氟苯尼考PEG6000固體分散體在大鼠體內(nèi)的生物利用度研究

于欣洋　趙修華　祖元?jiǎng)偂⒀?/p>

摘要[目的]研究氟苯尼考PEG6000固體分散體在大鼠體內(nèi)的生物利用度。[方法]建立大鼠血漿中氟苯尼考的HPLC檢測(cè)方法。用灌喂藥物水溶液的方法，通過(guò)高效液相分析技術(shù)對(duì)氟苯尼考PEG6000固體分散體的血藥濃度進(jìn)行測(cè)定，與氟苯尼考原粉進(jìn)行對(duì)照。[結(jié)果]氟苯尼考PEG6000固體分散體在大鼠體內(nèi)吸收及代謝良好，氟苯尼考固體分散體和氟苯尼考原藥的最高血藥濃度分別為13.44 和3.88 μg/ ml，提高了3.46倍；藥-時(shí)曲線下面積分別為：氟苯尼考原粉AUC0～8 h= 20.12 25 μg/（ ml·h）、氟苯尼考固體分散體AUC0～8 h= 23.22 μg/（ml·h），氟苯尼考-PEG6000固體分散體口服生物利用度與氟苯尼考原粉相比提高了15.39%。[結(jié)論]氟苯尼考PEG6000固體分散體能顯著提高氟苯尼考的生物利用度。

關(guān)鍵詞氟苯尼考PEG6000固體分散體；生物利用度；高效液相分析技術(shù)

中圖分類號(hào)S859文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）09-02513-02

基金項(xiàng)目國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2012BAD21B05）。

作者簡(jiǎn)介于欣洋（1988- ），女，山東濰坊人，碩士研究生，研究方向：植物化學(xué)與植物藥。*通訊作者，教授，博士，博士生導(dǎo)師，從事植物生態(tài)學(xué)和植物資源學(xué)的教學(xué)與研究。

氟苯尼考（Florfenicol），中文名稱為氟洛芬、氟苯尼考、氟甲砜霉素，是在20世紀(jì)80年代后期成功研制的一種新的獸醫(yī)專用氯霉素類的廣譜抗菌藥，用于敏感細(xì)菌所致的豬、雞及魚(yú)的細(xì)菌性疾病，尤其對(duì)呼吸系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著[1-2]。劉洋等[3]選用無(wú)溶劑熔融法固體分散技術(shù)以高分子水溶性物質(zhì)PEG作為載體對(duì)氟苯尼考的水溶性粉進(jìn)行研究，成功改善了其溶解度和溶出速度，制備了氟苯尼考PEG6000固體分散體。筆者以大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，用灌喂藥物水溶液的方法，通過(guò)高效液相分析技術(shù)，對(duì)氟苯尼考PEG6000固體分散體的血藥濃度[4]進(jìn)行測(cè)定，與氟苯尼考原粉進(jìn)行對(duì)照，以期為氟苯尼考的臨床應(yīng)用提供依據(jù)，并為該藥在其他動(dòng)物體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究提供參考[5]。

1材料與方法

1.1儀器分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；固相萃取小柱（Agilent公司C18，1.0 ml）；玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管（0.5 mm×100 mm，華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠）；高效液相色譜儀（Waters公司）；高速離心機(jī)（3K30型，Sigma公司）；數(shù)控超聲波清洗器（KQ250DE型，昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試劑和藥品氟苯尼考對(duì)照品（SigmaAldrich公司，產(chǎn)品貨號(hào)F1427）；氟苯尼考-PGE6000固體分散體（實(shí)驗(yàn)室自制）；氟苯尼考原粉（湖北龍翔藥業(yè)有限公司，含量大于980%，生產(chǎn)批號(hào)為091007）；甲醇（百靈威公司J&K，色譜純）；乙腈（百靈威公司J&K，色譜純）；冰醋酸（天津市天力化學(xué)試劑有限公司，分析純）；肝素鈉（中國(guó)惠世生化試劑有限公司，效價(jià)150 IU/mg，批號(hào)為080808）；去離子水（實(shí)驗(yàn)室自制）。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明系大白鼠12只，雌雄各半，體重（250±15）g，由哈爾濱市腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.4方法

1.4.1氟苯尼考PEG6000固體分散體的制備。按照質(zhì)量比為1∶7分別精確稱量氟苯尼考原粉及PEG6000。首先，將氟苯尼考原粉置于圓底燒瓶中，置于恒溫電磁攪拌電熱套上加熱至熔融，熔融溫度為156～159 ℃；其次，將適量的PEG6000置于70 ℃水浴加熱至熔融；然后將后者加入圓底燒瓶中，電磁攪拌至完全混勻。將熔融物傾倒在冰浴的不銹鋼板上涂成薄片，置冰箱中存放12 h，用藥匙將凝結(jié)的固體分散體刮出，置于真空干燥器中，待脆化后用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，過(guò)80目篩，得到氟苯尼考PEG6000固體分散體，密封保存。

1.4.2大鼠試驗(yàn)。將12只大鼠隨機(jī)分成A、B 2組，A組給藥為氟苯尼考原粉（簡(jiǎn)稱為A藥），B組給藥為氟苯尼考-PEG6000固體分散體（簡(jiǎn)稱為B藥）。按給藥劑量30 mg/kg體重用去離子水分別配制A、B溶液，藥物濃度為1.5 mg/ml，灌喂量為5 ml。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料的研究結(jié)果[6]，確定大鼠眼眶采血的時(shí)間分別為0（空白血漿）、0.25、0.5、1、1.5、2、4、8、12和24 h。分別將A、B藥物溶液以灌胃方式給2組大鼠口服用藥，每只劑量為5 ml，給藥前及給藥過(guò)程中大鼠正常進(jìn)食。用玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管進(jìn)行眼眶采血，每個(gè)采血點(diǎn)取血量為0.5 ml，置于1%肝素鈉1 ml的具塞離心管中。

1.4.3血樣處理。取“1.4.2”中所得血樣離心管，8 000 r/min離心10 min，取上清液0.5 ml，注入已活化好的固相萃取柱，用2.0 ml 70%甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，25 ℃下吹干，殘?jiān)?.5 ml流動(dòng)相溶解，12 000 r/min離心10 min，將上清液置于4 ℃下冷藏備用。其中，0 min所取血樣是為空白血樣。

1.4.4高效液相色譜檢測(cè)。

1.4.4.1液相色譜條件。用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；流動(dòng)相為乙腈-水-冰醋酸（500∶985∶15）[7]；流速為1.0 ml/min；柱溫為20 ℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)λ為 224 nm。經(jīng)“1.4.3”處理后血樣按進(jìn)樣量20 μl進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖和峰面積。

1.4.4.2標(biāo)準(zhǔn)品血清溶液的制備及檢測(cè)。稱取恒重的氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品500 mg，置于500 ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解后，定容成1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。分別量取上述貯備液適量，用蒸餾水稀釋為濃度分別為50、20、10、5、2和1 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。經(jīng)“1.4.3”方法處理后的空白血樣與上述標(biāo)準(zhǔn)溶液混合振蕩均勻，高速離心后吸取上層溶液20 μl進(jìn)行高效液相測(cè)定，記錄色譜圖和峰面積。

2結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品空白血樣溶液的濃度和吸收峰峰面積的關(guān)系進(jìn)行回歸分析，其回歸方程為y=43 680x+141 128（R2=0.999 0）。從圖1可以看出，氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品在波長(zhǎng)224 nm處有最大吸收峰，在0.2～50 μg/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積間線性關(guān)系明顯。

2.2氟苯尼考的高效液相圖譜從圖2可以看出，標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時(shí)間為7.075 min，固體分散體中氟苯尼考的出峰時(shí)間為7.064 min?？瞻籽獦訉?duì)氟苯尼考的高效液相圖譜沒(méi)有影響。

2.3血藥濃度及藥時(shí)曲線將高效液相檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出不同時(shí)間大鼠體內(nèi)的血藥濃度，經(jīng)軟件OriginPro8.0處理可得到氟苯尼考原粉及固體分散體在大鼠體內(nèi)24 h藥時(shí)曲線以及氟苯尼考相對(duì)生物利用度AUC（0-8h）。從圖3可以看出，氟苯尼考原粉與固體分散體的最高血藥濃度分別為3.88和13.44 μg/ml；氟苯尼考原粉AUC（0～8h）= 20.122 5 μg/（ml·h），氟苯尼考固體分散體AUC（0～8h）=23.22 μg/（ml·h）。