離子色譜法測定丙戊酸鈉片的含量

宋玉琴，趙昌軍（淄博市食品藥品檢驗所，山東 淄博 255086）

丙戊酸鈉片為一線廣譜抗癲癇藥，主要用于單純或復雜失神發作、肌陣攣發作、癲癇大發作的單藥或合并用藥治療[1]。由于丙戊酸鈉分子結構中不具有紫外吸收基團，因此，2010年版《中國藥典》（二部）仍然采用雙相酸堿滴定法對其進行含量測定[1]，但該方法專屬性差，而且滴定過程中使用的乙醚危險性高、毒性大、污染環境。目前文獻報道的含量測定方法還有高效液相色譜法[2]、柱前衍生高效液相色譜法[3]、原子吸收分光光度法[4]、氣相色譜法[5]等。由于高效液相色譜法大多采用紫外末端吸收作為檢測波長，因此基線平衡需要很長時間；而衍生化法操作煩瑣，容易引入雜質或干擾峰，或使樣品損失；原子吸收分光光度法僅能控制鈉的含量，專屬性差；氣相色譜法樣品前處理復雜，誤差大，而且有機溶劑的使用還對環境造成一定的污染。離子色譜法作為一種環保的檢測手段，適合檢測能溶于水、并有一定離解度的化合物，不受被測組分是否具有光吸收特征的限制[6]。為此，筆者首次建立離子色譜-抑制電導檢測法測定丙戊酸鈉片的含量。

1 材料

1.1 儀器

ICS-2100型離子色譜儀，包括AS自動進樣器、電導檢測器、陰離子抑制器、自動淋洗液發生器、Chromeleon中文色譜工作站（美國戴安公司）；CP225D十萬分之一天平（德國Sartorius公司）；超純水儀（美國Millipore公司）。

1.2 藥品與試劑

丙戊酸鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號:100963-201302，純度:99.0%）；丙戊酸鈉片（湖南省湘中制藥有限公司，批號:130126、130211、130915，規格:每片0.2 g）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

陰離子交換色譜柱:Ion Pac AS19（250 mm×4.0 mm，7.0 μm）；淋洗液:10 mmol/L KOH溶液；流速:1.0 ml/min；加水抑制模式，抑制電流:20 mA；電導池溫度:35℃；柱溫:30℃；進樣量:25 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液。精密稱取丙戊酸鈉對照品103.40 mg，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 對照品溶液。精密量取對照品貯備液1 ml，置于50 ml量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3 供試品溶液。取本品20片，除去糖衣后，精密稱定，研細；精密稱取約相當于平均片質量的粉末，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾；精密量取續濾液1 ml，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 空白溶液。精密稱取約相當于平均片質量的空白輔料，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾；精密量取續濾液1 ml，置于100 ml量瓶中，用超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液，即得。

2.3 系統適用性試驗

取對照品溶液、供試品溶液、空白溶液，在上述色譜條件下進樣。結果顯示，丙戊酸根離子理論板數＞5000，與空白輔料峰分離度均＞1.5，表明空白輔料不干擾測定，色譜系統的專屬性及系統適用性良好，色譜圖見圖1。

2.4 線性關系試驗

精密量取對照品貯備液0.25、0.5、1.0、2.5、5.0 ml，分別置于50 ml量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，作為系列對照品溶液，以系列對照品溶液質量濃度（x）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標，制作標準曲線。結果回歸方程為y＝0.0343x－0.0184（r＝0.9999），表明丙戊酸鈉檢測質量濃度線性范圍為5.118～102.4 μg/ml。

2.5 精密度試驗

精密量取對照品溶液25 μl，連續進樣6次，連續進樣3 d，測得丙戊酸鈉峰面積的RSD分別為0.4%（n＝6）、0.7%（n＝3），表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一供試品溶液（批號:130211），分別于0、2、4、6、8、12 h進樣，記錄色譜圖，結果峰面積的RSD為0.5%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一批號樣品（批號:130211）平行制備5份供試品溶液并測定，測得丙戊酸鈉片含量的平均值為99.7%，RSD為0.6%（n＝5），表明本方法重復性良好。

2.8 回收率試驗

圖1 離子色譜圖A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.空白溶液；1.丙戊酸鈉Fig 1 Ion chromatogramsA.reference solution；B.sample solution；C.blank solution；1.sodium valproate

精密稱取已知含量的樣品（批號:130211）約相當于1/20平均片質量的片粉6份，分別置于100 ml量瓶中，分別精密加入對照品貯備液10 ml，加超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻；用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液進樣，計算加樣回收率，結果平均回收率為98.77%（RSD＝0.80%，n＝6），表明方法準確度好，見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.9 檢測限和定量限試驗

取對照品溶液，用超純水稀釋成一系列質量濃度遞減的溶液，進樣，記錄色譜圖。按信噪比等于3時測定檢測限，測得丙戊酸鈉的檢測限為93 ng/ml；按信噪比等于10時測定定量限，測得定量限為307 ng/ml。

2.10 樣品含量測定

取不同批號的樣品，每批樣品取3份，按照所建方法和《中國藥典》的方法分別測定含量，同時采用SPSS10.0統計軟件，對兩種方法含量測定結果進行統計分析。結果P＝0.823（＞0.05），按照統計學上95%的置信度，兩種方法含量測定結果差異無統計學意義，見表2。

表2 兩種方法含量測定結果比較（%）Tab 2 Results of content determination by two method（s%）

3 討論

3.1 方法和色譜柱的選擇

離子色譜法具有快速方便、靈敏度高、選擇性好[6]等優點，主要用于檢測能溶于水并有一定離解度的化合物，可以彌補液相色譜、氣相色譜法對離子型藥物分析的不足。丙戊酸鈉能溶于水，在強堿性條件下能夠電離生成丙戊酸根離子，因此本文選用陰離子交換色譜柱進行分離。

3.2 淋洗液的選擇

丙戊酸鈉為弱酸鹽，水溶液中離解度弱，在強堿性溶液中以陰離子形態存在，因此應選用較強的堿為淋洗液，而且對在陰離子交換色譜柱上弱保留的一元羧酸，可用淋洗強度弱的稀OH－[7]，因此，本文選用KOH溶液作為淋洗液。在篩選淋洗液濃度時，發現當KOH溶液濃度為40 mmol/L時，丙戊酸根離子出峰時間過快，與輔料峰無法分離，而且隨著KOH溶液濃度的降低，丙戊酸根離子的出峰延長；但當KOH溶液濃度降低至10 mmol/L時，丙戊酸根與輔料峰達到基線分離，故選此作為淋洗液的濃度。

3.3 抑制電流的選擇

抑制電流的作用是消除淋洗液背景電導的干擾，其選擇原則為在保證靈敏度的前提下，盡量選擇最小的抑制電流:抑制電流過大，被測物峰變小；抑制電流過小，背景電導干擾無法消除，基線噪音大，被測物峰也變小。筆者通過不斷嘗試，最終確定抑制電流為20 mA。

筆者建立的測定丙戊酸鈉片含量的離子色譜法，與傳統的雙相酸堿滴定法相比，專屬性強、工作環境清潔、靈敏度高、結果準確，可用于丙戊酸鈉片的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:二部[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:75.

[2]周莉華，涂瓊，梅步云.HPLC法測定人血清中丙戊酸鈉的濃度[J].中國藥房，2011，22（26）:2441.

[3]李順煒，毛名揚，李國忠.改進的柱前衍生-高效液相色譜法測定人血中丙戊酸鈉[J].中國醫院藥學雜志，2005，25（8）:713.

[4]李舸遠，蔡美明，王玉.原子吸收光譜法測定丙戊酸鈉緩釋片中鈉的含量[J].藥學與臨床研究，2010，18（6）:587.

[5]楊少芳，張華年，徐華.高效毛細管氣相色譜法測定片劑中丙戊酸鈉含量[J].中國醫院藥學雜志，2005，25（5）:434.

[6]劉英，李茜.離子色譜在抗生素藥物分析中的應用[J].藥物分析雜志，2012，32（1）:179.

[7]牟世芬，劉克納.離子色譜方法及應用[M].北京:化學工業出版社，2000:87-88.