貴州產小花清風藤不同部位槲皮素含量比較*

張敏,楊劍,韋欣,龍慶德

(1.貴陽醫學院藥學院,貴陽 550004;2.貴陽醫學院附屬醫院藥劑科,貴陽 550004)

貴州產小花清風藤不同部位槲皮素含量比較*

張敏1,楊劍1,韋欣2,龍慶德1

(1.貴陽醫學院藥學院,貴陽 550004;2.貴陽醫學院附屬醫院藥劑科,貴陽 550004)

目的 比較貴州產小花清風藤莖、葉、全株中槲皮素的含量差異。方法采用高效液相色譜法,島津WondaSil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-0.1%磷酸(55∶45)為流動相,流速1.0 mL·min-1,柱溫30℃,檢測波長360 nm。結果槲皮素在2.8～67.2 μg·mL-1與峰面積線性關系良好(r=0.999 7,n=5),小花清風藤的不同部位槲皮素的平均含量為:莖0.614 mg·g-1(RSD=1.8%)、葉2.593 mg·g-1(RSD=2.3%)、全株1.995 mg·g-1(RSD= 1.8%);槲皮素在莖、葉、全株不同部位的加樣回收率分別為101.5%(RSD=1.06%)、101.0%(RSD=1.83%)、107.8% (RSD=1.59%)。結論該方法簡便,準確,可靠。貴州產小花清風藤不同部位斛皮素的含量葉＞全株＞莖。

小花清風藤,貴州產;槲皮素;含量測定

小花清風藤(Sabia parvifloraWall.ex Roxb)為清風藤科清風藤屬的常綠木質藤本。貴州產小花清風藤為布依族、苗族的民間藥,有清熱利濕、祛風鎮痛的功效,民間常用其根莖入藥治療急性黃疸性肝炎和風濕勞傷[1]。槲皮素作為小花清風藤中有效成分之一,具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抗血小板聚集和清除自由基等多種生物活性[2]。因此,筆者采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法測定貴州產小花清風藤中槲皮素的含量,并對其莖、葉、全株不同部位的槲皮素含量進行比較。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(Agilent1100)。槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:100081-200907),小花清風藤原材采自貴州望謨,經貴陽醫學院生藥學教研室龍慶德副教授鑒定為清風藤屬植物小花清風藤(Sabia parvifloraWall.ex Roxb)。甲醇(色譜純),水為超純水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:島津WondaSil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸(55∶45);檢測波長:360 nm;柱溫:30℃;流速: 1 mL·min-1;進樣量:10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對照品適量,置25 mL量瓶中,用甲醇溶解并定容,制成濃度為0.224 0 mg·mL-1的槲皮素對照品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 分別精密稱取小花清風藤莖、葉、全株細粉1 g,置于圓底燒瓶中,加入甲醇50 mL搖勻,再加入35%鹽酸5 mL,水浴加熱回流提取2 h,抽濾,取濾液至50 mL量瓶,用甲醇定容,搖勻即得[3]。

2.4 系統適應性實驗 分別精密取對照品溶液和樣品溶液,按照“2.1”項色譜條件進樣分析,記錄色譜圖,結果見圖1。

2.5 線性關系考察 精密量取“2.2”項對照品溶液分別取1.25,2.5,5,10,30 mL用甲醇定容至100 mL量瓶,得到濃度為2.8,5.6,11.2,22.4,67.2 μg·mL-1的對照品溶液,按上述色譜條件分別進樣10 μL,測定對照品峰面積,以峰面積為縱坐標,槲皮素對照品溶液濃度為橫坐標進行線行回歸,得回歸方程Y=46.722X-32.465,r=0.999 7(n=5)。結果顯示槲皮素在2.8～67.2 μg·mL-1與峰面積呈良好線性關系。

2.6 精密度實驗 取同一樣品溶液,重復進樣5次,每次10 μL,測定槲皮素的峰面積,RSD為1.01%(n= 5)。

2.7 穩定性實驗 取同一樣品溶液,按上述色譜條件分別在0,2,4,6,12 h進樣,每次10 μL,以槲皮素峰面積計算RSD為1.09%(n=5),結果表明樣品溶液在12 h內穩定性良好。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的同一批次藥材莖、葉、全株0.5 g各3份,分別加入槲皮素對照品0.300,1.300,1.100 mg,按“2.3”項樣品溶液的方法制備,測得小花清風藤不同部位槲皮素含量,計算回收率。結果見表1。

2.9 樣品含量測定 取3個批次的小花清風藤藥材的莖、葉、全株4份樣品,按供試品溶液的制備方法制備,依法測定含量,結果見表2。

圖1 槲皮素對照品和小花清風藤葉HPLC圖

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表1 槲皮素加樣回收實驗測定結果

表2 小花青風藤藥材不同部位槲皮素含量測定(n=4)

3 討論

本實驗中先后選擇乙腈-0.5%磷酸溶液,甲醇-水溶液及甲醇-0.1%磷酸溶液等流動相,最后根據分離情況確定采用甲醇-0.1%磷酸溶液(55∶45)作為流動相,該條件下的線性關系、精密度、穩定性及回收率均良好,方法操作簡便,準確性好。小花清風藤的不同部位斛皮素含量不同:葉＞全株＞莖,為入藥部位的選用和藥效學研究提供參考。

[1] 劉易蓉,梁光義,張永萍.高效液相色譜法測定小花清風藤中槲皮素的含量[J].貴州醫藥,2006,30(4):363-364.

[2] 舒毅,譚陶,張思宇,等.槲皮素的藥理學研究進展[J].華西藥學雜志,2008,23(6):689-691.

[3] 劉易蓉,梁光義,張永萍.小花清風藤中槲皮素的提取工藝研究[J].貴州醫藥,2006,30(6):566-567.

DOI 10.3870/yydb.2014.10.034

R282.71

B

1004-0781(2014)10-1379-02

2013-10-22

2013-12-27

*貴州省科學技術廳科技計劃基金(黔科合ZY [2011]3009號)

張敏(1974-),女,浙江寧波人,高級實驗師,學士,從事藥物質量控制研究。電話:0851-6908568,E-mail:gyzm777@163.com。

龍慶德(1963-),男,貴州天柱人,副教授,學士,從事藥用植物學和生藥學。電話:0851-6908568,E-mail:longqd2007@126.com。