燒傷愈合膏水凝膠的制備及其指紋圖譜研究*

徐彬，陳永剛，吳金虎，鄒吉利

(1.武漢市第三醫院藥學部，武漢 430060;2.湖北中醫藥大學藥學院，武漢 430065)

燒傷愈合膏水凝膠的制備及其指紋圖譜研究*

徐彬1，2，陳永剛2，吳金虎2，鄒吉利2

(1.武漢市第三醫院藥學部，武漢 430060;2.湖北中醫藥大學藥學院，武漢 430065)

目的 制備燒傷愈合膏新劑型水凝膠,并建立水凝膠指紋圖譜。方法提取燒傷愈合膏處方成分,利用黃蓍樹膠粉制備成水凝膠,并采用Genimi-C18柱,以乙腈-0.01 moL·L-1乙酸銨溶液為流動相,檢測波長:345 nm,對10批水凝膠樣品溶液進行洗脫,建立指紋圖譜。結果制備的水凝膠效果較好,建立了同一色譜條件下水凝膠的指紋圖譜,且10批水凝膠的相似度均＞0.959 2。利用對照品比對出其中兩個峰:鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀。結論制備的水凝膠在顏色、質地、氣味、涂抹舒適度等方面均優于燒傷愈合膏,建立的水凝膠指紋圖譜相似度高,適用于其質量控制。

燒傷愈合膏；水凝膠；色譜法,高效液相；指紋圖譜

燒傷愈合膏系武漢市第三醫院自主研制的系列燒傷制劑之一,主要由黃連、乳香、沒藥、冰片等藥材粉末輔以羊毛脂、凡士林、石蠟油為基質制成的中藥軟膏劑。燒傷愈合膏治療燒傷效果較好,但在使用過程中發現其在氣味、均勻度、涂抹舒適度等方面存在缺陷,涂抹、清洗、換藥較困難,包扎后氣味難聞,給患者帶來了很大痛苦。筆者參考文獻[1-2],將燒傷愈合膏方中相關成分進行提取,并用黃蓍樹膠粉混合提取液制備成水凝膠。水凝膠不僅在氣味、質地、流動性、涂抹舒適度等方面有較大改觀,其治療燒傷的主要活性成分鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量也有較大提高。再利用高效液相色譜(HPLC)法[3-5]建立水凝膠復方指紋圖譜,為提高該制劑的質量標準、新劑型的研制、二次研究開發及后期體內藥效物質研究奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-20AT高效液相色譜儀(SPD-10A檢測器,日本島津公司),Sartorius BT-25S電子天平(德國賽得利斯公司),KQ-300E型超聲儀(中國華南超聲設備廠),HH-S2數顯恒溫水浴鍋(上海亞榮生化儀器廠)。

1.2 試藥 處方藥材赤石脂、煅石膏、枯礬、爐甘石、乳香、沒藥、黃連、冰片、黃蓍樹膠粉等由武漢市第三醫院中藥房提供,并經武漢市第三醫院藥學部吳金虎教授鑒定,藥材均符合《中華人民共和國藥典》規定;鹽酸小檗堿對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號: 110713-200911,供含量測定用);鹽酸巴馬汀對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:110732-201108,供含量測定用);乙腈,色譜純,美國Tedia公司;水為超純水,其余試劑均為分析純;燒傷愈合膏(武漢市第三醫院中藥炮制室生產,批準文號:鄂藥制字Z20082995);水凝膠(本實驗室自制)。

2 方法與結果

2.1 水凝膠的制備

2.1.1 水凝膠空白基質的制備 參考黃蓍樹膠粉使用說明書,黃蓍樹膠粉5～8 g可與100 mL水形成凝膠,故分別稱取黃蓍樹膠粉3,4,5,6,7,8,9,10 g,分別加入適量水攪拌得到水凝膠100 g,比較水凝膠效果,發現黃蓍樹膠粉6 g與水94 mL形成的凝膠質地均勻,流動性好。為方便實驗和計算,以100 g水凝膠為單位。

2.1.2 全提取制備水凝膠 取原方各單味中藥粉適量,過40目篩,提取成溶液,分別為:取黃連1.4 g,加0.5%硫酸溶液100 mL,煎煮30 min,過濾后濃縮至約40 mL;取乳香和沒藥各1.4 g混合,加入乙酸乙酯100 mL置揮發油提取器中提取2 h,提取的揮發油加入到10 mL乙醇中,再加入冰片1.1 g,混合均勻;將揮發油提取器中的藥渣置于500 mL燒杯中,再分別加入煅石膏、爐甘石、赤石脂各11.1 g和枯礬1.1 g,加水300 mL,煎煮30 min,過濾后濃縮至約40 mL。將上述溶液混合均勻,并用水加至94 mL,用氨水調節pH至5～8,再與黃蓍樹膠粉6 g混合,得到水凝膠100 g。

2.2 指紋圖譜研究

2.2.1 色譜條件 色譜條件:Gemini-C18(250 mm× 4.68 mm,5 μm);流動相為乙腈(A)-0.01 mol·L-1乙酸銨水溶液(B)梯度洗脫,洗脫程序為:0～20 min,A相由24%增加至29%、流速0.6 mL·min-1;20～40 min,A相由29%增加至33%、流速0.8 mL·min-1,進樣量25 μL。

2.2.2 溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品適量,精密稱定,置于10 mL量瓶,加甲醇至刻度得濃度0.360 mg·mL-1鹽酸小檗堿對照品溶液;取鹽酸巴馬汀對照品適量,精密稱定,置10 mL量瓶,加甲醇至刻度得到濃度為0.145 mg·mL-1的鹽酸巴馬汀對照品溶液。分別取適量鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀對照品溶液混合均勻,得到二者的混合對照品溶液。取水凝膠2 g及各單味藥材適量,分別加入甲醇100 mL,超聲提取30 min,冷卻后過濾并用甲醇定容至100 mL量瓶,得水凝膠樣品溶液和各單味藥材提取液。

2.3 檢測波長選擇 分別在220,254,270,290,330, 345 nm處對整體圖譜比較研究,發現345 nm處色譜峰峰形及分離度較好,故選擇345 nm為檢測波長。

2.4 指紋圖譜的建立及其分析 將水凝膠樣品溶液、鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀混合對照品溶液、各單味藥材提取溶液分別進樣,記錄HPLC色譜圖,見圖1。方中乳香、沒藥和冰片所含成分均為揮發性成分,爐甘石、煅石膏等均為礦物質成分,都無紫外吸收,色譜峰主要來自于黃連。按樣品溶液制備方法制備10批樣品溶液,分別進樣,進行分析和比較,共標定10個共有峰,結合鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀混合對照品可以確定9號峰為鹽酸巴馬汀,10號峰為鹽酸小檗堿,見圖2。10號峰與其他色譜峰分離良好,峰型穩定,以該峰為參照,以其保留時間和峰面積為1.0,計算10批次樣品指紋峰的相對保留時間和相對峰面積,得到指紋圖譜相對保留時間RSD為0.24%～3.08%,相對峰面積RSD為0.47%～4.21%,符合要求,見表1和表2。

圖1 水凝膠樣品、各單味藥材及混合對照品HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatograms of hydrogel,single medicine and hybrid reference substance

圖2 10批水凝膠樣品HPLC指紋圖譜9.鹽酸巴馬汀;10.鹽酸小檗堿Fig.2 HPLC fingerprints of ten batches of hydrogel samples9.palmatine chloride;10.berberine hydrochloride

2.5 相似度評價 將數據導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統matlab”軟件進行處理,得到10批水凝膠樣品共有峰的色譜圖和相似度值,從計算結果和圖譜可知,10批樣品的相似度數值分別為0.983 7, 0.986 0,0.987 8,0.993 3,0.991 4,0.973 8,0.959 2, 0.994 1,0.987 3,0.990 5,相似程度高,表明不同批次樣品之間差異較小。

2.6 水凝膠和燒傷愈合膏的比較 燒傷愈合膏100 g含有藥材粉末27 g,水凝膠100 g選擇藥材粉末40 g作為其生藥量,等量水凝膠含生藥量比燒傷愈合膏高,因此其成分中具有清熱解毒、殺菌抑菌作用的鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀含量也比燒傷愈合膏有明顯提高,且水凝膠顏色、質地、均勻度、流動性、涂抹舒適度等均優于燒傷愈合膏。

表1 10批樣品相對保留時間Tab.1 Relative retention time of ten batches of hydrogel samples min

表2 10批樣品相對峰面積Tab.2 Relative peak area of ten batches of hydrogel samples %

3 討論

鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的提取方法,文獻報道有超聲提取法、索氏提取器提取法、溫水浴加熱再結合超聲提取、鹽酸甲醇連續回流提取等。筆者按上述方法進行考察。結果表明,甲醇作溶媒,超聲提取30 min,即可完全提取。黃連提取有醇提、水提、抽提等方法,筆者在本實驗中采用0.5%硫酸溶液煎煮提取30 min,提取效果好,再用氨水調節pH到5～8,有利于皮膚吸收。分別以乙腈-水、甲醇-乙酸、乙腈-乙酸銨溶液、乙腈-醋酸銨溶液、乙腈-醋酸為流動相對全提取水凝膠樣品溶液進行梯度洗脫,發現乙腈-0.01 mol·L-1醋酸銨水溶液為流動相時出峰穩定,峰型好。燒傷愈合膏處方中大部分為礦物質成分,提取液并無紫外吸收,有紫外吸收的成分主要是黃連、乳香、沒藥、冰片。冰片、乳香、沒藥中主要為揮發性成分,在氣相色譜中另行研究,故在本實驗條件下指紋圖譜峰主要來自于黃連。

筆者在本實驗制備了燒傷愈合膏新劑型水凝膠,并利用HPLC-UV法對全提取水凝膠指紋圖譜進行初步研究,確定主要峰的歸屬,為燒傷愈合膏新劑型研制、二次開發及其體內藥效物質基礎研究奠定了基礎。

[1] 趙青青.聚合物水凝膠研究進展[J].高分子材料科學與工程,2005,21(2):27-32.

[2] 盧國東,燕青芝,宿新泰,等.多孔水凝膠研究進展[J].化學進展,2007,19(4):485-493.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:285-286.

[4] 廖慶文,樊冬麗,肖小河,等.不同黃連炮制品HPLC指紋圖譜研究[J].中國中藥雜志,2007,32(3):210-214.

[5] 楊協清,朱月琴.HPLC法測定三黃膠囊中鹽酸小檗堿含量[J].中藥材,2010,33(6):1001.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.026

Preparation and Fingerprint Studies of Hydrogel of Burn Healing Cream

XU Bin1,2,CHEN Yong-gang2,WU Jin-hu2,ZOU Ji-li2
(1.Department of Pharmacy,the Third Hospital of Wuhan,Wuhan 430060,China;2.Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065,China)

Objective To prepare the new hydrogel of burn healing cream(SSYHG)and establish its fingerprint.MethodsThe components of SSYEG were extracted,and mixed with gum tragacanth power.HPLC gradient ion was applied for the fingerprinting of the hydrogel.The Genimi-C18column was used,acetonitrile(A)-0.01 mol·L-1ammonium acetate(B)was used as mobile phases,and the detection wavelength was set at 345 nm.Ten baches of hydrogels were tested for setting up the fingerprints.ResultsThe hydrogel was producded and the fingerprints were established under the same condition.The similarity of ten batches of hydrogel samples were above 0.959 2.Two peaks corresponding to berberine hydrochloride and palmatine chloride were determined compared with the controls.ConclusionThe hydrogel is superior to SSYHG in color,odor,property and distribution. The established HPLC fingerprints show high similarity,which is suitable for quality control of SSYHG.

Burn healing cream;Hydrogels;HPLC;Fingerprint

R286;TQ460.1

A

1004-0781(2014)03-0364-04

2013-05-11

2013-06-20

*湖北省科技計劃自然科學基金資助項目(2011CDB298);武漢市人力資源與社會保障局關鍵技術攻關計劃項目(2013060602010264)

徐彬(1989-),男,湖北隨州人,在讀碩士,主要研究方向:藥劑學。E-mail：xubin870614@163.com。

陳永剛(1975-),男,湖北十堰人,副主任藥師,博士,主要研究方向:中藥資源與開發。E-mail：275502915@qq.com。