金茵清熱口服液穩定性考察

劉澤干,黃良永,朱海濤,杜士明

(1.湖北中醫藥大學藥學院,武漢 430065;2.湖北醫藥學院附屬太和醫院藥學部,十堰 442000)

金茵清熱口服液穩定性考察

劉澤干1,黃良永2,朱海濤2,杜士明2

(1.湖北中醫藥大學藥學院,武漢 430065;2.湖北醫藥學院附屬太和醫院藥學部,十堰 442000)

目的 考察金茵清熱口服液的穩定性。方法依據《藥物制劑穩定性實驗指導原則》,觀察金茵清熱口服液的性狀、pH、相對密度,采用高效液相色譜(HPLC)法測定樣品中梔子苷、綠原酸、丹酚酸B在實驗條件下的含量變化,色譜條件:AtlantisT3色譜柱(150 mm×4.6 mm,3 μm),流動相A:0.05%磷酸溶液,流動相B:乙腈,梯度洗脫,流速: 0.8 mL·min-1,柱溫:35℃,檢測波長:254 nm。結果影響因素實驗和加速實驗中口服液的性狀、pH和相對密度均未發生明顯變化,而藥效成分梔子苷、綠原酸、丹酚酸B的平均含量隨存放時間的延長出現不同程度的降低。結論光照和高溫對金茵清熱口服液的穩定性有一定影響。

金茵清熱口服液;穩定性;影響因素實驗;加速實驗

金茵清熱口服液是湖北醫藥學院附屬太和醫院協同湖北中醫藥大學聯合研制的中藥復方制劑,處方由金銀花、茵陳、大黃、梔子、連翹、黃芪、丹參、甘草8味中藥組成。臨床主要用于治療感染、創傷、腸源性內毒性移位和功能性病變引起的內毒素血癥[1]。為考察金茵清熱口服液的穩定性,筆者依據《中華人民共和國藥典》2010年版二部《藥物制劑穩定性實驗指導原則》,通過影響因素實驗、加速實驗,觀察金茵清熱口服液的性狀、pH、相對密度、有效成分含量的變化評價制劑的穩定性[2-3],以期為工藝改進、質量控制、包裝材料選擇、運輸儲存條件的設定等后續研究提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 DIONEEX Ultimate3000高效液相色譜儀(美國戴安公司);變色龍色譜工作站(美國戴安公司);PHSJ-4A pH計(上海雷磁儀器公司);微電腦光照箱(型號:SPX-2501-G,上海博訊實業有限公司);隔水式恒溫箱(型號:PYX-DHS,上海醫療器械七廠); UP5200H超聲清洗機(熊貓集團電子計量有限公司); AUW120D電子分析天平(十萬分之一,日本島津公司);比重瓶(上海崇明建設玻璃儀器廠)。

1.2 試藥 綠原酸對照品(批號:110753-200413,含量>99.9%)、梔子苷對照品(批號:10749-200714,含量>99.9%)、丹酚酸B對照品(批號:11562-201110,含量:98.0%)均購于中國食品藥品檢定研究院。金茵清熱口服液(湖北醫藥學院附屬太和醫院自制,規格:每支10 mL,批號:20120220,20120425,20120820, 20120912)。試劑均為色譜純;水為超純水。

2 方法與結果

2.1 測定方法

2.1.1 性狀、pH、相對密度測定 參照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅶ,在自然光條件下白色背景中通過肉眼直接觀察口服液性狀;使用酸度計測量口服液pH;采用比重瓶法測定口服液的相對密度。

2.1.2 含量測定

2.1.2.1 色譜條件 AtlantisT3色譜柱(150 mm× 4.6 mm,3 μm),流動相A:0.05%磷酸溶液,流動相B:乙腈,按表1梯度洗脫,流速:0.8 mL·min-1,柱溫: 35℃,檢測波長:254 nm,理論板數以梔子苷峰計應不低于5 000。

表1 洗脫梯度Tab.1 Gradient elution %

2.1.2.2 樣品溶液的制備 對照品溶液的配制:取干燥至恒重的梔子苷對照品16.42 mg,綠原酸對照品12.80 mg,丹酚酸B對照品13.01 mg精密稱定,分別置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,得梔子苷貯備液1.642 mg·mL-1、綠原酸貯備液1.28 mg·mL-1、丹酚酸B貯備液1.301 mg·mL-1,再分別取3種對照品貯備溶液各1 mL,加甲醇稀釋至5 mL,即得混合對照品溶液。

供試品溶液的配制:取金茵清熱口服液5支,混合均勻,精密量取2 mL,置50 mL量瓶,加甲醇至刻度,搖勻,取適量用0.2 μm孔徑濾膜過濾,取續濾液,即得供試品溶液。

2.1.2.3 標準曲線的繪制 分別精密量取混合對照品貯備液5.0,2.0,1.5,1.0,0.5,0.2,0.1 mL置于5 mL量瓶,加甲醇稀釋成含梔子苷328.4,131.36,98.52, 65.68,32.84,13.136,9.852 μg·mL-1;含綠原酸256, 102.4,76.8,51.2,25.6,10.24,7.68 μg·mL-1;含丹酚酸B 260.2,104.08,52.04,26.03,10.408, 7.806 μg·mL-1的系列對照品溶液,經孔徑0.2 μm濾膜過濾,精密取20 μL,注入色譜儀檢測,以對照品質量(μg)為橫坐標(X),峰面積為縱坐標(Y),繪制標準曲線,經線性回歸,得標準曲線方程為:Y梔子苷= 27.519 9X梔子苷-0.054 8,r=0.999 9,線性范圍0.197 1～6.568 μg;Y綠原酸=18.089 5X綠原酸-1.142 6,r=0.999 8,線性范圍0.153 6～5.120 0 μg;Y丹酚酸B= 12.613 4X丹酚酸B-1.752 1,r=0.999 7,線性范圍0.156 1～5.204 0 μg。

2.1.2.4 系統適應性實驗 取“2.1.2.3”項梔子苷對照品溶液(98.52 μg·mL-1)、綠原酸對照品溶液(76.8 μg·mL-1)、丹酚酸B對照品溶液(52.04 μg·mL-1)混合對照品溶液20 μL,在“2.1.2.1”項色譜條件下,連續進樣5次,記錄3種成分的峰面積,并計算5個峰面積值的RSD。結果梔子苷峰面積的RSD為0.19%,綠原酸峰面積的RSD為0.23%,丹酚酸B峰面積的RSD為0.64%。表明色譜系統的重復性能夠滿足當前分析的要求。

2.1.2.5 重復性實驗 取同一批號的樣品(批號: 20120425),按照“2.1.2.2”項方法,制備6份供試品溶液,按“2.1.2.1”色譜條件進行含量測定,以外標法計算3種成分的含量。結果梔子苷平均含量為4.23 mg·mL-1,RSD為0.80%;綠原酸平均含量為3.47 mg·mL-1,RSD為0.97%;丹酚酸B平均含量為2.09 mg·mL-1,RSD為1.02%。表明該測定方法重復性較好。

2.1.2.6 加樣回收實驗 精密量取6份已知含量的樣品(批號:20120425)各2 mL,分別精密加入“2.1.2.2”項下3種成分對照品貯備液各2 mL;按“2.1.2.1”色譜條件測定樣品中梔子苷、綠原酸、丹酚酸B含量,計算加樣回收率。結果梔子苷平均回收率98.43%,RSD為0.10%;綠原酸的平均回收率為97.72%,RSD為1.12%;丹酚酸的平均回收率為97.08%,RSD為1.38%。

2.1.2.7 穩定性實驗 取同一供試品溶液,分別于配制后0,2,4,8,10,24 h進樣分析,測定峰面積。結果梔子苷、綠原酸、丹酚酸B峰面積的RSD分別為1.13%, 0.89%,1.34%,表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.1.2.8 含量測定 取各實驗條件下的供試品適量,按“2.1.2.2”項,制成供試品溶液,在“2.1.2.1”項色譜條件下,取對照品混合溶液和樣品溶液各20 μL,進樣,測定3種成分的峰面積,以外標法計算梔子苷、綠原酸、丹酚酸B的含量。

2.2 影響因素實驗

2.2.1 影響因素實驗方法

2.2.1.1 高溫實驗 取供試品(批號:20120220)20支,除去包裝紙,(60±2)℃恒溫箱放置10 d,分別于第0,第5,第10天各取5支,按穩定性重點考察項目(性狀、相對密度、pH、含量)進行檢測。

2.2.1.2 強光實驗 取供試品(批號:20120220)20支,除去包裝紙,放置于光照箱內,于照度為4 500 Lx(勒克斯Luminous flux)的條件下放置10 d,分別于第0,第5,第10天各取5支,按穩定性重點考察項目(性狀、相對密度、pH、含量)進行檢測。

2.2.2 影響因素實驗結果 在強光和高溫的影響下,金茵清熱口服液性狀、pH、相對密度未發生明顯變化,而有效成分(綠原酸、梔子苷、丹酚酸B)的含量隨存放時間的延長而明顯降低,且出現新的色譜峰。見圖1和表2。

2.3 加速實驗

2.3.1 加速實驗方法 供試品3批(批號:20120425, 20120820,20120912)不拆除包裝,放入溫度(40± 2)℃、相對濕度75%的恒溫箱中,分別于0,1,2,3,6個月取樣,按穩定性考察項目(性狀、相對密度、pH、含量)進行檢測。

2.3.2 加速實驗結果 在(40±2)℃、相對濕度75%條件下放置6個月,3批口服液的性狀、pH、相對密度均未發生明顯變化,而有效成分(綠原酸、梔子苷、丹酚酸B)的含量隨存放時間的延長而明顯降低,且3批口服液顯示相同趨勢的變化。見表3。

3 討論

1.綠原酸;2.梔子苷;3.丹酚酸B圖1 對照品和3種方法處理供試品的HPLC色譜圖1.chlorogenic acid;2.geniposide;3.salvia acid BFig.1 HPLC Chromatogram map of reference and three kinds of samples

表2 影響因素實驗結果Tab.2 Results of influence factor experiment

表3 加速實驗結果Tab.3 Results of accelerating experiment

金茵清熱口服液采用經典的水提醇沉工藝制備,可保留較全的有效成分,口服液性狀棕色澄清,并通過梔子苷、綠原酸、丹酚酸B的含量以控制口服液的質量[3]。口服液制劑進行影響因素實驗和加速實驗的目的是考察制劑處方與生產工藝及包裝條件的合理性。參照《中華人民共和國藥典》2010年版二部《藥物制劑穩定性實驗指導原則》,影響因素實驗中應考察強光、高溫和高濕對制劑穩定性的影響,因本制劑為口服液,含水量較大,因此無需考察高濕的影響。

通過影響因素實驗和加速實驗發現口服液性狀未發生變化,pH保持在4.10～4.20,相對密度在1.06～1.08,說明高溫、強光對本口服液的性狀、pH、相對密度影響不明顯;但在影響因素實驗和加速實驗中綠原酸、梔子苷、丹酚酸B的含量都有不同程度下降,上述3種成分在強光和高溫條件下容易分解,其中高溫對綠原酸和丹酚酸B的影響較大[4-5]。在一定實驗溫度下,3種有效成分含量隨著存放時間延長降低。另外,在相同的實驗時間點上溫度越高有效含量下降速度越快,在加速實驗條件下第1個月,口服液中綠原酸、梔子苷、丹酚酸B含量下降接近30%,說明高溫和強光是影響本品穩定性的主要因素,因此在提取、濃縮滅菌等生產環節需注意對溫度和時間的控制,以及運輸、存放時需注意強光和高溫對本品的穩定性影響。結合實驗結果,本課題組擬采用深棕色的玻璃瓶裝放口服液,存放陰涼處;通過進一步在常溫下進行長期穩定性實驗驗證該制劑的穩定性,并作另文報道。

研究中發現強光和高溫影響綠原酸和丹酚酸B的穩定性,另文獻報道,綠原酸易降解為奎寧酸和咖啡酸[6],丹酚酸B易降解為丹參素和咖啡酸[7];金茵清熱口服液中除綠原酸、梔子苷、丹酚酸B外,還有其他成分對本制劑的療效起著關鍵作用,這些成分在強光和高溫的條件下也可能降解,這些降解成分對本制劑的療效及毒理影響還需進一步研究。

[1] 常明向,吳梅梅,劉浩.利膽排毒口服液對大鼠膽汁及尿液中內毒素含量的影響[J].環球中醫藥,2010,3(5):349 -351.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010,附錄199-附錄201.

[3] 黃良永,鄭江萍,雷震.HPLC法同時測定利膽排毒口服液中綠原酸、梔子苷和丹酚酸B的含量[J].中國藥師, 2012,15(11):13-15.

[4] 江濱,王風云,曾元兒,等.綿茵陳藥材提取液中綠原酸穩定性影響因素考察[J].中成藥,2007,29(3):359-362.

[5] 劉東文,蔡麗云,李子鴻,等.新傷去瘀口服凍干顆粒中丹酚酸B穩定性研究[J].中藥材,2009,32(4):613-615.

[6] 康雨彤,賀金華,毛艷,等.芩榆燒傷凝膠制備工藝優選[J].醫藥導報,2013,32(8):1085-1088.

[7] 顧利紅,朱品業.日光和溫度對綠原酸供試液穩定性的影響[J].中成藥,1999,21(11):58-59.

DOI 10.3870/yydb.2014.11.028

Stability of Jinyin Qingre Oral Liquid

LIU Ze-gan1,HUANG Liang-yong2,ZHU Hai-tao2,DU Shi-ming2
(1.College of Pharmacy,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065,China;2.Department of Pharmacy,Taihe Hospital Affiliated with Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China)

ObjectiveTo investigate the stability ofjinyin qingreoral liquid.MethodsAccording to the stability test guidelines for pharmaceutical preparations,the appearance,pH and relative density ofjinyin qingreoral liquid were detected, the contents of geniposide,chlorogenic acid and salvia acid B were determined by HPLC.The chromatographic conditions were as follows:AtlantisT3 column(150 mm×4.6 mm,3 μm),mobile phase A:0.05%phosphoric acid,mobile phase B:acetonitrle, gradient elution at the flow rate of 0.8 mL·min-1,and column temperature at 35℃.The detection wavelength was set at 254 nm.ResultsThe appearance,pH,and relative density ofjinyin qingreoral liquid did not change significantly with the acceleration test,but the contents of geniposide,chlorogenic acid and salvia acid B decreased time dependently.ConclusionLight and high temperature could decrease the stability of thejinyin qingreoral liquid.

Jinyin qingreoral liquid;Stability;Stress test;Accelerated test

R286;R927.1

B

1004-0781(2014)11-1502-04

2013-09-05

2013-10-12

劉澤干(1987-),男,湖北鄂州人,在讀碩士,研究方向:藥物制劑新劑型開發及質量控制。

杜士明(1964-),男,湖北十堰人,主任藥師,碩士生導師,博士,研究方向:醫院藥學。電話:0719-8801393,E-mail:dsmch@sina.com。