貴州產(chǎn)小花清風藤不同部位槲皮素含量比較*

張敏,楊劍,韋欣,龍慶德

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,貴陽 550004;2.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科,貴陽 550004)

貴州產(chǎn)小花清風藤不同部位槲皮素含量比較*

張敏1,楊劍1,韋欣2,龍慶德1

(1.貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,貴陽 550004;2.貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科,貴陽 550004)

目的 比較貴州產(chǎn)小花清風藤莖、葉、全株中槲皮素的含量差異。方法采用高效液相色譜法,島津WondaSil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-0.1%磷酸(55∶45)為流動相,流速1.0 mL·min-1,柱溫30℃,檢測波長360 nm。結(jié)果槲皮素在2.8～67.2 μg·mL-1與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 7,n=5),小花清風藤的不同部位槲皮素的平均含量為:莖0.614 mg·g-1(RSD=1.8%)、葉2.593 mg·g-1(RSD=2.3%)、全株1.995 mg·g-1(RSD= 1.8%);槲皮素在莖、葉、全株不同部位的加樣回收率分別為101.5%(RSD=1.06%)、101.0%(RSD=1.83%)、107.8% (RSD=1.59%)。結(jié)論該方法簡便,準確,可靠。貴州產(chǎn)小花清風藤不同部位斛皮素的含量葉＞全株＞莖。

小花清風藤,貴州產(chǎn);槲皮素;含量測定

小花清風藤(Sabia parvifloraWall.ex Roxb)為清風藤科清風藤屬的常綠木質(zhì)藤本。貴州產(chǎn)小花清風藤為布依族、苗族的民間藥,有清熱利濕、祛風鎮(zhèn)痛的功效,民間常用其根莖入藥治療急性黃疸性肝炎和風濕勞傷[1]。槲皮素作為小花清風藤中有效成分之一,具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抗血小板聚集和清除自由基等多種生物活性[2]。因此,筆者采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法測定貴州產(chǎn)小花清風藤中槲皮素的含量,并對其莖、葉、全株不同部位的槲皮素含量進行比較。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(Agilent1100)。槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:100081-200907),小花清風藤原材采自貴州望謨,經(jīng)貴陽醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室龍慶德副教授鑒定為清風藤屬植物小花清風藤(Sabia parvifloraWall.ex Roxb)。甲醇(色譜純),水為超純水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:島津WondaSil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸(55∶45);檢測波長:360 nm;柱溫:30℃;流速: 1 mL·min-1;進樣量:10 μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對照品適量,置25 mL量瓶中,用甲醇溶解并定容,制成濃度為0.224 0 mg·mL-1的槲皮素對照品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 分別精密稱取小花清風藤莖、葉、全株細粉1 g,置于圓底燒瓶中,加入甲醇50 mL搖勻,再加入35%鹽酸5 mL,水浴加熱回流提取2 h,抽濾,取濾液至50 mL量瓶,用甲醇定容,搖勻即得[3]。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性實驗 分別精密取對照品溶液和樣品溶液,按照“2.1”項色譜條件進樣分析,記錄色譜圖,結(jié)果見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2”項對照品溶液分別取1.25,2.5,5,10,30 mL用甲醇定容至100 mL量瓶,得到濃度為2.8,5.6,11.2,22.4,67.2 μg·mL-1的對照品溶液,按上述色譜條件分別進樣10 μL,測定對照品峰面積,以峰面積為縱坐標,槲皮素對照品溶液濃度為橫坐標進行線行回歸,得回歸方程Y=46.722X-32.465,r=0.999 7(n=5)。結(jié)果顯示槲皮素在2.8～67.2 μg·mL-1與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度實驗 取同一樣品溶液,重復(fù)進樣5次,每次10 μL,測定槲皮素的峰面積,RSD為1.01%(n= 5)。

2.7 穩(wěn)定性實驗 取同一樣品溶液,按上述色譜條件分別在0,2,4,6,12 h進樣,每次10 μL,以槲皮素峰面積計算RSD為1.09%(n=5),結(jié)果表明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的同一批次藥材莖、葉、全株0.5 g各3份,分別加入槲皮素對照品0.300,1.300,1.100 mg,按“2.3”項樣品溶液的方法制備,測得小花清風藤不同部位槲皮素含量,計算回收率。結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測定 取3個批次的小花清風藤藥材的莖、葉、全株4份樣品,按供試品溶液的制備方法制備,依法測定含量,結(jié)果見表2。

圖1 槲皮素對照品和小花清風藤葉HPLC圖

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表1 槲皮素加樣回收實驗測定結(jié)果

表2 小花青風藤藥材不同部位槲皮素含量測定(n=4)

3 討論

本實驗中先后選擇乙腈-0.5%磷酸溶液,甲醇-水溶液及甲醇-0.1%磷酸溶液等流動相,最后根據(jù)分離情況確定采用甲醇-0.1%磷酸溶液(55∶45)作為流動相,該條件下的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性及回收率均良好,方法操作簡便,準確性好。小花清風藤的不同部位斛皮素含量不同:葉＞全株＞莖,為入藥部位的選用和藥效學(xué)研究提供參考。

[1] 劉易蓉,梁光義,張永萍.高效液相色譜法測定小花清風藤中槲皮素的含量[J].貴州醫(yī)藥,2006,30(4):363-364.

[2] 舒毅,譚陶,張思宇,等.槲皮素的藥理學(xué)研究進展[J].華西藥學(xué)雜志,2008,23(6):689-691.

[3] 劉易蓉,梁光義,張永萍.小花清風藤中槲皮素的提取工藝研究[J].貴州醫(yī)藥,2006,30(6):566-567.

DOI 10.3870/yydb.2014.10.034

R282.71

B

1004-0781(2014)10-1379-02

2013-10-22

2013-12-27

*貴州省科學(xué)技術(shù)廳科技計劃基金(黔科合ZY [2011]3009號)

張敏(1974-),女,浙江寧波人,高級實驗師,學(xué)士,從事藥物質(zhì)量控制研究。電話:0851-6908568,E-mail:gyzm777@163.com。

龍慶德(1963-),男,貴州天柱人,副教授,學(xué)士,從事藥用植物學(xué)和生藥學(xué)。電話:0851-6908568,E-mail:longqd2007@126.com。