高效液相色譜法鑒別史國公藥酒中羌活和紅曲的研究

姚亮元黃 云戴 波*

（1 湖南千金湘江藥業股份有限公司，湖南 株洲 412011；2 湖南省食品藥品職業學院，湖南 長沙 410128）

高效液相色譜法鑒別史國公藥酒中羌活和紅曲的研究

姚亮元1黃 云2戴 波2*

（1 湖南千金湘江藥業股份有限公司，湖南 株洲 412011；2 湖南省食品藥品職業學院，湖南 長沙 410128）

目的建立高效液相色譜法鑒別史國公酒中的羌活和紅曲的分析方法。方法采用高效液相色譜法進行檢測。結果高效液相色譜法分別成功鑒別史國公酒中的羌活和紅曲中成分，陰性無干擾。結論本法簡便、準確、精確，適用于史國公酒中的羌活和紅曲的鑒別。

史國公藥酒；羌活；紅曲；阿魏酸；洛伐他汀；高效液相色譜法

史國公藥酒又名國公酒，為骨傷科用藥。由川芎、當歸、羌活、紅曲等30味中藥材組成的復方酒劑，具有祛風除濕，活血通絡的功效。常用于風寒濕痹，骨節疼痛，四肢麻木[1]。阿魏酸是川芎、當歸和羌活中的主要成分[2-4]，洛伐他汀是紅曲中的主要成分[5]。現有標準采用理化鑒別，難以控制產品質量。由于處方藥味多，有多組不同藥材含有相同成分化合物，實驗研究，薄層鑒別相互干擾，無法將薄層鑒別用于本品中川芎、當歸、羌活等藥材的鑒別。為了更好地控制該制劑的質量，確保用藥安全、有效，提高現有的質量標準。本實驗采用了高效液相色譜法分別鑒別史國公藥酒中的羌活和紅曲，操作簡便，結果可靠。

1 材 料

1.1 儀器：Agilent 1100液相色譜儀（美國安捷倫公司，紫外檢測器，自動進樣器，色譜數據工作站）；XP205型電子分析天平（瑞士梅特勒公司）

1.2 試藥：史國公藥酒樣品9批，批號分別為20060908、20060907、20060906、060301、061101、061201、061202、20040408、20040910；阿魏酸（供含量測定用，批號：110773-9910）；洛伐他汀（供含量測定用，批號：100600-200502）；羌活對照藥材（供鑒別用，批號：120918-200406）；紅曲對照藥材（供鑒別用，批號：209641-121658）均購自中國藥品生物制品檢定所；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 羌活的鑒別

2.1.1 色譜條件：色譜柱：Agilent TC C18（250 mm×4.6 nm×5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；檢測波長：316 nm；進樣量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃。

2.1.2 溶液的配制

①供試品溶液：取本品50 mL，加乙醚50 mL，振搖提取，乙醚液加2%碳酸鈉溶液50 mL振搖提取，棄去乙醚液，堿液用稀鹽酸調節pH值至2～3，加乙醚50 mL振搖提取，乙醚液揮干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，即得。②缺羌活的陰性對照溶液：按處方稱取缺羌活的其他藥材，按制備工藝制成缺羌活的三陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。③阿魏酸對照品溶液：取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液，即得。④羌活對照藥材溶液：按處方稱取羌活對照藥材量，按制備工藝制成對照樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。

2.1.3 專屬性試驗

精密量取供試品溶液、對照品溶液、缺羌活的陰性對照溶液、羌活對照藥材溶液分別進樣。結果在供試品色譜圖中，檢出與對照品阿魏酸色譜圖相同保留時間的色譜峰2、與羌活對照藥材溶液色譜圖保留時間相同的色譜峰1和阿魏酸色譜峰2（圖1～圖3），缺當歸、川芎、羌活的陰性對照不干擾羌活的鑒別（圖4）。

圖1 阿魏酸對照溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 羌活對照藥材溶液色譜圖

圖4 缺羌活的陰性對照溶液色譜圖

2.1.4 樣品測定

分別取對照品溶液、供試品溶液和羌活對照藥材溶液依法進樣測定。結果均檢出與對照品色譜圖、羌活色譜圖相同保留時間的色譜峰。

2.2 紅曲的鑒別

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent TC C18（250 mm×4.6 nm×5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（55∶45）；檢測波長：238 nm；進樣量：5 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃。

2.2.2 溶液的配制

①供試品溶液：取本品100 mL，用乙醚100 mL振搖提取，棄去乙醚液，水溶液蒸至近干，加硅藻土4 g及丙酮適量（5～10 mL）攪拌成小顆粒狀，置錐形瓶中，加丙酮80 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇5 mL溶解，即得。②對照品溶液：取洛伐他汀對照品，加甲醇制成每1 mL含4 μg的溶液，即得。③紅曲對照藥材溶液：按處方稱取紅曲對照藥材量，按制備工藝制成對照樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。④缺紅曲的陰性對照溶液：按處方稱取缺紅曲的其他藥材，按制備工藝制成缺紅曲的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。

2.2.3 專屬性試驗

精密量取供試品溶液、對照品溶液、缺紅曲的陰性對照溶液分別進樣。結果在供試品色譜圖中，有洛伐他汀對照品、紅曲對照藥材色譜峰保留時間相同的色譜峰3（圖5、6、7），缺紅曲的陰性對照無干擾（圖8）。

2.2.4 檢測限

圖5 洛伐他汀對照溶液色譜圖

圖6 供試品溶液色譜圖

圖7 紅曲對照藥材色譜圖

圖8 缺紅曲的陰性對照溶液色譜圖

精密吸取2.2.2項下的對照品溶液0.2 μL， 注入液相色譜儀，測定，洛伐他汀的檢測限（S/N≈3）為0.38ng/ mL。

2.2.5 樣品測定

分別取對照品溶液和供試品溶液依法進樣測定。結果均檢出與對照品色譜圖相同保留時間的色譜峰。

3 討 論

3.1 檢測波長的選擇

采用紫外-可見分光光度法對對照品溶液在200～400 nm紫外區進行掃描，在316 nm處阿魏酸有最大吸收，238 nm處洛伐他汀有最大吸收。并參照文獻[6-8]，最終選用316 nm處鑒別羌活，238 nm處鑒別紅曲。

3.2 流動相的選擇

實驗比較了甲醇-水系統、乙腈-水系統和甲醇-乙腈-水系統，結果確定了乙腈-0.1%磷酸為流動相，色譜峰對稱性好，基線平穩，加入磷酸鹽緩沖液，可以有效防止拖尾。且主峰與其他成分得到良好的分離，陰性樣品無干擾。

3.3 紅曲鑒別供試品溶液制備方法考察

鑒別紅曲時，實驗采用了兩種供試品溶液制備方法。結果在2.2.2項下方法制備的供試品溶液色譜圖中，洛伐他汀主峰位置附近雜質峰少，分離度好。

3.4 中藥復方制劑標準現仍多采用理化鑒定，這樣雖簡便，但終究不準確，不法商家利用同類或有相似結構或官能團也能與顯色劑發生反應的特點進行復方制劑的慘假，嚴重擾亂的中藥復方制劑市場秩序。本實驗在研究中，曾采用多種薄層色譜法鑒別羌活和紅曲，均未能排除陰性干擾。故采用高效液相色譜法對史國公藥酒中川芎和紅曲進行鑒別，陰性無干擾，操作簡便，靈敏度高，重現性好，結果準確可靠。適合用于史國公藥酒制劑的質量控制。

[1] 《衛生部藥品標準中藥成方制劑第九冊》[S].1994:62.

[2] 葉璟.川芎中主要有效成分的綜合提取分離工藝研究[J].中成藥,2009,31(2):217-220.

[3] 古麗娜,沙比爾,郭洪祝,等.HPLC法測定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸酯和異歐前胡素[J].中草藥,2006,37(6):937-940.

[4] 莊志宏,吳劍坤,陳志峰,等.不同產地當歸中中阿魏酸的含量測定[J].北京中醫藥,2011,30(8):624-625.

[5] 宋洪濤,宓鶴鳴,郭濤.中藥紅曲的研究進展[J].藥學實踐雜志,1999,17(3):172-174.

[6] 楊銀芝,周小江.婦良膠囊中阿魏酸的含量測定[J].亞太傳統醫藥, 2008,4(1):35-37.

[7] 張秀麗.HPLC法測定川芎中阿魏酸的含量[J].中國藥事,2009, 23(5):469-471.

[8] 宋更申,姜建國,高燕霞,等.HPLC法測定洛伐他汀含量的不確定度評估[J].中國當代醫藥,2010,17(13):48-49.

R282

B

1671-8194（2014）22-0087-02

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