山西黑豬肌細胞生成素基因部分序列的擴增

劉勇

摘 要：肌細胞生成素在肌細胞的分化過程中起著關鍵的正向調節作用。根據豬的肌細胞生成素的基因序列設計特異性的擴增引物，以山西黑豬為研究對象，通過PCR擴增，獲得長度為1 493 bp的序列，經測序和基因的同源性比對得出山西黑豬的基因序列與家豬等動物有較高的同源性。結果表明：肌細胞生成素基因可能在山西黑豬肌肉組織發育過程中發揮重要的調控作用。為今后改良黑豬的肌肉品質奠定理論基礎。

關鍵詞：山西黑豬；肌細胞生成素；擴增；應用

中圖分類號：S828.9 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2014）06-0055-02

1 材料與方法

1.1 組織材料及試劑

1.1.1 材料

山西黑豬一頭，來自山西省原平市，取其腿部肌肉一塊，迅速投入液氮。用于RNA的提取。

1.1.2 主要試劑

Trizol 提取試劑盒、反轉錄試劑盒、PCR擴增試劑盒、DNA MarkerDL2000和Rnase抑制劑均購自大連TaKaRa公司。

1.2 RNA提取

將凍存于液氮的山西黑豬退腿部肌肉在液氮中研磨成粉后，按照Trizol試劑盒提供的實驗步驟提取山西黑豬肌肉中的總RNA，用2 %瓊脂糖凝膠電泳檢查提取的RNA的完整性，使用微量核酸蛋白測定儀測定其濃度。并將其歸為500 ng/μL，用于后續實驗中的PCR擴增。

1.3 引物設計

對GeneBank中登錄豬的肌細胞生成素（myogenin）序列（X89007.1、AY912514.1和AY912513.1）進行同源性比較，借助Primer5.0 plus軟件設計用于擴增山西黑豬肌細胞生成素1對特異性引物，預計的擴增產物長度為1 493 bp，引物序列為： F： gtgcctgcctttgttagagc；R： catcctggcagacagtctca。由大連寶生物工程有限公司合成。

1.4 反轉錄及PCR擴增

將提取的山西黑豬肌肉的總RNA，按照TaKaRa公司反轉錄試劑盒提供的實驗方法進行cDNA第一鏈的合成。反轉錄條件為：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。

以反轉錄產物cDNA為模板，以特異引物進行PCR擴增。PCR反應體系為25 μL：cDNA 2 μL、特異上下游引物各0.5 μL、TaqE 0.25 μL、dNTP 2 μL、10×buffer 2.5 μL、無菌水17.25 μL，擴增條件為：95 ℃ 10 min，95 ℃ 10 s，59 ℃ 10 s，72 ℃ 20 s， 72 ℃ 10 min。PCR產物用2 %的瓊脂糖凝膠檢測。擴增產物經割膠、回收、純化后送交大連寶生物工程有限公司雙引物測序。

2 結果

2.1 PCR產物電泳結果

PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳，可見與預期大小相符的特異性條帶（圖1）。

2.2 PCR產物測序結果

3 討論

山西黑豬是由巴克夏豬、 內江豬、山西本地豬雜交培育而成。現主要分布在大同、原平、河曲、五臺和太谷等市縣。其全身為黑色，繁殖力較高，抗逆性較強，耐粗飼生長速度快[1]。作為地方品種，挖掘其肉用方面的優勢，提高其飼養量和生產量勢在必行。因此，運用分子生物學手段，克隆產肉量和肉質相關基因的序列，現實山西黑豬的肉質改良是可行有效的方法。

肌肉的發育過程是一個復雜的生理過程，受眾多的正向和負向調控因子的共同調控，其中生肌調節因子家族在肌肉發育過程中起著重要的正調控作用，并且控制著肌肉發育的整個過程。肌細胞生成素是生肌調節因子MYOD家族成員之一，在肌細胞的分化過程中起著關鍵的調節作用，目前它是研究畜禽肉質性狀的一個重要候選基因[2-4]。本實驗設計1對特異性引物，經PCR擴增獲得1 493 bp的基因序列，與家豬、野豬、牛、馬、羊的同源性比較，同源性分別為：100 %、99 %、99 %、97 %。□□

參考文獻：（4篇，略）