天龍茶中黃芩苷含量測定的研究

葉穎霞 王振華 曾令清 田軍 梁家龍 馬國輝

天龍茶為廣州醫科大學附屬第一醫院院內制劑, 由黃芩、青天葵、防風、紫蘇子等十三味中藥配伍組成, 具有化痰止咳, 健脾和胃的功效。目前, 該制劑尚無含量測定部分,黃芩為本制劑的君藥, 本文將建立天龍茶中黃芩苷的含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津高效液相色譜儀, 紫外檢測器, Labsolutions數據處理軟件系統, 超聲波清洗器, 電子天平。

1.2 試藥 黃芩苷；甲醇, 磷酸, 水為超純水, 其他試劑均為分析純；制劑天龍茶為實驗室自制。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：YMC-Pack ODS-AM (250 mm×4.6 mm, 5 μm), 流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液(40:60)；流速：1.0 ml/min；檢測波長277 nm；進樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品適量, 加甲醇制成每1 ml含22 μg的溶液, 即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取天龍茶粉末約0.15 g, 置于具塞三角瓶中, 加入70%乙醇25 ml, 超聲處理15 min, 放冷,再稱定重量, 用70%乙醇補足減失重量, 搖勻, 過濾, 量取濾液2 ml, 置10 ml量瓶中, 加70%乙醇稀釋至刻度, 搖勻,即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 照供試品溶液的制備方法制得陰性樣品溶液。

2.3 專屬性試驗 吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μl, 分別注入高效液相色譜儀中, 依法測定, 記錄色譜圖(結果見圖1), 對照品黃芩苷保留時間約為25.7 min, 供試品溶液有對應峰顯示, 陰性樣品無對應峰, 結果表明陰性樣品溶液在此條件下對黃芩苷測定無干擾。

圖1 專屬性試驗結果

2.4 線性及范圍考察 取黃芩苷對照品適量, 加甲醇溶解并稀釋, 制成每1 ml約含0.6 mg的對照品溶液, 移取對照品溶液3 ml, 置于25 ml量瓶中, 加甲醇稀釋定容得對照品線性儲備液。吸取線性儲備液0.25、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,分別置于10 ml量瓶中, 加甲醇稀釋定容, 得1～6號線性溶液。取線性溶液, 按照上述色譜條件進樣測定, 記錄峰面積, 繪制標準曲線, 得到回歸方程為Y=37346X-5806.2, r=0.9999, 結果表明, 黃芩苷在1.81～36.27 μg/ml范圍內線性關系良好。

2.5 儀器精密度試驗 在該色譜條件下, 精密吸取21.76 μg/ml黃芩苷對照品溶液10 μl注入HPLC, 連續進樣6次, 記錄峰面積。結果黃芩苷峰面積RSD為0.23%, 說明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 取室溫條件下的同一供試品溶液, 分別于0、3、6、9、12、18、24 h進樣測定黃芩苷峰面積, 結果測得黃芩苷峰面積RSD為0.44%, 結果表明, 在室溫條件下,供試品溶液中黃芩苷在24 h內穩定。

2.7 重復性試驗 取樣品粉末6份, 依法測定供試品中黃芩苷含量。結果樣品中黃芩苷平均質量分數為2.01%, RSD為1.50%, 表明本分析方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的天龍茶粉末6份, 每份約75 mg, 分別加入黃芩苷對照品溶液(713.43 μg/ml)2 ml, 加入70%乙醇23 ml,按照供試品溶液制備方法操作, 依法進樣測定, 結果見表1。

表1 黃芩苷回收率試驗結果

2.9 含量測定 取本品粉末, 分別吸取供試品溶液、對照品溶液各10 μl, 按上述色譜條件測定, 計算含量, 結果見表2。

表2 樣品測定結果

3 討論

本研究通過紫外全波長掃描黃芩苷對照品甲醇溶液, 其在277 nm和316 nm有最大吸收, 參考《中國藥典》2010版一部黃芩藥材項的含量測定, 確定檢測波長定為277 nm。黃芩苷為多羥基黃酮類化合物, 當以甲醇-水或乙腈-水為流動相時, 普通ODS柱對其吸附性差、選擇性較小, 無法達到有效分離。參考文獻及2010版《中國藥典》一部, 在流動相中添加磷酸, 可有效提高色譜柱分離效果, 最終確定甲醇-0.2%磷酸(40:60)為流動相。

本研究采用HPLC法測定天龍茶中黃芩苷含量, 方法學驗證表明, 其精密度、線性、穩定性、重復性、回收率、耐用性等均能滿足定量分析要求, 可用于天龍咳喘靈膠囊的質量控制。

［1］ 國家藥典委員會, 中華人民共和國藥典(一部).中國醫藥科技出版, 2010:282.

［2］ 郝晶晶, 甄會賢, 趙正保.鼻炎靈片中黃芩苷含量測定方法的研究.山西中醫學院學報, 2013, 14(1):28-30.