HPLC梯度洗脫法同時測定鼻炎噴劑中3種組分的含量

呂冠欣，龔越強，嚴靜，歐景儀（.佛山市順德區藥品檢驗所，廣東 佛山 58300；.佛山市順德區桂州醫院，廣東 佛山 58300）

鼻炎噴劑是佛山市順德區桂州醫院研發的一種醫院制劑（批準文號:粵HB20111414），處方含鹽酸麻黃堿、環丙沙星、醋酸潑尼松龍等，具有抗菌、消炎、收縮血管的作用，臨床主要用于治療急慢性鼻炎、鼻黏膜腫脹等。該制劑目前的質量標準只對處方中環丙沙星進行了含量測定；筆者查閱了相關資料[1-6]，大部分資料只記載該制劑中1種成分的含量測定方法，并無3種組分同時測定的方法。為了提高制劑的質量標準，保障用藥安全、有效，本研究參考了類似的多組分同時測定的相關文獻[7-9]，建立了同時測定鼻炎噴劑中鹽酸麻黃堿、環丙沙星、醋酸潑尼松龍的高效液相色譜（HPLC）法，經方法學驗證，該方法快速、靈敏、準確、可靠，能更好地控制本品質量。

1 材料

1.1 儀器

1260 HPLC儀、G4212B二極管陣列檢測器、EZChrom色譜工作站（美國Agilent公司）；AG135型電子分析天平（德國梅特勒公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸麻黃堿對照品（批號:171241-201007，供含量測定用，純度:99.7%）、環丙沙星對照品（批號:130451-200302，供含量測定用，純度:84.9%）、醋酸潑尼松龍（批號:100012-200706，供含量測定用，純度:99.7%）均來源于中國食品藥品檢定研究院；鼻炎噴劑（順德區桂州醫院，批號:130601、130602、130605，規格:每瓶15 ml，每1 ml中含鹽酸麻黃堿、環丙沙星、醋酸潑尼松龍分別為10、5、0.5 mg）；甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:SHIMADZU Shim-pack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，4.6 μm）；流動相A:甲醇，B:乙腈，C:0.05 mol/L磷酸二氫鉀（含0.25%三乙胺，磷酸調節pH 3.0），梯度洗脫；流速:1.0 ml/min；隨梯度改變紫外檢測波長分別為207、278、247 nm；柱溫:40℃；進樣量:10 μl。理論板數按鹽酸麻黃堿、環丙沙星和醋酸潑尼松龍計分別為5995、7208、13382，拖尾因子分別為1.07、1.13、1.03，色譜峰與其他峰分離度不低于2.0。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Tab 1 Gradient elution procedure

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取對照品鹽酸麻黃堿100.23 mg、環丙沙星109.25 mg、醋酸潑尼松龍10.81 mg，分別置于100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得質量濃度分別為0.9993、0.9275、0.1078 mg/ml的對照品貯備液。分別精密量取上述貯備液10、5、5 ml置于25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取鼻炎噴劑1 ml，置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，以0.45 μm的微孔濾膜過濾，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方量取輔料，制備不含鹽酸麻黃堿、環丙沙星和醋酸潑尼松龍的陰性樣品（空白基質），按“2.3”項下方法操作制得陰性樣品溶液。

2.5 干擾試驗

取上述3種溶液進樣，結果在供試品溶液色譜圖中，在對照品色譜峰相應的位置上無吸收峰，表明空白基質中各成分對測定結果未見影響，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.鹽酸麻黃堿；2.環丙沙星；3.醋酸潑尼松龍Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative sample；1.ephedrine hydrochloride；2.ciprofloxacin；3.prednisolone acetate

2.6 線性關系考察

分別精密量取“2.2”項下對照品貯備液適量，配制成一系列不同質量濃度的標準溶液，含鹽酸麻黃堿為99.93、199.86、399.72、599.58、799.44 μg/ml，環丙沙星為46.38、92.75、185.50、278.25、371.00 μg/ml，醋酸潑尼松龍為 5.39、10.78、21.56、32.34、43.12 μg/ml，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以峰面積（A）對質量濃度（c）進行線性回歸，得回歸方程，結果見表2。

表2 3種組分的線性關系（n＝5）Tab 2 Linear ranges of 3 componments（n＝5）

2.7 精密度試驗

取同一批號（130601）的供試品溶液1份，連續進樣6次，結果鹽酸麻黃堿、環丙沙星和醋酸潑尼松龍峰面積的RSD分別為0.8%、0.8%和0.7%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.8 穩定性試驗

取同一批號（130601）的供試品溶液，分別放置0、2、4、6、8、12 h進樣測定，結果鹽酸麻黃堿、環丙沙星和醋酸潑尼松龍含量的RSD分別為0.3%、0.6%和0.8%（n＝6），表明供試品在12 h內穩定。

2.9 重復性試驗

取同一批號（130601）樣品6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，結果鹽酸麻黃堿、環丙沙星和醋酸潑尼松龍含量的RSD分別為0.9%、1.0%和1.3%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.10 回收率試驗

分別精密量取鹽酸麻黃堿、環丙沙星和醋酸潑尼松龍對照品適量，加入處方比例的陰性基質，各配制3種組分分別相當于處方量80%、100%、120%的樣品各3份，按“2.3”項下方法制備成供試品溶液，進樣測定，計算回收率，結果見表3。

表3 回收率試驗結果（n＝3）Tab 3 Results of recovery test（n＝3）

2.11 樣品含量測定

取3批樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再分別精密量取供試品溶液和混合對照品溶液注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算含量，結果見表4。

表4 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 4 Content determination of samples（n＝3）

3 討論

（1）將對照品溶液注入色譜儀，以二極管陣列檢測器在190～400 nm波長處記錄色譜圖，高效液相三維圖顯示，鹽酸麻黃堿、環丙沙星和醋酸潑尼松龍的最大吸收波長分別在207、278、247 nm，因此采用改變檢測波長的方法，使待測物質能得到最靈敏的結果。而且，在本研究的色譜條件下，鹽酸麻黃堿、環丙沙星和醋酸潑尼松龍的保留時間分別約為5、18、44 min，各峰出現間隔時間較長，能有足夠的時間使改變檢測波長后的圖譜穩定、基線漂移不明顯，因而不會影響分析結果。

（2）經前期試驗發現，流動相中水相的pH對組分的峰形有較大影響:pH過高，環丙沙星峰會產生前沿現象；pH過低，鹽酸麻黃堿峰會產生拖尾現象。經參閱相關資料[10]，最終確定pH為3.0±0.1，結果較為理想。

（3）該制劑原標準中只有環丙沙星的含量測定，處方中鹽酸麻黃堿為限用物質，應有含量標準的規定。因此，筆者建立了同時測定處方中3種組分的含量測定方法，結果表明該方法操作簡便、靈敏度高、分離良好。故本方法可為鼻炎噴劑的生產質量控制提供科學的分析方法，從而完善該制劑的質量控制指標。

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