鄂西北地區不同采收期竹葉柴胡中柴胡多糖含量變化*

葉方,楊光義,杜士明,王剛,杜婷,孫榮進

(1.湖北醫藥學院附屬太和醫院藥學部,十堰 442000；2.湖北醫藥學院藥學院,十堰 442000)

鄂西北地區不同采收期竹葉柴胡中柴胡多糖含量變化*

葉方1,楊光義1,杜士明1,王剛1,杜婷1,孫榮進2

(1.湖北醫藥學院附屬太和醫院藥學部,十堰 442000；2.湖北醫藥學院藥學院,十堰 442000)

目的 以鄂西北地區竹葉柴胡為樣本,研究柴胡多糖的動態變化規律,探討該地區竹葉柴胡最佳采收期。方法采用蒽酮-硫酸比色法,檢測波長620 nm,分別測定柴胡中可溶性多糖和粗多糖,計算總多糖含量。結果不同采收期竹葉柴胡中柴胡多糖含量為9.642%～15.479%,具有明顯差異,總多糖含量在11月底種子成熟時最高。結論鄂西北地區竹葉柴胡的最適采收期為每年11月底。

竹葉柴胡,鄂西北;多糖;采收期

柴胡是傳統大宗藥材,《中華人民共和國藥典》只收載了傘形科植物北柴胡(BupLeurum chineseDC.)或狹葉柴胡(BupLeurum scorzonerifo Liumwilld.)的干燥根,但竹葉柴胡(BupLeurum marginatumWall.ex DC.)也作為柴胡市場上第三大藥材來源廣泛應用[1-2]。鄂西北地區所產竹葉柴胡因質量較優而暢銷國內外[3],說明鄂西北地區的氣候條件適合該植物生長,有利于在本地區發展符合《中藥材生產質量管理規范》(Good Agricultural Practices,GAP)的種植。而確定最佳采收期是GAP種植的關鍵技術,筆者以柴胡多糖為指標考察其在不同生長周期累積情況,為建立柴胡GAP種植的關鍵技術提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TU-1901型雙光束紫外-可見光分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；FA2004型電子天平(上海精科公司)；CQX25-06型超聲波震蕩器(上海必能信超聲有限公司)。

1.2 試藥 柴胡樣品經湖北中醫藥大學中藥資源和中藥復方教育部重點實驗室陳科力教授鑒定為竹葉柴胡(BupLeurum marginatumWall.ex DC.)。樣品在陽光下曬干后打粉,過孔徑0.25 mm(四號)篩備用。無水葡萄糖(天津市科密歐化學試劑開發中心,批號: 20020128,含量99.2%)；蒽酮、濃硫酸、鹽酸等試劑均為分析純,水為自制純化水。

2 方法與結果

2.1 樣品溶液的制備

2.1.1 可溶性多糖的提取 精密稱取60℃干燥至恒質量的竹葉柴胡粉末1 g,置具塞三角燒瓶中,加入82%乙醇溶液45 mL浸泡30 min后超聲提取30 min兩次,過濾,合并兩次濾液于100 mL量瓶中,加82%乙醇溶液定容,備用[4]。保留濾渣備用。

2.1.2 粗多糖的提取 將“2.1.1”項中的濾渣60℃烘干,加入2%鹽酸溶液45 mL,100℃水浴提取兩次,每次1 h,冷卻后過濾。合并兩次濾液至100 mL量瓶中,以2%鹽酸溶液定容,備用。

2.2 對照品溶液的制備 取無水葡萄糖于60℃烘1 h,再逐漸升溫至105℃干燥至恒質量。精密稱取干燥恒質量的無水葡萄糖10.3 mg置100 mL量瓶中,用純化水溶解并定容至刻度,作為對照品溶液貯備液。

2.3 顯色劑的制備 稱取蒽酮0.2 g,置100 mL量瓶中,逐漸加入濃硫酸至刻度,邊加邊攪拌使蒽酮充分溶解,作為顯色劑備用(需用前現配)。

2.4 線性關系考察 分別精密量取“2.2”項中的對照品貯備液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL置于具塞試管中,以純化水補足1.0 mL后每支試管中加入蒽酮-硫酸5.0 mL,迅速搖勻,暗處放置30 min待溶液完全冷確后于620 nm處測定吸光度,記錄數據,以無水葡萄糖的質量X(mg)為橫坐標,以吸光度(A)為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程:A=5.887 5X-0.022 2,r=0.995 7,說明無水葡萄糖在0.021～0.103 mg范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗 取含量測定項下同一供試品溶液,連續測定6次,記錄吸光度,得RSD為1.59%,表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性實驗 取含量測定項下同一供試品溶液,分別于0,15,30,60,120,180 min測定吸光度,結果RSD為1.82%,表明供試品溶液在3 h內穩定。

2.7 重復性實驗 精密稱取9月采集的竹葉柴胡粉末6份,每份1.0 g,按“2.1”項樣品提取方法處理,提取可溶性多糖和粗多糖,測定吸光度,結果可溶性多糖和粗多糖的RSD分別為1.73%,1.96%,表明方法重復性較好。

2.8 加樣回收率實驗

2.8.1 可溶性多糖加樣回收率實驗 精密稱取已知可溶性多糖含量的9月采集的竹葉柴胡粉末6份,每份1.0 g,置具塞錐形瓶按“2.1.1”項方法處理,樣品提取后于濾液中分別精密加入6.03 mg·mL-1葡萄糖對照品溶液4 mL,以82%乙醇定容后,按“2.4”項操作,計算可溶性多糖含量和回收率,結果平均回收率為97.65%,RSD=2.13%,見表1。

2.8.2 粗多糖加樣回收率實驗 取“2.1.1”項濾渣按“2.1.2”項方法處理,樣品提取后于濾液中分別精確加入19.02 mg·mL-1葡萄糖對照品溶液5 mL,以2%鹽酸定容至100 mL,混勻,從中精密量取2 mL稀釋至50 mL,測定吸光度,計算粗多糖加樣回收率,結果粗多糖平均回收率為98.04%,RSD=1.29%。見表2。

表1 可溶性多糖的加樣回收實驗Tab.1 Recovery test of the soluble polysaccharide

表2 粗多糖的加樣回收實驗Tab.2 Recovery test of the crude polysaccharide

2.9 含量測定

2.9.1 可溶性多糖的含量測定 精密量取“2.1.1”項可溶性多糖提取液5.0 mL加82%乙醇稀釋至25 mL量瓶中,混勻后,從中精密量取1.0 mL加入具塞試管中,再加入顯色劑蒽酮-濃硫酸試劑5.0 mL,迅速混勻,避光放置30 min,冷卻至室溫,以82%乙醇為空白,在波長620 nm處測定吸光度,計算可溶性多糖含量。

2.9.2 粗多糖的含量測定 取“2.1.2”項粗多糖提取液2.5 mL置25 mL量瓶中,加2%鹽酸定容至刻度,混勻后,精密移取1.0 mL至具塞試管中,再加入蒽酮-濃硫酸試劑5.0 mL,迅速混勻,避光放置30 min,冷卻至室溫,以2%鹽酸溶液為空白,于波長620 nm處測定吸光度,記錄數據,結果見表3。

可見,柴胡中可溶性多糖、粗多糖的動態變化規律基本一致,從春末到秋季,柴胡多糖含量呈上升趨勢[5],到種子成熟、地上部分枯萎,根部開始發出越冬芽時多糖含量又開始下降。

3 討論

對鄂西北地區竹葉柴胡不同采收期多糖含量動態積累規律分析表明,水溶性多糖含量呈持續上升趨勢；粗多糖在7月底含量反而下降,隨后又明顯上升,直到11月種子完全成熟,地上部分開始枯萎,至12月從根部發出越冬芽,多糖含量又開始緩慢下降,但仍然高于春末夏初柴胡中多糖含量,說明從柴胡多糖的角度,種植基地竹葉柴胡最佳采收期是在種子成熟以后。

表3 不同采收期柴胡中柴胡多糖含量測定結果Tab.3 Content determination of polysaccharides from Bupleurum at various collecting %

對柴胡生長的物候學觀察發現:同一地域,不同產區種植的柴胡生長周期也有明顯差別,十堰城區湖北醫藥學院百草園種植的竹葉柴胡生長周期比房縣柴胡種植示范基地中種植的柴胡提前1個月。種植時間不同、每年氣候差異也會影響其生長周期,所以應根據時間結合生命周期確定柴胡最佳采收期。

前期實驗表明,按照《中華人民共和國藥典》控制柴胡質量方法測定不同采收期柴胡皂苷a、d含量,結果在7月柴胡皂苷a、d含量達最高值,隨后呈下降趨勢[5],與本實驗中測量柴胡多糖走勢相反,說明柴胡在生長過程中,不同成分動態累積過程并不一致,可能會發生相互轉化,也說明采收藥材的最佳時期還應結合用藥目的確定。

[1] 中藥辭海編委會.中藥辭海[M].北京:中國醫藥科技出版社,1996:2035.

[2] 肖培根.新編中藥志(第一卷)[M].北京:化學工業出版社,2002:784.

[3] 杜士明,葉方,楊光義,等.鄂西北地區柴胡資源調查研究[J].中藥材,2012,35(6):866-869.

[4] 葉方,楊光義,杜士明,等.鄂西北地區不同生長條件和品種柴胡中多糖含量比較研究[J].醫藥導報,2012,31 (10):1268-1270.

[5] 蔡華,杜士明,葉方,等.鄂西北地區竹葉柴胡不同采收期柴胡皂苷a、d含量動態積累研究[J].現代中藥研究與實踐,2014,28(1):17-19.

DOI 10.3870/yydb.2014.09.030

Content Variation of Bupleurum Polysaccharides from Bupleurum marginatum at Different Collecting Periods in Northwest of Hubei Province

YE Fang1,YANG Guang-yi1,DU Shi-ming1,WANG Gang1,DU Ting1,SUN Rong-jin2
(1.Department of Pharmacy,Taihe Hospital Affiliated with Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China;2.School of Pharmacy,Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China)

Objective To study the dynamic change of polysaccharides fromBupleurum marginatumin Northwest ofHubeiprovince,and to explore the optimal harvest period forBupleurum marginatum.MethodsThe contents of soluble and crudeBupleurumpolysaccharides were determined by anthrone-sulphuric acid colorimetric method and detected at 620 nm,and total polysaccharide content was calculated.ResultsThe content of polysaccharides at various collecting periods was very different from 9.642%to 15.479%,and reached the highest level in November when the seed comes to mature. ConclusionThe optimal harvest period forBupleurum marginatumin Northwest ofHubeiis at the end of November.

Bupleurum marginatumWall.ex DC.;Northwest ofHubeiprovince;Polysaccharides;Collecting periods

R282.71；R927.2

B

1004-0781(2014)09-1219-03

2013-09-20

2014-03-30

*科技部2010年度科技型中小企業技術創新基金資助項目(10C26214204534)；湖北省2011年計劃項目(2011JA-2013CXTT09)

葉方(1971-),男,湖北十堰人,副主任藥師,副教授,學士,從事醫院藥學工作。電話:0719-8801393,E-mail:yxwen8801129@sina.com。

楊光義(1975-),男,湖北十堰人,副教授,副主任藥師,博士,主要研究方向:中藥資源開發和新藥研究。電話:0719-8801393,E-mail:ygy996@163.com。