(1.03 mg·mL-1)、C (0.515 mg·mL-1)、D(0.257mg·mL-1)、E (0.12 mg·mL-1)、F(0.064mg·mL-1)、G (0.032 mg·mL-1)濃度,分裝試管,置斜面。

1.4.2 菌種接種 挑取適量菌株,與0.9%氯化鈉溶液混合,將絲狀真菌置于研磨器中,與0.9%氯化鈉溶液混合研磨,使每亳升菌懸液含菌細胞1×105～1×106個,每個試管內接種菌懸液50 mL,每個濃度接種2管,同時用沙氏葡萄糖瓊脂培養基作對照。置36℃恒溫箱,每天觀察生長情況,分別于1,2,3周記錄,3周后最大稀釋度無菌落生長為最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)。

1.5 止瀉實驗

1.5.1 對蓖麻油所致小鼠腹瀉的影響 取小鼠50只,雌雄兼用,體質量20～24 g,隨機分為5組,每組10只。模型對照組(給予等容積純化水),香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(1,2,4 g·kg-1),陽性對照組(復方地芬諾酯0.05 g·kg-1)。均灌胃給藥,0.2 mL·(10 g)-1,qd,連續3 d。給藥后第2天禁食(不禁飲)12 h,第3天給藥后30 min,各組均灌胃給予蓖麻油0.15 mL,給蓖麻油后立即將小鼠單籠觀察,籠下墊一塊濾紙,每隔1 h換紙一次。計算小鼠每小時排稀便灘數和排稀便小鼠數,記錄5 h。采用Ridit法和Χ2統計結果,比較各組不同時間稀便灘數和排稀便小鼠數。

1.5.2 對小鼠小腸炭末推進速度的影響 取小鼠50只,體質量20～24 g,雌雄各半,隨機分為5組,每組10只。即香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(1,2, 4 g·kg-1),陽性對照組(復方地芬諾酯, 50 mg·kg-1),模型對照組(給予等容積純化水),均灌胃給藥,0.2 mL·(10 g)-1,qd,連續3 d。末次給藥后30 min,每鼠灌胃給予5%炭末-10%阿拉伯膠混懸液0.1 mL·(10 g)-1,于給予炭末后30 min處死小鼠,剖腹,自賁門至直腸末端摘出整個胃腸道,不加牽引,平鋪于玻璃板,測量炭末前沿至幽門的距離和幽門至回盲部的距離(小腸全長)。計算炭末推進率(%)。炭末推進率(%)=(炭末前沿至幽門的距離/小腸全長)×100%。采用t檢驗比較統計結果。

1.6 抗炎作用

1.6.1 對角叉菜膠所致大鼠足跖炎癥的影響 取大鼠50只,♂,體質量200～240 g,隨機分為5組,每組10只,即香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(0.5,1, 2 g·kg-1),陽性對照組(醋酸潑尼松,20 mg·kg-1),模型對照組(給予等容積純化水),均灌胃給藥, 1 mL·(100 g)-1,qd,連續7 d。末次給藥后立即用足容積法測定大鼠左后足跖體積,1%角叉菜膠0.05 mL注射于左后足跖皮下以致炎,注射后1,2,4,6 h分別測量1次左后足跖體積,對統計結果進行t檢驗[7]。

1.6.2 對大鼠棉球肉芽腫增生的影響 取大鼠50只,♂,體質量約150 g,戊巴比妥鈉淺麻醉,背位固定,下腹部去毛,常規皮膚消毒,下腹部正中切口,將兩個棉球(制備質量為30 mg的棉球,大小松緊相近、高壓滅菌,每個棉球加入氨芐西林,1 mg∶0.1 mL,烤葙50℃烤干、備用)分別植入兩側腹股溝皮下,縫合切口。手術后當天將大鼠隨機分為5組,每組10只,即香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(0.5,1,2 g·kg-1),陽性對照組(醋酸潑尼松,20 mg·kg-1),模型對照組(給予等容積純化水),均灌胃給藥,1 mL·(100 g)-1,qd,連續7 d,第8天脫臼處死,取出棉球,60℃烤箱放置12 h,精密稱質量,減去原棉球質量即為肉芽腫凈質量(mg),除以體質量,按mg·(100 g)-1表示肉芽腫系數,采用t檢驗對結果進行統計處理。

1.7 解熱作用 取雄性SD大鼠60只,體質量150～200 g。測正常體溫后,每只大鼠背部皮下注射20%干酵母混懸液,10 mL·kg-1,6 h后體溫升至高峰,取體溫升高0.8～2.2℃大鼠50只,隨機分為5組,每組10只,即香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(0.5,1,2 g·kg-1),陽性對照組(阿司匹林,0.1 g·kg-1),模型對照組(給予等容積純化水)。以上各組均灌胃給藥1次,灌胃容積為1 mL·(100 g)-1。然后測定給藥后1,2,3,4,5 h體溫,以給藥后不同時間體溫值與藥前體溫值進行配對t檢驗,判斷各組藥后體溫下降情況[7]。

2 結果

2.1 體外抗真菌實驗結果 香桂化濁膠囊對致病性念珠菌臨床株均有明顯抗菌作用,對白念珠菌抗菌作用最強(表1)。香桂化濁膠囊對念珠菌標準株抗菌作用強于念珠菌臨床株,亦強于曲霉菌(表1,2)。香桂化濁膠囊對氟康唑膠囊體外抑菌作用較差的克柔念珠菌、煙曲霉菌、黃曲霉菌有較好抑菌作用(表2)。氟康唑膠囊對白念珠菌臨床珠、標準株抗菌作用最好,但對克柔念珠菌、煙曲霉菌、黃曲霉菌的臨床株和標準株抗菌作用較差(表2)。

表1 香桂化濁膠囊對臨床株念珠菌的MIC測定結果 mg·mL-1

2.2 止瀉實驗

2.2.1 對小鼠蓖麻油瀉下模型的影響 與模型對照組比較,香桂化濁膠囊高劑量組4 h排稀便灘數和排稀便大鼠數均顯著減少(P＜0.01)。陽性對照組4 h排稀便灘數亦顯著少于模型對照組(P＜0.05)。結果見表3。

表2 香桂化濁膠囊和氟康唑對標準株與臨床株真菌MIC測定結果 mg·mL-1

2.2.2 對小鼠小腸炭末推進速度的影響 與模型對照組比較,香桂化濁膠囊各劑量組小鼠小腸炭末推進率明顯降低(P＜0.01),陽性對照組小腸推進速度顯著減慢(P＜0.01),見表4。

2.3 抗炎作用

2.3.1 對大鼠足跖角叉菜膠炎癥的影響 香桂化濁膠囊高、中劑量組連續給藥7 d,大鼠足跖急性炎癥腫脹被明顯抑制,致炎后4 h和6 h大鼠足跖體積顯著小于模型對照組(P＜0.05,P＜0.01)。陽性對照組致炎后1 h足跖腫脹被明顯抑制(P＜0.01)[8],見表5。

2.3.2 對大鼠棉球肉芽腫增生影響結果 香桂化濁膠囊0.5,1,2 g·kg-1連續給藥7 d,對大鼠棉球肉芽腫增生均無顯著影響。醋酸潑尼松可顯著降低大鼠棉球肉芽腫系數(P＜0.05),見表6。

2.4 解熱作用 香桂化濁膠囊各劑量組體溫均明顯降低,均于給藥后2 h開始降溫。陽性對照組給藥后1 h即開始降溫。模型對照組給藥后4 h體溫開始下降,見表7。

3 討論

筆者曾采用白念珠菌感染小鼠模型,考察香桂化濁膠囊體內抗菌作用。結果對白念珠菌感染小鼠無明顯保護作用,采用小鼠溶血素抗體形成實驗和用二硝基氟苯誘導小鼠遲發性變態反應實驗,考察香桂化濁膠囊對小鼠體液免疫和細胞免疫的影響。結果香桂化濁膠囊1,2,4 g·kg-1劑量組,小鼠耳腫脹度雖有降低的趨勢,但均差異無統計學意義。說明該藥對體液免疫和細胞免疫均無明顯影響。

表3 5組小鼠腹瀉情況統計結果 ±s

表3 5組小鼠腹瀉情況統計結果 ±s

與模型對照組比較,*1P＜0.01,*2P＜0.05

組別小鼠/只劑量/(g·kg-1) 1 h動物數灘數2 h動物數灘數3 h動物數灘數4 h動物數灘數5 h動物數灘數香桂化濁膠囊低劑量組10100.0±0.020.5±1.030.5±0.940.5±0.740.4±0.5中劑量組10200.0±0.030.6±1.330.4±0.730.4±0.760.7±0.7高劑量組10410.1±0.330.3±0.540.4±0.500.0±0.0*120.2±0.4陽性對照組100.0520.3±0.630.7±1.350.8±1.020.2±0.6*220.4±0.9模型對照組10…10.2±0.661.7±1.650.9±0.170.8±0.661.2±1.6

表4 香桂化濁膠囊對小鼠小腸炭末推進率的影響 ±s

表4 香桂化濁膠囊對小鼠小腸炭末推進率的影響 ±s

與模型對照組比較,*1P＜0.01

組別小鼠/只劑量/(g·kg-1)小腸總長炭末推進距離cm推進率/%香桂化濁膠囊低劑量組10144.5±3.231.9±3.971.5±4.5*1中劑量組10244.6±3.729.2±3.765.7±8.2*1高劑量組10440.7±2.624.2±3.959.5±8.9*1陽性對照組100.0543.4±4.517.8±2.841.9±4.4*1模型對照組100.040.0±2.633.7±1.984.5±6.7

表5 5組大鼠不同時間左足跖體積測定結果 mL,±s

表5 5組大鼠不同時間左足跖體積測定結果 mL,±s

與模型對照組比較,*1P＜0.05,*2P＜0.01

組別大鼠/只劑量/(g·kg-1)致炎前致炎后1 h致炎后2 h致炎后4 h致炎后6 h香桂化濁膠囊低劑量組100.51.31±0.221.86±0.282.31±0.422.34±0.522.37±0.44中劑量組1011.26±0.141.75±0.472.04±0.472.16±0.52*12.23±0.51*1高劑量組1021.25±0.071.69±0.321.99±0.342.22±0.47*12.23±0.35*2陽性對照組100.021.21±0.071.37±0.11*21.46±0.27*21.60±0.20*21.58±0.21*2模型對照組10…1.30±0.121.96±0.332.26±0.312.65±0.332.70±0.25

表6 5組大鼠棉球肉芽腫系數測定結果 ±s

表6 5組大鼠棉球肉芽腫系數測定結果 ±s

與模型對照組比較,*1P＜0.01

組別大鼠/只劑量/(g·kg-1)棉球數/個肉芽腫系數/[mg·(100 g)-1]香桂化濁膠囊低劑量組100.520 35±7中劑量組10120 31±11高劑量組10220 32±9陽性對照組100.0220 20±9*1模型對照組10…20 36±11

本研究結果表明,香桂化濁膠囊對致病性念珠菌臨床株均有明顯的抗菌作用,但對白念珠菌的抗菌作用最強;其對念珠菌標準株的抗菌作用強于念珠菌臨床株,也強于曲霉菌。尤其本品對氟康唑膠囊體外抑菌作用較差的克柔念珠菌、煙曲霉菌、黃曲霉菌有較好的抑菌作用。因此,該體外抗真菌實驗研究為香桂化濁膠囊治療真菌感染性腸炎提供了藥效學依據。

表7 5組大鼠不同時間體溫測定結果 ±s

表7 5組大鼠不同時間體溫測定結果 ±s

與本組用藥前比較,*1P＜0.05,*2P＜0.01

別大鼠/劑量/只(g·kg-1)體溫/℃用藥前用藥后1 h用藥后2 h用組正常藥后3 h用藥后4 h用藥后5 h香桂化濁膠囊低劑量組100.538.5±0.439.9±0.339.8±0.539.4±0.5*139.3±0.5*239.1±0.5*239.1±0.4*2中劑量組10138.5±0.439.9±0.239.8±0.539.3±0.7*139.2±0.7*239.1±0.5*239.1±0.5*2高劑量組10238.4±0.339.9±0.339.3±1.339.0±1.1*139.0±0.8*138.9±0.6*238.8±0.5*2陽性對照組100.138.4±0.339.9±0.338.6±0.6*238.5±0.5*238.4±0.4*238.5±0.6*238.5±0.5*2模型對照組10…38.5±0.339.9±0.540.0±0.539.6±0.439.5±0.439.3±0.5*239.0±0.3*2

香桂化濁膠囊可明顯減少蓖麻油腹瀉小鼠稀便灘數和排稀便動物數,對小鼠小腸推進率具有顯著延緩作用;本膠囊劑對大鼠足跖角叉菜膠所致急性炎癥腫脹有明顯抑制作用,但對大鼠棉球肉芽腫增生均無顯著影響;本品還可降低由酵母升高的大鼠體溫。結果表明,其對真菌感染所致的腹瀉、咳嗽、吐痰、炎癥及發熱等均有較好的作用。

臨床上由于長時間使用廣譜抗菌藥物、糖皮質激素等,導致深部真菌感染發病率較高,治療上常采用氟康唑、伊曲康唑,特別是抗真菌藥卡泊芬凈、米卡芬凈、兩性霉素B等,由于其價格昂貴、腎毒性等,在抗菌藥物的分級管理中被列入特殊使用級抗菌藥物,使其臨床應用受到一定的限制,本研究結果為開發抗深部真菌感染的中藥制劑提供了參考。

[1] 劉紅淼,姜少灝,張振杰,等.正交實驗優選香桂化濁膠囊中揮發油的包合工藝[J].中國藥房,2010,21(47):4449-4450.

[2] 劉紅淼,房桂珍,李艷玲,等.香桂化濁膠囊成型工藝研究[J].中國藥房,2011,22(11):990-991.

[3] 劉紅淼,楊繼章,王云志,等.香桂化濁膠囊質量標準研究[J].中國藥房,2011,22(27):2553-2554.

[4] 楊繼章,劉紅淼,李艷玲.肉桂油的研究進展[J].中國藥房,2011,22(27):2579-2581.

[5] 劉紅淼,楊繼章,李艷玲.HPLC法測定香桂化濁膠囊中大黃素的含量[J].中國藥房,2012,23(15):1397-1398.

[6] 劉紅淼,李艷玲,楊繼章,等.香桂化濁膠囊毒理學研究[J].醫藥導報,2013,32(2):159-162.

[7] 陳奇.中藥藥理實驗研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,1993:259,331,356,297.

[8] 王憲英,楊劼,李雪靖.骨痹寧膠囊的藥效學研究[J].醫藥導報,2010,29(4):436-438.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.014

R286;R965

A

1004-0781(2014)03-0325-04

2012-10-22

2012-12-05

*河北省中醫藥管理局科研計劃課題資助項目(2012083)

劉紅淼(1977-),男,河北巨鹿人,副主任中藥師,學士,研究方向:中藥制劑與新藥研發。電話:0311-85917269,E-mail：liu8720285@126.com。

楊繼章(1957-),男,河北邢臺人,主任藥師,教授,碩士生導師,學士,研究方向:藥物新劑型、藥物穩定性。電話:0311-85917352,E-mail：yjzh1957@163.com。