二妙丸中蒼術素含量測定

陳驕華，汪祖光，江玲興，黃傳俊

(1.湖北省陽新縣人民醫院檢驗科、藥劑科，陽新 435200;2.湖北省鄂州市中心醫院藥學部，鄂州 436000;3.湖北省中醫院藥學部，武漢 430070)

二妙丸中蒼術素含量測定

陳驕華1，汪祖光1，江玲興2，黃傳俊3

(1.湖北省陽新縣人民醫院檢驗科、藥劑科，陽新 435200;2.湖北省鄂州市中心醫院藥學部，鄂州 436000;3.湖北省中醫院藥學部，武漢 430070)

目的 建立測定二妙丸中蒼術素含量的反相高效液相色譜法。方法Agilent HC-C18Analytical(250 mm× 4.6 mm,5 μm)色譜柱;以乙腈和水梯度洗脫,流速為1.0 mL·min-1;檢測波長340 nm;柱溫30℃;進樣量10 μL。結果蒼術素在6.08～30.40 μg·mL-1濃度范圍內具有良好的線性關系,r=0.999 8,蒼術素平均回收率為99.6%,RSD= 1.9%(n=9)。結論該方法簡便,準確,重復性好,適用于二妙丸中蒼術素含量測定。

二妙丸；蒼術素；含量測定；色譜法,高效液相,反相

二妙丸收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部[1],主要由蒼術和黃柏兩味藥組成。是中醫燥濕清熱的基礎名方,主要用于治療濕熱下注、足膝紅腫熱痛、下肢丹毒、白帶、陰囊濕癢等病癥。在其藥品標準中僅采用薄層掃描色譜法測定黃柏中鹽酸小檗堿含量,國內有文獻報道用高效液相色譜法測定該藥中鹽酸小檗堿和黃柏堿含量[2-3],而對于該藥中蒼術的反相高效液相色譜法測定含量筆者未見文獻報道。筆者在本實驗中采用反相高效液相色譜梯度洗脫法測定二妙丸中蒼術素含量,該方法簡便、快速、準確,可用于二妙丸的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 戴安P680高效液相色譜儀,UVD170U檢測器(美國戴安公司),BS124S型電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司,最小精度0.1 mg)。

1.2 試藥 蒼術素對照品(批號:17-2001,上海標準化研究中心提供,含量:99.86%),二妙丸(湖南天濟草堂制藥有限公司,批準文號:國藥準字Z20053512,規格:6g×20袋,批號:10042213,10071205, 10080503)。乙腈(美國Fisher公司,色譜純)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent HC-C18Analytical (250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相:以水-乙腈為流動相進行梯度洗脫(乙腈在0～5 min為30%→35%;在5～7 min由35%→55%;在7～30 min由55%→70%;在30～45 min由70%→75%,測定波長為340 nm),流速:1.0 mL·min-1;柱溫30℃;進樣量:10 μL。在該色譜條件下,蒼術素和相鄰峰的分離度均＞1.5,理論板數按蒼術素峰計算為9 800。

2.2 溶液的制備

2.2.1 蒼術素對照品儲備溶液 取蒼術素對照品精密稱定15.2 mg,置100 mL量瓶,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。

2.2.2 供試品溶液 取本品研細,取二妙丸細粉2 g精密稱定,加甲醇100 mL超聲提取30 min,移至100 mL量瓶,定容至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。

2.2.3 陰性對照溶液 取缺蒼術的樣品,按本品制備工藝,制得陰性樣品,精密稱取陰性樣品1 g,同供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。

2.3 線性關系考察 精密量取蒼術素對照品儲備溶液2,3,5,8,10 mL置50 mL量瓶,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,制得系列對照品溶液。精密吸取系列對照品儲備溶液各20 μL注入液相色譜儀,以蒼術素對照品濃度(μg·mL-1)為橫坐標(X),其峰面積為縱坐標(Y),進行線性回歸,蒼術素標準品線性回歸方程為:Y= 2 130.4X+105.3,r=0.999 8。結果表明,蒼術素濃度在6.08～30.40 μg·mL-1內與峰面積有良好的線性關系。

2.4 精密度實驗 取同一份蒼術素對照品溶液,按含量測定方法精密吸取10 μL注入液相色譜儀,重復進樣5次,測定峰面積值,蒼術素峰面積的RSD為0.75%。結果表明該法精密度良好。

2.5 穩定性實驗 依法取同一供試品溶液,分別于1,2,4,6,8 h測定蒼術素峰面積,結果峰面積測定值基本不變,蒼術素峰面積RSD分別為0.93%,說明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

2.6 重復性實驗 取同一樣品(批號:10042213),按“2. 2.2”項制備方法平行制備5份供試品溶液,依法測定峰面積,結果每克樣品中蒼術素0.62 mg,RSD為1.0%。表明該方法具有較好的重復性。

2.7 回收率實驗 取已測含量的二妙丸(批號: 10042213)約1 g,分別精密加入蒼術素對照品儲備溶液4,5,6 mL,按供試品溶液制備方法操作,在上述色譜條件下測定含量,計算回收率,結果見表1。蒼術素平均回收率99.6%,RSD=1.9%。

表1 蒼術素回收率實驗結果 mg

2.8 樣品的含量測定 取3批樣品(批號:10042213, 10071205,10080503)按“2.2.2”項制備方法制備供試品溶液,精密吸取20 μL注入液相色譜儀,記錄峰面積。另取蒼術素對照品溶液,同法測定,按外標法以峰面積計算二妙丸樣品中蒼術素含量。結果3批樣品中蒼術素平均含量分別為0.62,0.58,0.68 mg·g-1, RSD分別為1.0%,1.4%,0.9%。

3 討論

在選擇流動相過程中,筆者曾采取甲醇-水、乙腈-水等度系統,但分離效果均不理想。經反復實驗后,發現以乙腈和水梯度洗脫時,能使蒼術素和相鄰物質得到滿意分離,保留時間合適,故擇選乙腈和水梯度洗脫。

通過對樣品提取方法進行考察,分別考查了超聲處理與加熱回流兩種提取方式。結果顯示,分別采用沸水浴上加熱回流1 h、超聲處理1 h、超聲處理30 min,3種提取方法結果相差不大(RSD=1.2%),故選擇超聲處理30 min。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:414.

[2] 張麗,潘超.高效液相色譜法同時測定二妙丸中鹽酸小檗堿和黃柏堿的含量[J].中國新藥雜志,2011,20(22): 2262-2264.

[3] 蔡俊安.高效液相色譜法測定二妙丸中鹽酸小檗堿的含量[J].中國中醫藥信息雜志,2011,18(1):55-56.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.031

R286;R927.1

A

1004-0781(2014)03-0380-02

2013-06-08

2013-07-20

陳驕華(1975-),女,湖北陽新人,主管技師,研究方向:臨床檢驗和含量檢測。電話:0714-7323372,E-mail：811405618@qq.com。

汪祖光,男,湖北陽新人,副主任藥師,研究方向:臨床藥學和藥物分析。電話:0714-7323372,E-mail：wangzuguang@sina.com。